細(xì)胞株名稱(chēng):A549/Taxol耐藥細(xì)胞
種屬:人組織來(lái)源:肺癌
生長(zhǎng)特性:貼壁
生長(zhǎng)形態(tài)特征:上皮細(xì)胞
微生物及支原體檢測(cè):陰性
安全性:所有腫瘤和病毒轉(zhuǎn)染的細(xì)胞均視為有潛在的生物危害性,必須在二級(jí)生物安全臺(tái)內(nèi)操作,并請(qǐng)注意防護(hù),所有廢液及接觸過(guò)此細(xì)胞的器皿需高壓滅菌后方能丟棄。
A549/Taxol耐藥細(xì)胞培養(yǎng)條件:*培養(yǎng)基:90%RPMI-1640+10%胎牛血清+50ng/ml Taxol血清我們推薦用:
GIBCOFBS-10099-141 或 HYCLONEFBS-SH30084.03。
培養(yǎng)條件:37.0C carbon dioxide(CO2),5%
觀(guān)察細(xì)胞最好在低倍鏡(4 或 5X 物鏡)下進(jìn)行,否則不能準(zhǔn)確判斷細(xì)胞的傳代密度??醇?xì)胞的形態(tài)請(qǐng)?jiān)?10X 或 20X 物鏡下。瓶中運(yùn)輸培養(yǎng)基不能重復(fù)再用,請(qǐng)換用加雙抗的新培養(yǎng)基,細(xì)胞凍存后,培養(yǎng)基中可不加任何抗生素。有些細(xì)胞貼壁不牢,如發(fā)現(xiàn)貼壁細(xì)胞有脫落,可離心吹打后接種到新瓶?jī)?nèi)。收到細(xì)胞后,若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細(xì)胞有污染,請(qǐng)及時(shí)與我們聯(lián)系。
凍存方法:凍存液:90%胎牛血清,10%DMSO
儲(chǔ)存:液氮儲(chǔ)存
何謂FBS, FCS, CS, HS ?
FBS (fetal bovine serum) 和FCS (fetal calf serum) 是相同的意思, 兩者都是指胎牛血清, FCS 乃錯(cuò)誤的使用字眼, 請(qǐng)不要再使用。CS (calf serum) 則是指小牛血清。HS (horseserum) 則是指馬血清。
培養(yǎng)細(xì)胞時(shí)應(yīng)使用5 % 或10% CO2?或根本沒(méi)有影響?
一般培養(yǎng)基中大都使用HCO3-/CO32-/H+ 作為pH 的緩沖系統(tǒng), 而培養(yǎng)基中NaHCO3 的含量將決定細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)應(yīng)使用的CO2 濃度。當(dāng)培養(yǎng)基中NaHCO3 含量為每公升3.7 g 時(shí),細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)應(yīng)使用10 % CO2;當(dāng)培養(yǎng)基中NaHCO3 為每公升1.5 g 時(shí), 則應(yīng)使用5 % CO2 培養(yǎng)細(xì)胞。
何時(shí)須更換培養(yǎng)基?
視細(xì)胞生長(zhǎng)密度而定, 或遵照細(xì)胞株基本數(shù)據(jù)上之更換時(shí)間,按時(shí)更換培養(yǎng)基即可。
培養(yǎng)基中是否須添加抗生素?
除于特殊篩選系統(tǒng)中外, 一般正常培養(yǎng)狀態(tài)下, 培養(yǎng)基中不應(yīng)添加任何抗生素。
附著性細(xì)胞繼代時(shí)所使用之trypsin-EDTA 濃度?應(yīng)如何處理?
一般使用之trypsin-EDTA 濃度為0.05% trypsin-0.53mMEDTA.4 Na。第一次開(kāi)瓶后應(yīng)立即少量分裝于無(wú)菌試管中, 保存于–20 ℃,避免反復(fù)冷凍解凍造成trypsin 之活性降低, 并可減少污染之機(jī)會(huì)。