一、“16000-044,胎牛血清（北美）”概述：
 

　　北美GIBCO16000-044胎牛血清采用健康母牛懷孕的八月齡胎牛血液為原料，經(jīng)無(wú)菌采集、分離、微孔過(guò)濾后而成。本產(chǎn)品無(wú)支原體、無(wú)牛病毒、無(wú)噬毒體、內(nèi)毒素含量低于1EU/ml，適用于細(xì)胞、組織器官培養(yǎng)、細(xì)胞株保藏、單抗研制，是醫(yī)院、科研院校、動(dòng)物疫苗、生物制藥廠家重要培養(yǎng)基之一。
 

　　二、使用前處理及儲(chǔ)存條件：
 

　　北美GIBCO16000-044胎牛血清使用前處理：大部分血清在使用前必須滅活處理，即56℃30分鐘。滅活的目的是去除血清中的補(bǔ)體成分，避免補(bǔ)體對(duì)細(xì)胞產(chǎn)生毒性作用。血清經(jīng)過(guò)滅活也會(huì)損失一些對(duì)細(xì)胞有利的成分，如生長(zhǎng)因子，因此也有人提出血清不經(jīng)滅活直接用于培養(yǎng)，這樣做的前提是確認(rèn)血清中不含補(bǔ)體成分。對(duì)于一些品質(zhì)高的胎牛血清和新牛血清可以考慮不經(jīng)滅活直接用于細(xì)胞培養(yǎng)。
 

　　儲(chǔ)存條件：血清一般儲(chǔ)存于-20℃，同時(shí)應(yīng)避免反復(fù)凍融。購(gòu)買大包裝的血清后，首先要滅活處理，然后分裝成小包裝，儲(chǔ)存于-20℃，使用前融化。融化時(shí)現(xiàn)置于4℃。融化后的血清在4℃不宜長(zhǎng)時(shí)間存放，應(yīng)盡快使用。
 

　　三、16000-044,胎牛血清（北美特級(jí)）操作問(wèn)題：
 

　　如何避免沉淀物的產(chǎn)生?
 

　　1、解凍血清時(shí)，請(qǐng)按照所建議的逐步解凍法(-2O。C至4。C至室溫)，若血清解凍時(shí)改變的溫度太大(如-20。C至37。C)，實(shí)驗(yàn)顯示非常容易產(chǎn)生沉淀物。
 

　　2、解凍血清時(shí)，請(qǐng)隨時(shí)將之搖晃均勻，使溫度及成分均一，減少沉淀的發(fā)生
 

　　3、請(qǐng)勿將血清置于37。C太久。若在37。C放置太久，血清會(huì)變得混濁，同時(shí)血清中許多較不穩(wěn)定的成分也會(huì)因此受到損害，而影響血清的質(zhì)量。
 

　　4、血清的熱滅活非常容易造成沉淀物的增多，若非必要，可以無(wú)須做此步驟。
 

　　5、若必須做血清的熱滅活，請(qǐng)遵守56。C，30分鐘的原則，并且隨時(shí)搖晃均勻。溫度過(guò)高，時(shí)間過(guò)久或搖晃不均勻，都會(huì)造成沉淀物的增多。血清解凍后發(fā)現(xiàn)有絮狀沉淀物出現(xiàn)，該如何處理?　欲去除這些絮狀沉淀物，可以將血清分裝至無(wú)菌離心管內(nèi)，以400g稍微離心，上清液即可接著加入培養(yǎng)基內(nèi)一起過(guò)濾。但不建議以過(guò)濾的方法去除這些絮狀沉淀物，因?yàn)樗赡軙?huì)阻塞過(guò)濾膜。
 

　　四、“”常見(jiàn)問(wèn)題處理：
 

　　1.血清應(yīng)保存在-5℃至-2O℃。然而，若存放于4℃時(shí)，請(qǐng)勿超過(guò)一個(gè)月。若您一次無(wú)法用完一瓶，建議您無(wú)菌分裝血清至恰當(dāng)?shù)臏缇萜鲀?nèi)，再放回冷凍。
 

　　2.解凍血清先置于2～8℃冰箱使之融解，然后在室溫下使之全融。但必須注意的是，融解過(guò)程中必須規(guī)則地?fù)u晃均勻。
 

　　3.血清中沉淀物的出現(xiàn)有許多種原因，但zui普遍的原因是由于血清中脂蛋白的變性所造成，而血纖維蛋白(形成凝血的蛋白之一)在血清解凍后，也會(huì)存在于血清中，亦是造成沉淀物的主要原因之一。但這些絮狀沉淀物，并不影響血清本身的質(zhì)量。若您欲去除這些絮狀沉淀物，可以將血清分裝至無(wú)菌離心管內(nèi)，以400g稍微離心,上清液即可接著加入培養(yǎng)基內(nèi)一起過(guò)濾。我們不建議您以過(guò)濾的方法去除這些絮狀沉淀物，因?yàn)樗赡軙?huì)阻塞您的過(guò)濾膜。
 

　　4.加熱可以滅活補(bǔ)體系統(tǒng)。激活的補(bǔ)體參與溶解細(xì)胞事件，刺激平滑肌收縮，細(xì)胞和血小板釋放組胺，激活淋巴細(xì)胞和巨噬細(xì)胞。在免疫學(xué)研究，培養(yǎng)ES細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞時(shí)，推薦使用熱滅活血清。
 

　　5.做熱滅活有必要嗎?實(shí)驗(yàn)顯示，經(jīng)過(guò)正確處理的熱滅活血清，對(duì)大多數(shù)的細(xì)胞而言是不需要的。經(jīng)此處理過(guò)的血清對(duì)細(xì)胞的生長(zhǎng)只有微小的促進(jìn)，或*沒(méi)有任何作用，甚至通常因?yàn)楦邷靥幚碛绊懥搜宓馁|(zhì)量，而造成細(xì)胞生長(zhǎng)速率的降低。而經(jīng)過(guò)熱處理的血清，沉淀物的形成會(huì)顯著的增多，這些沉淀物在倒置顯微鏡下觀察，像是“小黑點(diǎn)”，常常會(huì)讓研究者誤以為是血清遭受污染，而把血清放在37℃環(huán)境中，又會(huì)使此沉淀物更增多，使研究者誤認(rèn)為是微生物的fen裂擴(kuò)增。若非必須，可以不需要做熱處理這一步。不但節(jié)省時(shí)間，更確保血清的質(zhì)量!
 

　　6.細(xì)胞培養(yǎng)中出現(xiàn)黑點(diǎn)是污染嗎？如何處理？一旦您在細(xì)胞培養(yǎng)的過(guò)程中發(fā)現(xiàn)有黑點(diǎn)生成，首先，要肉眼觀察培養(yǎng)基是否混濁，然后，在鏡下觀察培養(yǎng)細(xì)胞生長(zhǎng)的狀態(tài)，黑點(diǎn)是否游動(dòng)。如果細(xì)胞被污染，微生物則會(huì)大量繁殖，培養(yǎng)基就會(huì)迅速變黃、變混濁。污染包括細(xì)菌污染、支原體污染等。如果在鏡下觀察細(xì)胞，生長(zhǎng)狀態(tài)良好，與黑點(diǎn)出現(xiàn)前相比，沒(méi)有任何變化，那么，黑點(diǎn)的出現(xiàn)可能與以下幾種情況有關(guān)：
 

　　(1)細(xì)胞生長(zhǎng)過(guò)老，破碎的細(xì)胞殘骸
 

　　(2)血清質(zhì)量不好，反復(fù)凍融的結(jié)果
 

　　(3)配制培養(yǎng)基的pH值偏高，不宜細(xì)胞生長(zhǎng)
 

　　(4)配制培養(yǎng)基的水質(zhì)、容器不合格?？蓱?yīng)用離心、過(guò)濾的方法去除這些黑點(diǎn)
 

　　(5)培養(yǎng)原代細(xì)胞中出現(xiàn)小黑點(diǎn)，可能是原代組織中的雜質(zhì)，多次傳代可以消除