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簡述凝膠層析技術的原理和過程

來源:上海遠慕生物科技有限公司   2024年04月19日 09:55  

凝膠層析(又叫凝膠過濾或分子篩)凝膠層析是指混和物隨流動相流經固定相的層析柱時,混合物中各組分按其分子大小不同而被分類的技術。


葡聚糖凝膠G.jpg

1.  原理

凝膠層析的固定相是凝膠。凝膠是一種不帶電荷的具有三維空間多孔網狀結構的物質,凝膠的每個顆粒內部都具有很多細微的小孔,如同篩子一樣。

常用凝膠有瓊脂糖凝膠、聚丙烯酰胺凝膠、葡聚糖凝膠等。

葡聚糖凝膠介質是由多聚葡聚糖與環(huán)氧綠丙烷交連而成。zui常用的葡聚糖凝膠層析介質是Sephadex G系列,不同型號的凝膠用G表示,G代表交聯度,從G10到G100?!癎”后面的數字表示每10g干膠的吸水量,可根據待分離混和物分子量大小選用不同“G”值的凝膠。

2.  分離過程:

樣品隨洗脫液的流動下移

3.  影響凝膠柱層析的主要因素

(1)層析柱的選擇與裝填層析柱的大小應根據分離樣品量的多少及對分辨率的要求而定。凝膠柱填裝后用肉眼觀察應均勻、無紋路、無汽泡。

(2)流動相――洗脫液的選擇:是含有一定濃度鹽的緩沖液,目的是為了防止凝膠可能有吸附作用。其選擇主要取決于待分離樣品,一般來說只要能溶解洗脫物質,并不使其變性的緩沖液都可用于凝膠層析。

(3)加樣量:加樣量的多少應根據具體的實驗而定:一般分級分離時加樣量約為凝膠柱床體積的1%-5%,而分組分離時加樣量約為凝膠柱床體積的10%-25%.

(4)凝膠再生:葡聚糖凝膠再生使用NaOH(0.2M)和NaCl(0.5M)混合液處理。

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產品編號 產品名稱
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SY2267    DEAE-葡聚糖凝膠A-25
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SY2350    Q-瓊脂糖凝膠HP
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SY2352    Q-瓊脂糖凝膠FF
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SY2559    谷胱甘肽-瓊脂糖凝膠H.P.
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SY2561    苯甲脒-瓊脂糖凝膠6B
SY2562    苯甲脒-瓊脂糖凝膠4FF
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SY2566    明膠-瓊脂糖凝膠4FF
SY2567    環(huán)氧活化-瓊脂糖凝膠6B
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SY2650    DEAE 纖維素DE-32
SY2651    DEAE 纖維素DE-52
SY2652    羧甲基纖維素CM-52
SY2664    羧甲基纖維素CM-32


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