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所 在 地西安市
更新時(shí)間:2024-07-26 11:37:05瀏覽次數(shù):250次
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綠色熒光蛋白標(biāo)記小鼠細(xì)胞
英文名稱:MFC-GFP
MFC-GFP小鼠細(xì)胞綠色熒光蛋白標(biāo)記培養(yǎng)步驟
一、復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入5mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加4-6mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或?qū)⒓?xì)胞懸液加入6cm皿中),培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
二、細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
三、細(xì)胞凍存:
1、細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)瓶的80%面積時(shí),棄25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液,用PBS清洗細(xì)胞一次;
2、添加0.25%消化液約1ml至培養(yǎng)瓶中,倒置顯微鏡下觀察,待細(xì)胞回縮變圓后加入培養(yǎng)液終止消化,輕輕吹打細(xì)胞使之脫落,然后將懸液轉(zhuǎn)移至15ml離心管中,1000rpm離心5min;
3、用適量的凍存液重懸細(xì)胞,并放置于凍存管中;
4、先將細(xì)胞凍存管放置于-20℃ 1.5h,然后將其移入-80℃
綠色熒光蛋白標(biāo)記小鼠細(xì)胞
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以上資料來自小編MSQ,2023.10.7
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