要復蘇RAW264.7巨噬細胞,首先需要將含有1 mL細胞懸液的凍存管從液氮中取出并快速解凍于37℃水浴中,然后將其轉(zhuǎn)移到1 mL新鮮培養(yǎng)基的無菌管中,并ce底混合均勻。
接下來,使用1000 rpm的離心速度離心5分鐘,將上清液倒掉,隨后再加入1 mL培養(yǎng)基并充分重懸細胞。
將懸液加入含有適量培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿或瓶中(10ml/10 cm皿),并將其放置在培養(yǎng)箱中過夜培養(yǎng)(37℃,5% CO2)。第二天檢查細胞的生長狀態(tài)和密度,以確定是否需要進行傳代操作。通過這些步驟,可以有效地復蘇RAW264.7巨噬細胞,并為其后續(xù)培養(yǎng)提供良好的基礎。
RAW 264.7細胞的詳細復蘇具體步驟一
【準備工作】
水浴鍋:預熱至37℃。
培養(yǎng)基:提前復溫至室溫或37℃。
離心機:設置好轉(zhuǎn)速(通常為1000 rpm)。
RAW 264.7細胞的詳細復蘇具體步驟二
【解凍細胞】
取出細胞:從液氮罐中取出凍存管,觀察管內(nèi)無液氮的情況下,捏住管蓋。
水浴解凍:將凍存管迅速浸入37℃的水浴鍋中,輕輕搖晃,直到細胞融化至米粒大小的冰塊時終止水浴,整個過程不超過2分鐘。
RAW 264.7細胞的詳細復蘇具體步驟三
【離心和重懸】
離心:將解凍后的細胞懸液轉(zhuǎn)移至離心管,以1000 rpm離心3分鐘,棄去上清液。
重懸:加入預熱的培養(yǎng)基,輕柔重懸細胞。
RAW 264.7細胞的詳細復蘇具體步驟四
【接種和培養(yǎng)】
接種:將重懸后的細胞懸液接種到新的培養(yǎng)瓶中,輕輕混勻。
培養(yǎng):將培養(yǎng)瓶放入37℃、5% CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
觀察:復蘇24小時后,觀察細胞的貼壁情況,確保細胞健康生長。
【注意事項】
快速操作:整個復蘇過程應盡可能在5-10分鐘內(nèi)完成,以確保細胞的高存活率。
防護措施:在水浴解凍時,使用一次性PE手套包住凍存管,避免直接接觸水源,防止污染。
細胞狀態(tài):定期觀察細胞形態(tài),確保細胞處于健康狀態(tài)。
通過以上步驟,研究人員可以有效地復蘇RAW 264.7細胞,確保其在后續(xù)實驗中的良好狀態(tài)。
培養(yǎng)基:中科百抗RPMI1640,DMEM培養(yǎng)基
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