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一、傳代培養(yǎng)

傳代培養(yǎng)是指需要將培養(yǎng)物分割成小的部分，重新接種到另外的培養(yǎng)器皿（瓶）內，再進行培養(yǎng)的過程。對單層培養(yǎng)而言，80%匯合或剛匯合的細胞是較理想的傳代階段。傳代培養(yǎng)中的細胞傳代培養(yǎng)（subculture），當原代培養(yǎng)成功以后，隨著培養(yǎng)時間的延長和細胞不斷分裂，一則細胞之間相互接觸而發(fā)生接觸性抑制，生長速度減慢甚至停止；另一方面也會因營養(yǎng)物不足和代謝物積累而不利于生長或發(fā)生中毒。

二、RAW264.7細胞傳代步驟

在進行RAW264.7細胞傳代時，首先需要將舊培養(yǎng)基棄去，并使用PBS洗滌細胞1-2次，確保細胞表面干凈。然后向培養(yǎng)瓶中加入2 mL PBS，使其浸潤所有細胞，輕輕吹打細胞以將其吹下，將細胞懸液收集至無菌離心管中。使用1000 rpm的離心速度離心5分鐘，棄去上清液，再加入1-2 mL培養(yǎng)基并充分重懸細胞。

接下來，將懸液按1:2的比例進行傳代至新的培養(yǎng)皿或培養(yǎng)瓶中，并將其置于培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng)。通過這些步驟，可以有效地進行RAW264.7細胞的傳代操作，促進細胞的增殖和持續(xù)生長，以維持細胞系的活力和穩(wěn)定性。傳代是細胞培養(yǎng)中的重要步驟，有助于確保RAW264.7細胞在研究中的連續(xù)性和穩(wěn)定性。

三、RAW264.7細胞凍存具體步驟

1. 首先需要收集細胞并將其轉移至無菌離心管中。使用1000 rpm的離心速度離心5分鐘，將上清液棄去。

2. 隨后，向細胞中添加1 ml細胞凍存液（包含20% FBS的培養(yǎng)基和10% DMSO），輕輕吹打混勻，將1 ml細胞懸液吸取至凍存管中，并做好詳細的標記。

3. 將凍存管置于梯度降溫凍存盒中，并將其放入-80℃冰箱中過夜，確保冷凍過程緩慢進行。

4. 隨后，將已凍存的細胞轉移至液氮罐中進行長期儲存，以確保細胞的保存和使用。通過這些步驟，可以有效地進行RAW264.7巨噬細胞的凍存，以供日后實驗或應急需求使用。

四、推薦使用產品

凍存液推薦：WAKO無血清凍存液

實驗中會用到的PBS推薦：