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二代測序介紹：

表觀遺傳學(xué)(epigenetics)是目前分子生物學(xué)研究的熱點之一，DNA甲基化測序是表觀遺傳學(xué)的重要內(nèi)容，是基因組DNA的主要表觀遺傳修飾形式之一。DNA甲基化是指在DNA甲基轉(zhuǎn)移酶(DNMTs)的催化下，將甲基基團(tuán)轉(zhuǎn)移到胞嘧啶堿基上的一種修飾方式。它主要發(fā)生在富含雙核苷酸CpG島的區(qū)域。正常情況下CpG島是以非甲基化形式(活躍形式)存在的，DNA甲基化可導(dǎo)致基因表達(dá)沉默。DNMTs的活性異常與疾病有密切的關(guān)系。對于維持正常細(xì)胞功能、傳遞基因組遺傳印記、胚胎發(fā)育以及人類腫瘤發(fā)生，起著至關(guān)重要的作用。

上海翼和生物通過亞硫酸氫鹽（bisulfite）處理，用多重PCR擴(kuò)增目的片段，添加barcode和測序通用接頭，在Illumina X10二代測序平臺對PCR產(chǎn)物進(jìn)行高通量測序，利用生物信息學(xué)方法，精確定量計算目標(biāo)區(qū)間內(nèi)的甲基化位點的甲基化狀態(tài)，在完成目標(biāo)區(qū)域檢測的同時大幅降低研究費用。

Hi-MethylSeq結(jié)合了亞硫酸鹽轉(zhuǎn)換、靶向擴(kuò)增子高通量測序技術(shù)，可實現(xiàn)多區(qū)段、多位點的甲基化精確定量分析。本方法適用于感興趣的目的片段的甲基化研究，在大樣本中進(jìn)一步確認(rèn)全基因組甲基化研究挑選的陽性位點。

重亞硫酸鹽處理是DNA甲基化測序中基因組DNA處理的金標(biāo)準(zhǔn)，是一個化學(xué)過程，可造成DNA的損傷，很難同時實現(xiàn)100%的轉(zhuǎn)換效率和保持DNA的完整性，二者需要做出一定的平衡。Hi-MethylSeq目標(biāo)區(qū)域之外選取3段非CpG島序列作為內(nèi)對照，準(zhǔn)確評估樣本的轉(zhuǎn)化率。