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目錄:北京蘭博利德商貿(mào)有限公司>>酵母相關(guān)>>酵母轉(zhuǎn)化>> L7278-100T/500T酵母菌落PCR試劑盒(堿裂解法)

酵母菌落PCR試劑盒(堿裂解法)
  • 酵母菌落PCR試劑盒(堿裂解法)
參考價(jià)128-599
具體成交價(jià)以合同協(xié)議為準(zhǔn)

參考價(jià):¥128 ~ ¥599

具體成交價(jià)以合同協(xié)議為準(zhǔn)
  • LABLEAD 品牌
  • L7278-100T/500T 型號
  • 代理商 廠商性質(zhì)
  • 北京市 所在地
規(guī)格

100T 500T

屬性

供貨周期:現(xiàn)貨 貨號:L7278 應(yīng)用領(lǐng)域:生物產(chǎn)業(yè)

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規(guī)格
100T128元9999件可售
500T599元9999件可售

更新時(shí)間:2024-10-29 09:18:50瀏覽次數(shù):204評價(jià)

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供貨周期 現(xiàn)貨 貨號 L7278
應(yīng)用領(lǐng)域 生物產(chǎn)業(yè)
蘭博利德生產(chǎn)的酵母菌落PCR試劑盒(堿裂解法)是一種非常便捷的用于釀酒酵母、畢赤酵母等菌株在質(zhì)粒轉(zhuǎn)化后陽性克隆菌落的PCR篩選和鑒定的試劑盒。本試劑盒提供了Yeast Lysis Buffer用于破壞酵母細(xì)胞壁,并提供了Yeast Colony PCR Mix (Red, 2X)用于進(jìn)行PCR擴(kuò)增。Yeast Colony PCR Mix (Red, 2X)是含有紫紅色和黃色染料

酵母菌落PCR試劑盒(堿裂解法)

貨號:L7278

儲存條件:

-20oC保存,至少一年有效。

Yeast Lysis Buffer和Neutralization Buffer可以室溫或4oC保存,至少一年有效。

Yeast Colony PCR Mix (Red, 2X)盡量避免反復(fù)凍融。

產(chǎn)品組分:

組分

100T

500T

A. Yeast Lysis Buffer

1.1ml

5.5ml

B. Neutralization Buffer

1.1ml

5.5ml

C. Yeast Colony PCR Mix (Red, 2x)

1ml

1ml*5

產(chǎn)品描述

蘭博利德生產(chǎn)的酵母菌落PCR試劑盒(堿裂解法)是一種非常便捷的用于釀酒酵母、畢赤酵母等菌株在質(zhì)粒轉(zhuǎn)化后陽性克隆菌落的PCR篩選和鑒定的試劑盒。本試劑盒提供了Yeast Lysis Buffer用于破壞酵母細(xì)胞壁,并提供了Yeast Colony PCR Mix (Red, 2X)用于進(jìn)行PCR擴(kuò)增。Yeast Colony PCR Mix (Red, 2X)是含有紫紅色和黃色染料(電泳位置分別約2.5kb和10bp)的2倍濃度的PCR預(yù)混液,含有2X Taq DNA Polymerase、2X PCR Buffer、2X dNTP和2X Loading Buffer等,用戶只需加入酵母菌落裂解液、引物和水即可進(jìn)行PCR擴(kuò)增,并且擴(kuò)增完畢后可以直接上樣電泳。同時(shí)提供了Yeast Lysis Buffer在PCR反應(yīng)前對酵母進(jìn)行有效預(yù)處理,可以充分釋放酵母DNA,能確保有效進(jìn)行酵母菌落PCR,從而大大縮短酵母轉(zhuǎn)化后陽性克隆鑒定的時(shí)間,提高實(shí)驗(yàn)效率。

酵母細(xì)胞的細(xì)胞壁主要成分為多糖(85%-90%)和蛋白質(zhì)(10%-15%),其中多糖是由甘露聚糖、β-葡聚糖和少量的幾丁質(zhì)等組成,處于細(xì)胞壁內(nèi)層的β-葡聚糖與幾丁質(zhì)共價(jià)相連,起到細(xì)胞骨架的作用;而外層的甘露聚糖與中層蛋白質(zhì)中的絲*酸或蘇*酸以O(shè)-糖苷鍵相連接,形成的甘露糖蛋白覆蓋于細(xì)胞表面,給予酵母細(xì)胞一定的韌性。酵母細(xì)胞壁*特的結(jié)構(gòu)致使其DNA難以被簡單的PCR加熱過程所釋放,導(dǎo)致很多將酵母直接作為模板進(jìn)行PCR檢測的試劑盒成功率都比較低。

本試劑盒使用非常便捷。本試劑盒中提供的Yeast Colony PCR Mix (Red, 2X)已經(jīng)含有所有的通用組分,用戶只需自備引物和水即可對酵母菌落進(jìn)行PCR擴(kuò)增。它大大簡化了PCR操作,使操作更加快捷,也減少了PCR操作過程中可能導(dǎo)致的污染;同時(shí)Yeast Colony PCR Mix (Red, 2X)中已經(jīng)包含了上樣緩沖液組分,PCR擴(kuò)增結(jié)束后即可直接上樣電泳,無需添加上樣緩沖液。

本試劑盒中提供了雙色染料,便于電泳時(shí)觀察電泳進(jìn)程。本試劑盒中的Yeast Colony PCR Mix (Red, 2X)加入了紫紅色和黃色的電泳示蹤染料(整體呈現(xiàn)紅色),其在濃度為1%瓊脂糖膠中的遷移位置分別大約位于2.5kb和10bp處。PCR結(jié)束后可直接進(jìn)行電泳檢測,無需再添加上樣緩沖液。紫紅色和黃色示蹤染料不會影響對相應(yīng)DNA條帶的觀察和檢測。

使用方法:

1. 酵母菌落的裂解

a. 準(zhǔn)備PCR管(例如蘭博利德生產(chǎn)的PCRG-1G 0.2ml優(yōu)級PCR單管 ),每管中加入10μl Yeast Lysis Buffer。

b. 用無菌吸頭挑取0.2-1mm酵母單克隆至含10μl Yeast Lysis Buffer的PCR管中,吹打混勻或Vortex混勻,低速離心數(shù)秒使液體聚集在管底。同時(shí)對于該菌落進(jìn)行標(biāo)記或同時(shí)接種該菌落到液體培養(yǎng)基或新的平板上。

注:菌體過多可能會影響Yeast Lysis Buffer對酵母的裂解并影響后續(xù)PCR反應(yīng),菌體量通常不宜超過約2μl。

c. 在PCR儀上95oC加熱5分鐘,以充分釋放酵母的DNA。

d. 加入10μl Neutralization Buffer,混勻,后續(xù)即可作為DNA模板用于PCR檢測。

2. 酵母菌落PCR反應(yīng)體系的設(shè)置:

a. 室溫融解Yeast Colony PCR Mix (Red, 2X),上下顛倒輕輕混勻后低速離心數(shù)秒。

b. 參考下表在冰浴上設(shè)置PCR反應(yīng)體系:

試劑

使用量

最終濃度

Ultrapure water

7.4μl

-

Primer mix (5μM each)

1.6μl

0.4μM each

Yeast Colony PCR Mix (Red, 2X)

10 μl

1X

Total volume

19 μl

-

注:通常引物的終濃度為0.2μM時(shí)可獲得良好的檢測效果,也可以根據(jù)情況在0.1-1.0μM范圍內(nèi)調(diào)整引物的終濃度。擴(kuò)增效率不高的情況下,可提高引物的濃度;發(fā)生非特異性反應(yīng)時(shí),可降低引物濃度。超純水可以選購D0055WJ(Lablead DNase/RNase-Free, Sterile Water)。

c. 吸取步驟1d準(zhǔn)備好的DNA模板1μl至配制好的19μl PCR反應(yīng)體系中,輕輕吹打混勻或輕微Vortex混勻,室溫低速離心數(shù)秒,使液體聚集在管底。

d. 如果所使用的PCR儀有熱蓋則省略本步驟。如果PCR儀沒有熱蓋,則在管內(nèi)滴入一滴石蠟油(M8410 Mineral oil)。

e. 把設(shè)置好的PCR反應(yīng)管置于PCR儀上,開始PCR反應(yīng)。

3. PCR反應(yīng)參數(shù)的設(shè)置可以參考如下示例:

Step1(起始變性): 94oC 3min;Step2(變性): 94oC 30sec;Step3(退火): 55oC 30sec

Step4(延伸): 72oC 1min/kb;Step5(循環(huán)): Go To Step2 for 30 cycles;Step6(最終延伸): 72oC 10min

Step7(臨時(shí)保存): 4oC forever

注1:PCR反應(yīng)的設(shè)置需根據(jù)模板、引物、PCR產(chǎn)物的長度和GC含量等條件的不同,設(shè)定不同的PCR反應(yīng)條件包括溫度、時(shí)間和循環(huán)數(shù)等。

注2:Step4(延伸)的時(shí)間設(shè)置需根據(jù)PCR產(chǎn)物的長度進(jìn)行設(shè)置,通常每kb產(chǎn)物的延伸時(shí)間為1分鐘。例如PCR產(chǎn)物的長度為1kb,則延伸時(shí)間可以設(shè)置為1分鐘,PCR產(chǎn)物的長度為2kb,則延伸時(shí)間可以設(shè)置為2分鐘,以此類推。

注3:對于初次進(jìn)行的PCR,為盡量確??梢詳U(kuò)增出預(yù)期的PCR產(chǎn)物,可以把循環(huán)數(shù)設(shè)置為35。對于需進(jìn)行半定量或定量的PCR反應(yīng)循環(huán)數(shù)一定要進(jìn)行適當(dāng)優(yōu)化,使PCR反應(yīng)沒有達(dá)到平臺期。

4. 結(jié)果檢測

PCR結(jié)束后直接取5-10μl進(jìn)行電泳檢測,無需添加上樣緩沖液。

注意事項(xiàng):

①酵母菌落較難裂解,裂解時(shí)請注意吹打混勻或Vortex震蕩混勻。

②由于PCR反應(yīng)非常靈敏,可使目的基因擴(kuò)增超過1000萬倍,在設(shè)置PCR反應(yīng)時(shí)請注意避免微量待擴(kuò)增DNA的污染,并盡量考慮設(shè)置不加模板的空白對照以確認(rèn)是否有待擴(kuò)增DNA的污染。

③避免反復(fù)凍融本產(chǎn)品,多次反復(fù)凍融可能使產(chǎn)品性能下降。

④使用本產(chǎn)品前,一定要完*融化,并上下顛倒輕輕混勻后才能使用,并盡量避免產(chǎn)生氣泡。

⑤超純水推薦選購D0055WJ(Lablead DNase/RNase-Free, Sterile Water)。

⑥本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學(xué)研究用,不得用于臨床診斷或治療,不得用于食品或藥品,不得存放于普通住宅內(nèi)。

⑦為了您的安全和健康,請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。



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