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一、簡介

His標簽蛋白（競爭法）快速檢測試劑盒是基于膠體金側向?qū)游黾夹g的蛋白半定量檢測試劑。主要結構由樣品墊、金標墊、層析膜、吸水紙、背板等組成。在層析膜上固定有金標抗體的二抗（質(zhì)控線）和帶有His-tag的蛋白（檢測線）；在金標墊上固定有膠體金標記的抗His-Tag的單克隆抗體。當待測樣品滴加到樣品墊時，通過毛細作用，液體向金標墊移動。當不含有His-Tag蛋白的待測樣品通過金標墊時，His-Tag金標抗體隨著層流移動到檢測線位置，與固定在檢測線上的帶有His-tag的蛋白發(fā)生特異性結合，并在檢測線上形成酒紅色條帶；當含有His-Tag蛋白的待測樣品通過金標墊時，His-Tag金標抗體與待測樣本中的His-Tag蛋白發(fā)生特異性的結合，樣本中含有的His-Tag蛋白越多，與之結合的金標His-Tag抗體越多，剩余的游離His-Tag金標抗體越少，隨著層流移動到檢測線位置，游離的His-Tag金標抗體與固定在檢測線上的帶有His-tag的蛋白發(fā)生特異性結合，并在檢測線上形成淡淡的酒紅色條帶或者不顯帶。當復合物移動到質(zhì)控線時，His-Tag金標抗體被包被在質(zhì)控線的金標抗體二抗所捕獲，并在質(zhì)控線上形成酒紅色條帶。通過判讀層析膜上檢測線和質(zhì)控線是否顯色及顯色的強弱，判斷樣品中是否存在His-Tag蛋白。本試劑檢測下限為10ug/mL，即當待測樣品中His-Tag蛋白的濃度達到10ug/ml及以上濃度時，檢測線的強度會被有效的削弱，顯示出淡淡的酒紅色條帶或不顯色。當檢測樣品中His-Tag蛋白濃度在10ug/mL至100ug/mL時，檢測線顏色的深淺與樣品中His-Tag蛋白的濃度呈負相關。當樣本中的His-Tag蛋白濃度達到100ug/ml以上時，檢測線發(fā)生消線即無肉眼可見條帶出現(xiàn)。

二、His標簽蛋白（競爭法）快速檢測試劑盒用途

原核表達系統(tǒng)、真核表達系統(tǒng)獲得的His-Tag蛋白產(chǎn)物，均可以使用本檢測試劑進行快速檢測。

三、組成

1）檢測卡；2）稀釋液；3）說明書

四、使用方法

1.將本試劑包裝打開，將檢測卡平放在生物安全柜臺面上；

2.待測樣本的預稀釋：

若待測標簽蛋白濃度已知，則利用試劑配套的稀釋液直接稀釋樣本至30ug/ml；

若待測標簽蛋白濃度未知，則利用試劑配套的稀釋液對來源于細菌裂解液的待測樣本進行4倍稀釋，渦旋震蕩混勻；對于來源于哺乳細胞裂解液的待測樣本無需進行預稀釋；

3.用微量移液器吸取20μl待檢標本，滴加到樣品孔中；

4.向樣品孔中滴加50μL樣品稀釋液（滴瓶垂直滴加2滴），10-15分鐘后即可判讀結果。

注：建議每次檢測都設置一個陰性對照檢測卡（陰性對照卡加入的樣本應同待測樣本有相同的基質(zhì)組成，并確定不含His-Tag蛋白），通過與陰性對照檢測卡檢測線顯色強弱的比對，可以更加直觀的得出實驗結論。