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重組腺病毒載體快速檢測(cè)試劑盒

一、原理

重組腺病毒（rAdv）載體是目前用于基因傳遞、體液和細(xì)胞免疫研究的載體之一。包裝腺病毒以及腺病毒擴(kuò)增均需要進(jìn)行腺病毒復(fù)制效率的評(píng)價(jià)，通常方法是 TCID50測(cè)定、核酸雜交、實(shí)時(shí)熒光定量 PCR、SDS-PAGE 電泳等。重組腺病毒六鄰體蛋白快速檢測(cè)卡提供了一種可以在實(shí)驗(yàn)當(dāng)中對(duì)腺病毒載體進(jìn)行快速檢測(cè)的方法。其原理是基于膠體金側(cè)向?qū)游黾夹g(shù)的蛋白半定量檢測(cè)，其主要結(jié)構(gòu)由層析膜、樣品墊、金標(biāo)墊、吸水紙、背板等組成。在層析膜上固定有羊抗鼠多克隆抗體（質(zhì)控線(xiàn)）和腺病毒六鄰體蛋白鼠單克隆抗體（檢測(cè)線(xiàn)）；在金標(biāo)墊上固定有膠體金標(biāo)記的另外一株腺病毒六鄰體蛋白鼠單克隆抗體。當(dāng)待測(cè)樣品滴加到樣品墊時(shí)，通過(guò)毛細(xì)作用，液體向金標(biāo)墊移動(dòng)。當(dāng)液體通過(guò)金標(biāo)墊時(shí)，樣品中含有的腺病毒即與膠體金標(biāo)記的單克隆抗體結(jié)合，形成病毒金標(biāo)抗體復(fù)合物，當(dāng)復(fù)合物移動(dòng)到檢測(cè)線(xiàn)時(shí)，被固定在檢測(cè)線(xiàn)上的腺病毒抗體所捕獲。隨著被捕獲的復(fù)合物的堆積，在檢測(cè)線(xiàn)上呈現(xiàn)出紫紅色條帶。當(dāng)復(fù)合物移動(dòng)到質(zhì)控線(xiàn)時(shí)，羊抗鼠多抗捕獲膠體金標(biāo)記的鼠單克隆抗體，在質(zhì)控線(xiàn)上呈現(xiàn)出紫紅色條帶。通過(guò)判讀層析膜上檢測(cè)線(xiàn)和質(zhì)控線(xiàn)是否顯色，即可判斷樣品中是否存在重組腺病毒。本檢測(cè)卡的檢測(cè)下限為108vp/ml，在108-1010vp/ml 的檢測(cè)范圍內(nèi)，隨腺病毒濃度提高，檢測(cè)線(xiàn)條帶的顯色逐漸增強(qiáng)，腺病毒濃度與檢測(cè)線(xiàn)條帶強(qiáng)度呈現(xiàn)正相關(guān)。該檢測(cè)卡可以識(shí)別包括腺病毒3、5、7、11、40、41型等多種亞型。

重組腺病毒載體快速檢測(cè)試劑盒

二、用途

5型重組腺病毒包裝或擴(kuò)增時(shí)的病毒滴度快速評(píng)估重組腺病毒載體效價(jià)評(píng)估方法有基于細(xì)胞病變的 TCID50測(cè)定、核酸雜交、實(shí)時(shí)熒光定量 PCR、SDS-PAGE 電泳等。這些方法均耗時(shí)耗力，并且成本高昂。與上述方法相比，腺病毒快速檢測(cè)卡使用簡(jiǎn)便，檢測(cè)時(shí)間短，可以隨時(shí)對(duì)轉(zhuǎn)染、收毒、擴(kuò)增、純化效果進(jìn)行評(píng)估。如在更換培養(yǎng)基時(shí)，吸取樣品滴加到檢測(cè)卡上，10~15min 后即可判讀結(jié)果。因此，使用該快速檢測(cè)卡，可以快速評(píng)估轉(zhuǎn)染效果，減少不必要的時(shí)間和試劑浪費(fèi)。

三、組成

1）檢測(cè)卡；2） 稀釋液； 3）說(shuō)明書(shū)

四、使用方法

1.打開(kāi)包裝取出檢測(cè)卡，平放在生物安全柜臺(tái)面上；

2.用微量移液器吸取 20μl 細(xì)胞培養(yǎng)上清等，滴加到樣品窗（S）中；再加入 50μl 緩沖液；

3.室溫靜置10-15min后即可判讀結(jié)果。

五、結(jié)果判斷

1.在檢測(cè)窗中，質(zhì)控線(xiàn)（C）和檢測(cè)線(xiàn)（T）均顯色即為陽(yáng)性；

2.質(zhì)控線(xiàn)（C）顯色，檢測(cè)線(xiàn)（T）不顯色，檢測(cè)結(jié)果為陰性；

3.質(zhì)控線(xiàn)（C）不顯色，無(wú)論檢測(cè)線(xiàn)（T）是否顯色，檢測(cè)無(wú)效。