AAT Bioquest 15273/15274 Amplite®比色NAD/NADH（NADP/NADPH）比值測(cè)定試劑盒

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AAT Bioquest 比值測(cè)定試劑盒-常備現(xiàn)貨

美國AAT Bioquest Inc.(前身是ABD Bioquest，Inc.)是一家為從事生命科學(xué)研究、診斷研發(fā)及藥物開發(fā)的科學(xué)家研發(fā)、生產(chǎn)和銷售生物分析研究試劑和試劑盒的公司。公司致力于光譜學(xué)檢測(cè)領(lǐng)域，包括吸收（顏色），熒光和發(fā)光技術(shù)。AAT Bioquest的產(chǎn)品幫助 quan 世 jie 的科學(xué)家和生物醫(yī)藥研究者更好的了解生物化學(xué)，免疫學(xué)，細(xì)胞生物學(xué)和分子生物學(xué)等領(lǐng)域。AAT Bioquest會(huì)不斷介紹新產(chǎn)品，快速的豐富各個(gè)領(lǐng)域的產(chǎn)品。

AAT Bioquest  15273  Amplite® 比色 NAD/NADH 比值檢測(cè)試劑盒  250 Tests

AAT Bioquest  15274  Amplite® 比色法 NADP/NADPH 比值檢測(cè)試劑盒  250 Tests

AAT Bioquest 比值測(cè)定試劑盒-常備現(xiàn)貨 

AAT Bioquest  15273  Amplite® 比色 NAD/NADH 比值檢測(cè)試劑盒  250 Tests，產(chǎn)品說明：

煙xian胺腺嘌呤二核苷酸（NAD+）和煙xian胺腺嘌呤二核苷酸磷酸（NADP+）是細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)的兩種重要的輔助因子。NADH是NAD +的還原形式，NAD +是NADH的氧化形式。它通過酯鍵將磷酸基團(tuán)添加到腺苷核苷酸的 2' 位置以形成 NADP。NADP用于合成代謝生物反應(yīng)，如脂肪酸和核酸合成，需要NADPH作為還原劑。傳統(tǒng)的NAD / NADH和NADP / NADPH測(cè)定是通過監(jiān)測(cè)340nm處的NADH或NADPH吸收來完成的。該方法靈敏度低，干擾高，因?yàn)闇y(cè)定是在需要昂貴的石英微孔板的紫外范圍內(nèi)進(jìn)行的。我們的 Amplite® NAD/NADH 比率檢測(cè)試劑盒為靈敏檢測(cè) NAD、NADH 及其比率提供了一種方便的方法。NADH探針是一種顯色傳感器，在NADH還原時(shí)在~460nm處具有最大吸光度。~460nm處的吸光度增加與溶液中NADH的濃度成正比。NADH探針可以在無酶反應(yīng)中識(shí)別NADH，并且吸光度酶標(biāo)儀可以在~460nm處輕松讀取信號(hào)。Amplite® 比色 NADH 檢測(cè)試劑盒提供靈敏的檢測(cè)方法，可在 3 μL 檢測(cè)體積中檢測(cè)低至 100 μM NADH。該測(cè)定可以以方便的 96 孔或 384 孔微量滴定板形式進(jìn)行。

平臺(tái)

吸光度酶標(biāo)儀

吸光度 460 納米

推薦板 清除底部

組件

組分A：NAD/NADH回收酶混合物    2瓶（凍干粉）

組件 B-I：NADH 探頭     1 瓶 （4 mL）

組件 B-II：NADH 探針緩沖液      1 瓶 （16 mL）

組件C：NADH標(biāo)準(zhǔn)（FW：709）      1 瓶 （142 μg）

組分D：NAD提取溶液     1 瓶 （10 mL）

組分E：中和溶液  1 瓶 （10 mL）

組件F：提取控制解決方案 1 瓶 （10 mL）

組分G：裂解緩沖液    1 瓶 （10 mL）

一目了然

協(xié)議摘要

1.     準(zhǔn)備 25 μL NADH 標(biāo)準(zhǔn)品和/或測(cè)試樣品

2.     加入 25 μL NAD 提取溶液

3.     37歲孵化oC 15 分鐘

4.     加入 25 μL 中和溶液

5.     加入 75 μL NAD/NADH 工作溶液

6.     在室溫下孵育 15 分鐘至 2 小時(shí)

7.     監(jiān)測(cè) 460 nm 處的吸光度

重要說明

強(qiáng)烈建議在37°C下用裂解緩沖液（組分G）孵育細(xì)胞，并使用上清液進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

在開始實(shí)驗(yàn)之前，在室溫下解凍每種試劑盒組分之一。

儲(chǔ)備溶液的制備

除非另有說明，否則所有未使用的儲(chǔ)備溶液應(yīng)分成一次性等分試樣，并在制備后儲(chǔ)存在-20°C。避免反復(fù)凍融循環(huán)

NADH 標(biāo)準(zhǔn)溶液 （1 mM）

將 200 μL 1X PBS 緩沖液加入 NADH 標(biāo)準(zhǔn)品（組分 C）小瓶中，制成 1 mM （1 nmol/μL） NADH 標(biāo)準(zhǔn)溶液。

標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備

NADH標(biāo)準(zhǔn)

將 50 μL 1 mM （1 nmol/μL） NADH 標(biāo)準(zhǔn)溶液加入 450 μL 1X PBS 緩沖液 （pH 7.4） 中，生成 100 μM （100 pmols/μL） NADH 標(biāo)準(zhǔn)溶液。然后取100μM NADH標(biāo)準(zhǔn)溶液，在1X PBS緩沖液中進(jìn)行2：1連續(xù)稀釋，以獲得連續(xù)稀釋的NADH標(biāo)準(zhǔn)品（NS1 - NS7）。注意：稀釋的NADH標(biāo)準(zhǔn)溶液不穩(wěn)定，應(yīng)在4小時(shí)內(nèi)使用。

工作溶液的制備

將 8 mL NADH 探針緩沖液（組分 B-II）加入 NAD/NADH 回收酶混合物（組分 A）瓶中，并充分混合。

將 2 mL NADH 探針（組分 B-I）加入組件 A+B-II 的瓶中，充分混合制成 NAD/NADH 工作溶液。

注意 這種NAD / NADH工作溶液足以進(jìn)行125-200次測(cè)定。工作溶液不穩(wěn)定，及時(shí)使用，避免直接暴露在光線下。

注意 可以嘗試使用ddH 2 O（例如500 uL）溶解組分A，然后按比例與B-II和B-I混合，以使NAD / NADH工作溶液僅供充分使用。

AAT Bioquest  15274  Amplite® 比色法 NADP/NADPH 比值檢測(cè)試劑盒  250 Tests產(chǎn)品說明：

煙xian胺腺嘌呤二核苷酸（NAD+）和煙xian胺腺嘌呤二核苷酸磷酸（NADP+）是細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)的兩種重要的輔助因子。NADH是NAD +的還原形式，NAD +是NADH的氧化形式。它通過酯鍵將磷酸基團(tuán)添加到腺苷核苷酸的 2' 位置以形成 NADP。NADP用于合成代謝生物反應(yīng)，如脂肪酸和核酸合成，需要NADPH作為還原劑。傳統(tǒng)的NAD / NADH和NADP / NADPH測(cè)定是通過監(jiān)測(cè)340nm處的NADH或NADPH吸收來完成的。該方法靈敏度低，干擾高，因?yàn)闇y(cè)定是在需要昂貴的石英微孔板的紫外范圍內(nèi)進(jìn)行的。我們的 Amplite® NADP/NADPH 比率檢測(cè)試劑盒為靈敏檢測(cè) NADP、NADPH 及其比率提供了一種方便的方法。NADPH探針是一種顯色傳感器，在NADH還原時(shí)在~460nm處具有最大吸光度。~460nm處的吸光度增加與溶液中NADPH的濃度成正比。NADPH探針可以在無酶反應(yīng)中識(shí)別NADPH，并且吸光度酶標(biāo)儀可以在~460nm處輕松讀取信號(hào)。Amplite® 比色法 NADPH 檢測(cè)試劑盒提供靈敏的檢測(cè)方法，可在 3 μL 檢測(cè)體積中檢測(cè)低至 100 μM NADPH。該測(cè)定可以以方便的 96 孔或 384 孔微量滴定板形式進(jìn)行。

平臺(tái)

吸光度酶標(biāo)儀

吸光度 460 納米

推薦板 清除底部

組件

組分A：NADP / NADPH回收酶混合物    2瓶（凍干粉）

組件 B-I：NADPH 探頭   1 瓶 （4 mL）

組分 B-II：NADPH 探針緩沖液    1 瓶 （16 mL）

組件C：NADPH標(biāo)準(zhǔn) 1 瓶 （167 μg）

組分D：NADP提取液 1 瓶 （10 mL）

組分E：中和溶液  1 瓶 （10 mL）

組件F：提取控制解決方案 1 瓶 （10 mL）

組分G：裂解緩沖液    1 瓶 （10 mL）

1.     準(zhǔn)備 25 μL NADPH 標(biāo)準(zhǔn)品和/或測(cè)試樣品

2.     加入 25 μL NADP 提取溶液

3.     在37°C孵育15分鐘

4.     加入 25 μL 中和溶液

5.     加入 75 μL NADP/NADPH 工作溶液

6.     在室溫下孵育 15 分鐘至 2 小時(shí)

7.     監(jiān)測(cè) 460 nm 處的吸光度

重要說明

強(qiáng)烈建議在37°C下用裂解緩沖液（組分G）孵育細(xì)胞，并使用上清液進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

在開始實(shí)驗(yàn)之前，在室溫下解凍每種試劑盒組分之一。

儲(chǔ)備溶液的制備

除非另有說明，否則所有未使用的儲(chǔ)備溶液應(yīng)分成一次性等分試樣，并在制備后儲(chǔ)存在-20°C。避免反復(fù)凍融循環(huán)

NADPH 標(biāo)準(zhǔn)溶液 （1 mM）

將 200 μL PBS 緩沖液加入 NADPH 標(biāo)準(zhǔn)品（組分 C）的小瓶中，以獲得 1 mM （1 nmol/μL） NADPH 儲(chǔ)備溶液。

標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備

NADPH 標(biāo)準(zhǔn)

將 10 μL 1 mM NADPH 儲(chǔ)備溶液加入 490 μL PBS 緩沖液 （pH 7.4） 中，生成 20 μM （20 pmols/μL） NADPH 標(biāo)準(zhǔn)溶液。然后取20μM NADPH標(biāo)準(zhǔn)溶液并進(jìn)行1：2系列稀釋，以獲得剩余的連續(xù)稀釋NADPH標(biāo)準(zhǔn)品（NS7 - NS1）。注意：稀釋的NADPH標(biāo)準(zhǔn)溶液不穩(wěn)定，應(yīng)在4小時(shí)內(nèi)使用。

工作溶液的制備

1.     將 8 mL NADPH 探針緩沖液（組分 B-II）加入 NADP/NADPH 回收酶混合物（組分 A）瓶中，并充分混合。

2.     將 2 mL NADPH 探針（組分 B-I）加入同一瓶中（來自步驟 1）并充分混合。

注意此NADP / NADPH工作溶液足以進(jìn)行125-200次測(cè)定。工作溶液不穩(wěn)定，及時(shí)使用，避免直接暴露在光線下。

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AAT Bioquest  15273  Amplite® 比色 NAD/NADH 比值檢測(cè)試劑盒  250 Tests

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