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QPCR

實驗原理

QPCR基于傳統(tǒng)的聚合酶鏈反應（PCR）技術，通過逐漸擴增目標DNA或cDNA的數(shù)量使其可檢測。與傳統(tǒng)PCR不同的是，qPCR在擴增過程中同時進行熒光信號的實時監(jiān)測。

qPCR的原理基于熒光探針（例如TaqMan探針或SYBR Green I染料）。這些探針通過與目標序列的特異性結合，在PCR過程中釋放熒光信號。

SYBR Green I：該染料能與DNA雙鏈結合，當PCR擴增產生新的雙鏈DNA時，SYBR Green I與其結合并發(fā)出熒光信號。

TaqMan探針：該探針由引物和熒光探針組成，熒光探針含有一個熒光染料和一個熒光猝滅劑。在PCR擴增過程中，熒光探針通過引物特異性結合到目標序列上，并且Taqpolymerase酵素的核酸酶活性會切除掉熒光探針上的猝滅劑，導致熒光染料釋放出信號。

 通過檢測PCR擴增過程中的熒光信號強度，可以確定目標序列相對起始數(shù)量。通常通過計算Ct值（熒光信號達到閾值的循環(huán)數(shù)）來衡量目標序列的豐度。通過構建標準曲線或使用ΔCt方法，可以將待測樣本中目標序列的相對豐度與參考基因或對照組進行比較。

實驗步驟

 提取核酸、反轉錄（僅適用于RNA樣本）、預處理、設計引物和探針、準備反應體系、執(zhí)行PCR循環(huán)、數(shù)據分析

應用途徑

1.定量分析未知模板；2.單個或多個基因表達譜分析

實驗結果