目錄:賽默飛世爾科技（中國(guó)）有限公司>>細(xì)胞分析>>流式細(xì)胞儀>> 賽默飛Attune CytPix 成像型流式細(xì)胞儀
| 參考價(jià) | 面議 |
| 參考價(jià) | 面議 |
更新時(shí)間：2025-03-24 17:05:45瀏覽次數(shù)：128評(píng)價(jià)
聯(lián)系我們時(shí)請(qǐng)說明是化工儀器網(wǎng)上看到的信息，謝謝!
屢獲殊榮的 Invitrogen Attune CytPix 成像型流式細(xì)胞儀將聲波聚焦與高速明場(chǎng)相機(jī)相結(jié)合，能夠同時(shí)進(jìn)行高通量的流式細(xì)胞分析和高分辨率的明場(chǎng)成像 。
使用 Attune 流式細(xì)胞儀軟件進(jìn)行自動(dòng)圖像分析 ，可將事件特征轉(zhuǎn)換為形態(tài)參數(shù)，并可與標(biāo)準(zhǔn)熒光和散射參數(shù)結(jié)合使用。
應(yīng)用文檔：自動(dòng)圖像分析降低了流式細(xì)胞術(shù)設(shè)門策略的用戶間差異
Attune CytPix 成像型流式細(xì)胞儀榮獲醫(yī)療技術(shù)類 2003 年愛迪生獎(jiǎng)™ 。Edison Awards 是廣受贊譽(yù)的獎(jiǎng)項(xiàng)，旨在表彰在新產(chǎn)品和服務(wù)開發(fā)、設(shè)計(jì)和創(chuàng)新方面的出色表現(xiàn)。
在 Attune CytPix 流式細(xì)胞儀上采集樣本時(shí)，高速明場(chǎng)相機(jī)可采集并儲(chǔ)存檢測(cè)到的事件圖像，每秒可多達(dá)6000張，具體取決于流速和圖像大小。為實(shí)現(xiàn)更高靈活性，可使用 Attune 流式細(xì)胞儀軟件按需調(diào)整圖像采集頻率，并根據(jù)需要選擇特定的設(shè)門以進(jìn)行圖像采集。聲波聚焦有助于定位細(xì)胞，從而獲得清晰的細(xì)胞圖像。
0:00/0:02 0:00/0:02
聲波聚焦使得細(xì)胞處于良好成像位置
沒有采用聲波聚焦技術(shù)（左）時(shí)，微球沒有聚集在中心位置且經(jīng)常模糊不清。聲波聚焦（右）可減少橫向位置變異、時(shí)間變異和景深限制，從而可獲得清晰的圖像。
聲波聚焦和高速相機(jī)相結(jié)合后，不論進(jìn)樣速度快還是慢，都可以得到 CAR-T 細(xì)胞的穩(wěn)定成像。根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求輕松調(diào)節(jié)焦距和相機(jī)設(shè)置。
Attune 流式細(xì)胞儀軟件 使用經(jīng)過白細(xì)胞和微球預(yù)培訓(xùn)的模型，通過自動(dòng)圖像分析功能得出形態(tài)參數(shù)。該軟件能夠以每秒高達(dá)1,000幅圖像的速率進(jìn)行圖像分析，并且可由用戶在軟件后臺(tái)運(yùn)行的進(jìn)程隊(duì)列中進(jìn)行管理。這些基于圖像的擴(kuò)展參數(shù)提供了數(shù)據(jù)，使用戶能夠通過細(xì)胞計(jì)數(shù)（顆粒計(jì)數(shù)）和形態(tài)學(xué)特征（如圓形度 [圓度]、大小 [面積]、形狀 [偏心率] 和復(fù)雜性 [熵]）來確認(rèn)單體。 對(duì)這些擴(kuò)展參數(shù)設(shè)門后，您可以快速、準(zhǔn)確地鑒別感興趣的細(xì)胞群，從而在不需要手動(dòng)審查或僅需少量手動(dòng)審查的情況下確認(rèn)設(shè)門策略。
單個(gè)事件的圖像和衍生的形態(tài)學(xué)數(shù)據(jù)可以幫助大量幾乎無限的流式細(xì)胞術(shù)應(yīng)用。功能范圍包括：
優(yōu)化和確認(rèn)門控策略
利用圖像衍生的數(shù)據(jù)設(shè)門以排除雙聯(lián)體和碎片，并用圖像確認(rèn)圈門的準(zhǔn)確性。
更深入地表征細(xì)胞群
在現(xiàn)有流式方案中對(duì)不同形態(tài)的細(xì)胞群體進(jìn)行記錄和表征。
分析細(xì)胞間相互作用
可視化并區(qū)分偶合事件與細(xì)胞間相互作用。
可視化大量細(xì)胞群的結(jié)構(gòu)特征
使用高通量、詳細(xì)的圖像驗(yàn)證
測(cè)量衍生的圖像參數(shù)
使用 Attune 流式細(xì)胞儀軟件6.0的圖像分析功能
高通量質(zhì)量控質(zhì)
通過向細(xì)胞培養(yǎng) QC 工作流程中加入快速成像結(jié)果，從而快速檢測(cè)質(zhì)量問題
優(yōu)化設(shè)門策略。即使是穩(wěn)健的手動(dòng)單體設(shè)門也容易出錯(cuò)，因此它仍是幾乎所有流式細(xì)胞分析測(cè)定的主觀決策點(diǎn)。成像結(jié)果有助于確認(rèn)和調(diào)整設(shè)門，以便只圈出單個(gè)目的細(xì)胞。
在此，一名有經(jīng)驗(yàn)的用戶已自信地為單體設(shè)門。 在評(píng)估手動(dòng)單體門后，源自 CytPix 圖像的參數(shù) ParticleCount 顯示此門包含超過 4% 的聚合體。
也許更重要的是，這些事件含有表型明顯不同的細(xì)胞， 這可導(dǎo)致對(duì)雙陽性事件（特別是在稀有細(xì)胞群中）做出錯(cuò)誤結(jié)論。
使用氯化銨裂解緩沖液裂解的老化人類全血 (AllCells)。圖像處理是使用 Cells Model_Speed Optimized 模型完成的。顯示的統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)為門內(nèi)細(xì)胞百分比。
將流式結(jié)果與高速、高分辨率成像相結(jié)合，從而增加了設(shè)門和分析結(jié)果的準(zhǔn)確性
細(xì)胞培養(yǎng)質(zhì)控。在質(zhì)量控制（QC）工作流程中增加快速成像可在早期階段發(fā)現(xiàn)和追蹤細(xì)胞培養(yǎng)相關(guān)問題。例如，在某實(shí)驗(yàn)室中，在對(duì) Ramos（淋巴瘤）細(xì)胞培養(yǎng)進(jìn)行常規(guī)傳代檢查時(shí)觀察到，盡管看起來是在融合，但細(xì)胞計(jì)數(shù)和存活率減少。進(jìn)一步檢測(cè)發(fā)現(xiàn)存在大量微生物污染，但這是從何時(shí)何處開始的？
由于該細(xì)胞系之前已經(jīng)在Attune CytPix 成像型流式細(xì)胞儀上進(jìn)行了分析，研究人員重新打開圖像，發(fā)現(xiàn)至少五天前就記錄了微生物感染。當(dāng)時(shí)，污染早期的跡象被誤認(rèn)為碎片，但回顧性研究證實(shí)培養(yǎng)物中存在具有相同特征的問題細(xì)胞。追蹤感染幫助實(shí)驗(yàn)室建立了額外的實(shí)驗(yàn)室規(guī)程，以篩選和保護(hù)對(duì)實(shí)驗(yàn)具有關(guān)鍵性作用的細(xì)胞系。
在一次常規(guī)傳代檢查時(shí)，培養(yǎng)物中的 Ramos（淋巴瘤）細(xì)胞顯示細(xì)胞計(jì)數(shù)和存活率減少，盡管看起來是在融合。進(jìn)一步調(diào)查顯示有微生物污染，且通過 Attune CytPix 流式細(xì)胞儀的成像和反向設(shè)門得到證實(shí)。這種污染的早期跡象最初被誤認(rèn)為是碎片。
查看 Attune CytPix 成像型流式細(xì)胞儀更多樣本數(shù)據(jù)
表征細(xì)胞群。圖像中的形態(tài)學(xué)信息增加了流式細(xì)胞數(shù)據(jù)的豐度。 例如，圖中顯示了使用 Annexin V 和 PI 的常規(guī)細(xì)胞凋亡測(cè)定，添加了細(xì)胞成像以表征每個(gè)細(xì)胞群中的細(xì)胞，從而顯示不同形態(tài)特征。如果僅通過流式染色分析無法獲取該形態(tài)變化的信息。
用 10 µM XSJ 37oC 培養(yǎng) Jurkat 細(xì)胞 4 小時(shí)，以誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。樣本用 Annexin V 染色和 PI 染色后，在 Attune CytPix 成像型流式細(xì)胞儀上以 100 µL/分鐘的流速進(jìn)行數(shù)據(jù)采集。從單個(gè)細(xì)胞群中，設(shè)門策略鑒別出三個(gè)細(xì)胞亞群。約 50% 的凋亡活細(xì)胞（Annexin V+PI–，右下）出現(xiàn)某種形式的凋亡小體，如氣泡。約 25% 的死的凋亡細(xì)胞（Annexin V+PI+，右上）的細(xì)胞表面顆粒度增大，且不完整細(xì)胞更多。約 10% 的健康細(xì)胞（Annexin V–，左下）有凋亡小體（盡管沒有 Annexin V? 細(xì)胞的那樣嚴(yán)重）。
"一張圖片雖然抵不上 1000 個(gè)點(diǎn)，但確實(shí)通過觀察圖像有助于進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。很高興能夠看與染色相關(guān)的圖像。例如，AnnexinV 陽性細(xì)胞的形態(tài)與健康細(xì)胞不同，或者 CD14+ 單核細(xì)胞比 CD3+/CD4+/CD14- 淋巴細(xì)胞體積更大、內(nèi)容物更多。此外，它還可通過圖像查看單細(xì)胞門內(nèi)含有多少黏連細(xì)胞，并非常適合在分析中驗(yàn)證異常雙陽性細(xì)胞的狀態(tài)。"
威斯康星大學(xué)麥迪遜醫(yī)學(xué)公共衛(wèi)生學(xué)院
分析細(xì)胞間相互作用。圖像甚至能顯示出細(xì)胞間的相互作用。 圖中，經(jīng)過基因改造的 CAR T 免疫細(xì)胞與 Ramos（淋巴瘤）細(xì)胞共同培養(yǎng)后進(jìn)行染色，在 Attune CytPix 成像型流式細(xì)胞儀上進(jìn)行采集和成像分析。第二象限的圖像（兩種染料均為陽性，作為單個(gè)事件采集）顯示 CAR T 細(xì)胞對(duì)靶向 Ramos 細(xì)胞具有明顯的殺傷作用，提供了改造后細(xì)胞具有功能的確切證據(jù)。
分別使用 CellTrace Far Red 和 Violet 標(biāo)記 CAR-T 和 Ramos 細(xì)胞并以 1:1 比例在 37°C 下孵育 1 小時(shí)。 在 Attune CytPix 成像型流式細(xì)胞儀上以 200 μL/分鐘、 >8 x 105 個(gè)細(xì)胞/mL 的設(shè)置采集未過濾樣本的圖像。第一象限（中上）、第四象限（右下）和第三象限（左下）的圖像分別顯示單個(gè) Ramos 細(xì)胞、CAR-T 細(xì)胞和碎片。第二象限的圖像（對(duì)兩種染料均呈陽性，右上）顯示融合在一起的兩種細(xì)胞類型，這是作為單個(gè)事件采集的，因?yàn)?CAR-T 細(xì)胞吞噬了 Ramos 細(xì)胞。
我們之前展示了拍攝 CAR-T/Ramos 細(xì)胞相互作用圖像的能力?，F(xiàn)在我們來看看最感興趣的細(xì)胞群—雙陽性事件，以了解更多信息?，F(xiàn)在我們可以使用源自圖像的擴(kuò)展參數(shù)（圓度與強(qiáng)度偏斜度）來進(jìn)一步檢查這些細(xì)胞群的特征并改進(jìn)這些事件的設(shè)門，從而提高數(shù)據(jù)穩(wěn)健性。在此，通過使用 基于圖像的定量參數(shù)的設(shè)門策略，我們可區(qū)分相互作用細(xì)胞與偶合事件，從而更準(zhǔn)確地分析相互作用細(xì)胞。
分別使用 CellTrace Far Red 和 Violet 標(biāo)記 CAR-T 和 Ramos 細(xì)胞并以 1:1 比例在 37°C 下孵育1小時(shí)。在 Attune CytPix 成像型流式細(xì)胞儀上以 200 μL/分鐘、>8 x 105個(gè)細(xì)胞/mL 的設(shè)置采集未過濾樣本的圖像。第一象限（左上）、第三象限（右下）和第四象限（左下）的圖像分別顯示單個(gè) Ramos 細(xì)胞、CAR-T 細(xì)胞和碎片。第二象限的圖像（對(duì)兩種染料均呈陽性，右上）顯示融合在一起的兩種細(xì)胞類型，這是作為單個(gè)事件采集的，因?yàn)?CAR-T 細(xì)胞吞噬了 Ramos 細(xì)胞。百分比為設(shè)門 %。
在細(xì)胞圖庫中，帶注釋的事件具有黑色輪廓，且?guī)в兄甘揪又卸ㄎ坏狞S點(diǎn)。圖像處理是使用 Cells_Half_Resolution_v22 模型完成的。利用圓度與強(qiáng)度偏斜度，使我們能夠區(qū)分黏連細(xì)胞相互作用（CAR-T 細(xì)胞與 Ramos 細(xì)胞間）與分離的細(xì)胞（即細(xì)胞處于同一視野中但未顯示出細(xì)胞相互作用）。
利用Attune CytPix 成像型流式細(xì)胞儀對(duì)細(xì)胞進(jìn)行反向設(shè)門，基于圖像形態(tài)可能發(fā)現(xiàn)更多感興趣的細(xì)胞亞群，而傳統(tǒng)流式數(shù)據(jù)無法提供這些信息。
例如，大腸桿菌細(xì)胞可培養(yǎng)為兩種菌落形成單位 (CFU)： 類似于單細(xì)胞的短 CFU，以及帶不裂變環(huán)的加長(zhǎng)結(jié)構(gòu)，代表在每個(gè)近似細(xì)胞長(zhǎng)度處不縊縮。傳統(tǒng)單個(gè)細(xì)胞門（SSC-A/SSC-H）和熒光信號(hào)門（SSC/核染色）均無法區(qū)分這些細(xì)胞群。但通過 Attune CytPix 成像型流式細(xì)胞儀，可以查看和分類圖像信息，并根據(jù)其形態(tài)特征為不同 CFU 類型進(jìn)行設(shè)門。
兩種大腸桿菌 CFU 類型的區(qū)分。大腸桿菌在 37oC 條件下培養(yǎng)過夜，然后在 4oC 條件下繼續(xù)培養(yǎng)3天。使用 Attune CytPix 流式細(xì)胞儀以 100 μL/分鐘的流速進(jìn)行樣本數(shù)據(jù)采集?？梢詮倪@些圖像鑒別兩類 CFU：(A) 代表單細(xì)胞的短菌落和 (B) 帶不裂變環(huán)的加長(zhǎng)結(jié)構(gòu)。各亞群細(xì)菌的典型圖像如圖所示。對(duì)所選圖像反向設(shè)門顯示兩個(gè)亞群在 FSC/SSC 點(diǎn)圖上不同（橙色點(diǎn)，左）。
無需分割樣品或修改您的流式細(xì)胞術(shù)實(shí)驗(yàn)方案。簡(jiǎn)化您的成像和流式細(xì)胞分析工作流程，節(jié)省時(shí)間。
Attune CytPix 成像型流式細(xì)胞儀的自動(dòng)化圖像分析功能簡(jiǎn)介。
Attune CytPix 成像型流式細(xì)胞儀自動(dòng)化圖像分析功能可在一個(gè)步驟中提供兩個(gè)數(shù)據(jù)集。
一組專家討論了在 Attune CytPix 流式細(xì)胞儀支持下進(jìn)行流式細(xì)胞術(shù)實(shí)驗(yàn)中成像數(shù)據(jù)的益處
觀看 Cora Chadick 博士展示 Invitrogen Attune CytPix 流式細(xì)胞儀
科學(xué)家 Greg Kaduchak 討論了利用 Attune CytPix 流式細(xì)胞儀的高分辨率明場(chǎng)成像來克服流式細(xì)胞術(shù)的難題。
如何在 Attune CytPix 流式細(xì)胞儀上設(shè)置和采集流式細(xì)胞術(shù)和成像數(shù)據(jù)
Introduction video of the features and benefits of the Attune CytPix Flow Cytometer
(空格分隔,最多3個(gè),單個(gè)標(biāo)簽最多10個(gè)字符)
會(huì)員.png)
2
化工儀器網(wǎng)