諾博萊德 SABC(小鼠/兔IgG)-FITC kit  SABC法

NobleRyder SA8821 SABC(小鼠/兔IgG)-FITC kitSABC(Mouse/RabbitIgG)-FITCKit

產(chǎn)品貨號(hào)：SA8821

產(chǎn)品名稱：SABC(小鼠/兔IgG)-FITC kitSABC(Mouse/RabbitIgG)-FITCKit

英文名稱：SABC(Mouse/RabbitIgG)-FITCKit

產(chǎn)品規(guī)格：1kit

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

儲(chǔ)存條件：-20℃，avoid light，1 year

具體產(chǎn)品的參數(shù)以收到產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)的參數(shù)為準(zhǔn)

NobleRyder SA8821 SABC(小鼠/兔IgG)-FITC kitSABC(Mouse/RabbitIgG)-FITCKit適合于一抗為小鼠/兔IgG的免疫組化實(shí)驗(yàn)，F(xiàn)ITC熒光檢測(cè)。

SABC是專為免疫組化和其他免疫檢測(cè)而設(shè)計(jì)的，用以顯示組織和細(xì)胞中抗原分布。鏈霉親和素(StreptAvidin)是一種從鏈霉菌中提取的蛋白質(zhì)，同親和素一樣，對(duì)生wu素有極gao的親和力，親和素是一個(gè)堿性蛋白質(zhì)（IP=10），經(jīng)改造后可以轉(zhuǎn)變成中性蛋白質(zhì)。鏈霉親和素等電點(diǎn)接近中性，對(duì)

組織和細(xì)胞的非特異吸附很低，基于鏈霉親和素的免疫組化方法背景很低。SABC即StreptAvidin-Biotin Complex，SABC 大約可形成一百個(gè)左右的過(guò)氧化物酶和五十個(gè)左右的鏈霉親和素所構(gòu)成的復(fù)合物。大量的酶將保證SABC具有很高的敏感性。

操作步驟:（以石蠟切片為例）

1. 切片常規(guī)脫蠟至水(三次二甲苯，三次乙醇)。

2. 可選步聚：

a、熱修復(fù)抗原，將切片浸入0.01M檸檬酸鈉緩沖液（PH6.0），電爐或微波爐加熱至沸騰 后斷電，間隔5-10分鐘后，反復(fù)1-2次。冷卻后PBS（pH7.2-7.6）洗滌1-2次。

b、酶消化，滴加消化液，37℃10分鐘，PBS（pH7.2-7.4）洗滌2-3次。

c、跳過(guò)此步，直接進(jìn)入下一步。

3. 滴加5%BSA封閉液,室溫20分鐘。甩去多余液體, 免洗。

4. 用稀釋液將一抗按一定比例稀釋（稀釋后的一抗4℃可保存一周），也可另行購(gòu)買抗體稀釋液。滴加稀釋的一抗37℃ 孵育1小時(shí)左右或20℃2小時(shí)左右，也可4℃過(guò)夜。PBS（pH7.2-7.4）洗滌3次，每次2分鐘（一抗的稀釋度、孵育時(shí)間和溫度與染色強(qiáng)度、背景有直接關(guān)系。一般來(lái)說(shuō)，陽(yáng)性染色強(qiáng)度不夠時(shí)，可提高一抗?jié)舛群脱娱L(zhǎng)孵育時(shí)間；背景過(guò)高時(shí)，可降低一抗?jié)舛群涂s短孵育時(shí)間）。

5. 根據(jù)用量，用稀釋液將Bio-羊抗小鼠/兔IgG濃縮液按1:50-100稀釋成工作液(1ml稀釋液加入10-20ul Bio-羊抗小鼠/兔 IgG 濃縮液混勻，此工作液4℃可保存一周)。滴加Bio-羊抗小鼠/兔IgG工作液，20-37℃ 孵育30分鐘。PBS（pH7.2-7.4）洗滌3次，每次2分鐘。

6. 根據(jù)使用量，用稀釋液將SABC-FITC 濃縮液按1:100 稀釋成工作液(1ml 稀釋液加入 10ul SABC-FITC 濃縮液混勻，此工作液4℃可保存一周)。滴加SABC-FITC工作液，20-37℃，30分鐘。

PBS （pH7.2-7.4）洗滌4次，每次5分鐘。

7. 滴加抗熒光衰減封片劑封片。熒光顯微鏡觀察。

對(duì)于細(xì)胞爬片，固定后，PBS漂洗兩次，再用0.5%TrxitonX-100室溫孵育20分鐘， PBS漂洗兩次，接上述第3步。

對(duì)于冰凍切片，固定后，PBS漂洗兩次，再接上述第2步。

注意事項(xiàng)：

如果染色背景過(guò)高，在SABC反應(yīng)之后，DAB顯色之前,用加有0.01—0.02%TWEEN-20的PBST（pH7.2-7.4）洗滌切片4次，PBS洗2次，然后DAB顯色。

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