土壤過氧化氫酶（Solid-Catalase，S-CAT）試劑盒說明書

分光光度法 50 管/24 樣

土壤過氧化氫酶試劑盒

正式測定前務(wù)必取 2-3 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定測定意義：

S-CAT 是土壤微生物代謝的重要酶類，在 H2O2 清除系統(tǒng)中具有重要作用。

測定原理：

H2O2 在 240nm 下有特征吸收峰，通過測定與土壤反應(yīng)后溶液在此波長下吸光度的變化，即可反應(yīng)S-CAT 活性的高低。

試劑組成和配制：

試劑一：液體 100μl×5 瓶，4℃保存；臨用前每瓶加入 9.9ml 蒸餾水充分溶解后待用；用不完的試劑 4℃保存；

試劑二：粉劑×1 瓶，4℃保存；臨用前加入 2ml 蒸餾水充分溶解待用，用不完的試劑 4℃保存（如出現(xiàn)結(jié)晶析出，60℃-90℃水浴溶解后使用）。

自備儀器和用品：

紫外分光光度計(jì)、臺(tái)式離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、1ml 石英比色皿和蒸餾水。

樣品處理：

新鮮土樣自然風(fēng)干或 37 度烘箱風(fēng)干，過 30~50 目篩。

測定步驟：

25℃振蕩培養(yǎng) 20min

混勻 8000g，25℃離心 5min，取 820μl 上清

混勻，用蒸餾水調(diào)零，240nm 處記錄各管A 值。

注意事項(xiàng):

每個(gè)測定管要設(shè)一個(gè)無基質(zhì)管，無土管只要做一管。

S-CAT 活性計(jì)算：

單位的定義：每天每g 風(fēng)干土樣催化 1μmol H2O2 降解定義為一個(gè)酶活力單位。

計(jì)算公式：S-CAT（μmol/d/g）＝[(A 無土管-A 測定管+A 無基質(zhì)管)×V 反總÷（ε×d）×106]÷W÷T=18.9×（A 無土管-A 測定管+A 無基質(zhì)管）

V 反總：反應(yīng)體系總體積，1.145×10-3 L；ε：過氧化氫摩爾消光系數(shù)，4.36×104 L / mol /cm；d：比色皿光徑，1cm； T：反應(yīng)時(shí)間，20 min=1/72d； W：樣本質(zhì)量，0.1g。

土壤過氧化氫酶試劑盒