土壤外切-β-1，4-葡聚糖酶/纖維二糖苷酶（S-C1）活性測(cè)定試劑盒說(shuō)明書

微量法 100 管/48 樣

土壤外切葡聚糖酶/纖維二糖苷酶活性試劑盒

正式測(cè)定前務(wù)必取 2-3 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定測(cè)定意義：

C1（EC3.2.1.91）存在于細(xì)菌、真菌和動(dòng)物體內(nèi)，是纖維素酶系的組份之一，C1 催化多聚糖鏈的末端非還原端釋放出纖維二糖和葡萄糖。

測(cè)定原理：

采用 3,5－二硝基水楊酸法測(cè)定S-C1 催化微晶纖維素降解產(chǎn)生的還原糖的含量。

試劑的組成和配制：

自備儀器和用品：

酶標(biāo)儀/可見(jiàn)分光光度計(jì)、水浴鍋、離心機(jī)、可調(diào)式移液器、96 孔板/微量石英比色皿、研缽、冰和蒸餾水。

樣品測(cè)定的準(zhǔn)備：

稱取約 0.1g 新鮮土樣或風(fēng)干土樣，加入 1ml 提取液，進(jìn)行冰浴勻漿，室溫振蕩提取 30min，然后 10000g 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測(cè)。

測(cè)定步驟：

1、分光光度計(jì)或酶標(biāo)儀預(yù)熱 30min 以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至 540nm，蒸餾水調(diào)零。

2、加樣表（在EP 管中依次加入下列試劑）

混勻，37℃準(zhǔn)確水浴 2h

混勻， 90℃水浴 10min（蓋緊，防止水分散失），冷卻后，取 200μl 至微量石英比色皿或 96 孔板中，測(cè) 540nm 下吸光值A(chǔ)，計(jì)算ΔA=A 測(cè)定管-A 對(duì)照管。每個(gè)測(cè)定管需設(shè)一個(gè)對(duì)照管。

S-C1 活性計(jì)算：

用微量石英比色皿測(cè)定的計(jì)算公式如下

標(biāo)準(zhǔn)條件下測(cè)定回歸方程為 y = 6.4078x - 0.0673；x 為標(biāo)準(zhǔn)品濃度（mg/ml），y 為吸光值。單位的定義：每g 土樣每分鐘催化產(chǎn)生 1μg 葡萄糖定義為一個(gè)酶活力單位。

S-C1 活力(μg /min /g 鮮重)=[1000×(ΔA+0.0673) ÷6.4078×V 反總]÷(W× V 樣÷V 樣總) ÷T

=14.305×(ΔA+0.0673) ÷W

1000：1mg/ml=1000ug/ml；V 反總：反應(yīng)體系總體積，0.11ml； V 樣：加入樣本體積，0.01 ml；V 樣總：加入提取液體積，1 ml；T：反應(yīng)時(shí)間，120 min； W：樣本質(zhì)量，g；

用 96 孔板測(cè)定的計(jì)算公式如下

標(biāo)準(zhǔn)條件下測(cè)定回歸方程為 y = 3.2039x - 0.0673；x 為標(biāo)準(zhǔn)品濃度（mg/ml），y 為吸光值。單位的定義：每g 組織每分鐘催化產(chǎn)生 1μg 葡萄糖定義為一個(gè)酶活力單位。

S-C1 活力(μg /min /g 鮮重)=[1000×(ΔA+0.0673) ÷3.2039×V 反總]÷(W× V 樣÷V 樣總) ÷T

=28.61×(ΔA+0.0673) ÷W

1000：1mg/ml=1000ug/ml；V 反總：反應(yīng)體系總體積，0.11ml； V 樣：加入樣本體積，0.01 ml；V 樣總：加入提取液體積，1 ml；T：反應(yīng)時(shí)間，120 min； W：樣本質(zhì)量，g。

土壤外切葡聚糖酶/纖維二糖苷酶活性試劑盒