土壤脂肪酶（Solid-Lipase，S-LPS）活性試劑盒說(shuō)明書

微量法 100T/96S

土壤脂肪酶活性試劑盒

正式測(cè)定前務(wù)必取 2-3 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定測(cè)定意義：

LPS 又稱甘油酯水解酶，催化甘油三酯水解生成脂肪酸和甘油（或者甘油二酯和單酯）。LPS 廣泛的存在于各種生物中。

測(cè)定原理：

LPS 催化油酯水解成脂肪酸，利用銅皂法測(cè)定脂肪酸生成速率，即可計(jì)算 LPS 活性。

試劑組成和配制：

試劑二：液體 10ml×1 瓶，4℃保存。每次使用前用震蕩混勻器劇烈震蕩 20min。

標(biāo)準(zhǔn)品：液體 10 μl×1 瓶，10 µmol/ml 的標(biāo)準(zhǔn)溶液，4℃保存。臨用前加入 3.168 ml 甲苯，充分溶解。

自備儀器和用品：

研缽、臺(tái)式離心機(jī)、震蕩混勻器、可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96 孔板、可調(diào)式移液槍、甲苯 80ml、冰和蒸餾水。

樣本處理：

建議稱取約 0.1g 土樣，加入 1ml 試劑一進(jìn)行冰浴勻漿，再用回旋式振蕩器振蕩提取 15min，4℃，4000g離心 10min，取上清待測(cè)。

S-LPS 測(cè)定操作：

1、分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱 30 min，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)到 710 nm，蒸餾水調(diào)零。

2、試劑一和試劑二置于 37℃水浴預(yù)熱 30min。

3、在 1.5ml EP 管中依次加入下列試劑；

37℃振蕩反應(yīng) 10 min。

37℃振蕩反應(yīng) 10 min 后，8000g，25℃，離心 10min，取上清液

37℃振蕩反應(yīng) 5 min 后，靜置 5min，取 200μl 上層液加入微量石英比色皿/96 孔板，于 710nm 處測(cè)定吸光值。

注意事項(xiàng):

空白管和標(biāo)準(zhǔn)管只需測(cè)定一次。

S-LPS 活性計(jì)算公式：

活性單位定義：37℃中每克土樣每分鐘水解橄欖油生成 1μmol 脂肪酸為一個(gè)酶活單位。

S-LPS (μmol/min/g 土樣) = [C 標(biāo)準(zhǔn)品×(A 測(cè)定管-A 空白管)÷（A 標(biāo)準(zhǔn)管- A 空白管）]×V 反總÷（W×V樣÷V 樣總）÷T=16×[(A 測(cè)定管－A 空白管)÷（A 標(biāo)準(zhǔn)管- A 空白管）]÷W

C 標(biāo)準(zhǔn)品：10 µmol/ml；V 反總：反應(yīng)總體積，0.8ml；V 樣：反應(yīng)中加入樣本體積，0.05ml；V 樣總：加入提取液體積，1ml； W：樣本質(zhì)量，g；T：催化反應(yīng)時(shí)間，10 min。

土壤脂肪酶活性試劑盒