脂氧合酶（LOX）活性測(cè)定試劑盒說明書

微量法 100T/48S

脂氧合酶LOX活性測(cè)定試劑盒 脂肪酸系列

正式測(cè)定前務(wù)必取 2-3 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定測(cè)定意義：

LOX 廣泛存在于動(dòng)植物組織中，催化不飽和脂肪酸氧化反應(yīng)，導(dǎo)致膜脂過氧化。在生物體的生長(zhǎng)發(fā)育、成熟衰老及逆境脅迫過程中具有重要作用。

測(cè)定原理：

LOX 催化亞you酸氧化，氧化產(chǎn)物在 280nm 處有特征吸收峰；測(cè)定 280nm 吸光度增加速率，來計(jì)算 LOX活性。

組成：

自備儀器和用品：

研缽、冰、臺(tái)式離心機(jī)、紫外分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96 孔板（UV 板）、可調(diào)式移液槍和蒸餾水。

粗酶液提取：

按照組織質(zhì)量（g）：試劑一體積(ml)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織，加入 1ml 試劑一）進(jìn)行冰浴勻漿。16000g，4℃離心 20min，取上清置冰上待測(cè)。

測(cè)定：

分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱 30 min 以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)到 280 nm，蒸餾水調(diào)零。

在試劑三中加入 10ml 試劑二（振蕩混勻 1min），在 30℃水浴中預(yù)熱 10 min 以上。用不完的試劑 4℃

保存。

對(duì)照管：依次在微量石英比色皿/96 孔板中加入 20μl 樣本和 180μl 試劑二，30℃反應(yīng) 30min 后，記錄A對(duì)照。

測(cè)定管：依次在微量石英比色皿/96 孔板中加入 20μl 樣本和 180μl 試劑三，30℃反應(yīng) 30min 后，記錄A測(cè)定。

ΔA=A 測(cè)定-A 對(duì)照

LOX 活性計(jì)算：

按照蛋白濃度計(jì)算

活性單位定義：25℃中每毫克蛋白每分鐘催化吸光值變化 0.01 個(gè)單位為 1 個(gè)酶活單位。

LOX (U/mg prot) =ΔA×V 反總÷(Cpr×V 樣)÷T×100

= 33.33×ΔA÷Cpr

按照樣本質(zhì)量計(jì)算

活性單位定義：25℃中每克組織每分鐘催化吸光值變化 0.01 個(gè)單位為 1 個(gè)酶活單位。

LOX (U/g 鮮重) =ΔA×V 反總÷(W×V 樣÷V 樣總)÷T×100

= 33.33×ΔA÷W

Cpr：上清液蛋白濃度，mg/ml，需另外測(cè)定；V 反總：反應(yīng)體系總體積，200μl=0.2ml；V 樣：加入反應(yīng)體系中上清液體積，20μl=0.02ml；W ：樣品質(zhì)量，g；V 樣總：上清液總體積，1ml；T：反應(yīng)時(shí)間，30min。

脂氧合酶LOX活性測(cè)定試劑盒 脂肪酸系列