甘油三酯（triglyceride, TG）含量測定試劑盒說明書

微量法 100T/96S

甘油三酯含量測定試劑盒 脂肪酸系列

正式測定前務必取 2-3 個預期差異較大的樣本做預測定測定意義：

TG 是長鏈脂肪酸和甘油形成的脂肪分子，不僅是細胞膜的主要成分，也是重要呼吸底物。

測定原理：

用異丙醇提取TG，脂蛋白酯酶水解 TG 生成甘油和脂肪酸（FFA），甘油與三磷酸腺苷在甘油激酶和磷酸甘油氧化酶催化下生成 H2O2，過氧化物酶催化過氧化氫氧化 4-氨基安ti比林偶聯(lián)酚，生成有色化合物，在 505 nm 處有特征吸收峰。

組成：

自備儀器和用品：

酶標儀、臺式離心機、可調(diào)式移液槍、96 孔板、研缽、冰和蒸餾水

TG 的提取：

1、組織中TG 的提取：按照組織質(zhì)量（g）：試劑一體積(ml)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織，加入 1ml 試劑一）進行冰浴勻漿，8000g，4℃離心 10min，取上清，即TG 待測液。

2、細胞、細菌中 TG 的提?。合仁占?400-500 萬細胞或細菌到離心管內(nèi)，離心后棄上清，加 1ml 試劑一，超聲波破碎 1min（強度 20％，超聲 2s，停 1s），8000g，4℃離心 10min，取上清，即TG 待測液。

3、血清（漿）樣品：直接測定。

測定操作：

酶標儀預熱 30min，調(diào)節(jié)波長到 505 nm。

混勻，室溫下靜置 20min，于 505 nm 波長處讀取吸光值，記為 A 空白和A 測定，△A=A 測定-A 空白?？?span style="font-size: 18px; letter-spacing: 0px;">白管只需測一管。

計算公式：

標準曲線：y = 0.3261x - 0.0199； R² = 0.9979；x：標準品濃度（mg/ml） y：吸光值差值ΔA。

血清（漿）中甘油三酯含量計算：

TG 含量（mg/ml）=（ΔA+0.0199）÷ 0.3261=3.07×（ΔA+0.0199）

組織、細菌或細胞中甘油三酯含量計算：

(1)按樣本蛋白濃度計算

TG 含量（mg/ mg prot）= (ΔA+0.0199)÷0.3261×V 樣÷(Cpr×V 樣）=3.07×（ΔA+0.0199）÷Cpr (2)按樣本質(zhì)量計算

TG 含量（mg/ g 鮮重）=（ΔA+0.0199）÷0.3261×V 樣÷(W×V 樣÷V 樣總）=3.07×（ΔA+0.0199）÷ W

V 樣：加入樣本體積，0.01 ml；V 樣總：加入試劑一體積，1 ml；W：樣本質(zhì)量，g； Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/ml。

注意事項：

試劑盒中有易揮發(fā)性物質(zhì)，實驗過程中需佩戴手套和口罩，試劑瓶蓋打開后應該及時蓋緊。

最di檢出限為 100μg/ml。

甘油三酯含量測定試劑盒 脂肪酸系列