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北京諾博萊德科技有限公司
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當(dāng)前位置:北京諾博萊德科技有限公司>>分子生物學(xué)試劑>>T4原理載體及其他>> 42015通用T載體菌落PCR鑒定試劑盒 T4原理載體

通用T載體菌落PCR鑒定試劑盒 T4原理載體

參  考  價(jià)面議
具體成交價(jià)以合同協(xié)議為準(zhǔn)

產(chǎn)品型號42015

品       牌NobleRyder/諾博萊德

廠商性質(zhì)生產(chǎn)商

所  在  地北京市

更新時(shí)間:2025-04-24 10:31:32瀏覽次數(shù):48次

聯(lián)系我時(shí),請告知來自 化工儀器網(wǎng)
供貨周期 現(xiàn)貨 規(guī)格 100次
貨號 42015 應(yīng)用領(lǐng)域 環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)林牧漁,制藥/生物制藥
主要用途 用于某種特定T載體連接陽性克隆的鑒定。
菌落PCR鑒定是T載體克隆連接后鑒定是否有陽性克隆(含插入片段)最方bian快捷的方法。但是市面上能見到的菌落PCR鑒定試劑盒采用的都是T3,T7或者SP6等特異T載體引物,只能用于某種特定T載體連接陽性克隆的鑒定。
通用T載體菌落PCR鑒定試劑盒 T4原理載體

諾博萊德 通用T載體菌落PCR鑒定試劑盒 T4原理載體


通用T載體菌落PCR鑒定試劑盒

目錄號:42015

試劑盒組成、儲存、穩(wěn)定性:

組成

80次-100次

(V015-100)

400次-500次

(V015-500)

2 × Taq PCR MasterMix

1ml

5ml

Universal primer F

50ml

250ml

Universal primer R

50ml

250ml

ddH2O

1ml

5ml

儲存:-20 ℃ 保存。


具體產(chǎn)品的參數(shù)以收到產(chǎn)品說明書的參數(shù)為準(zhǔn)


產(chǎn)品介紹:

菌落PCR鑒定是T載體克隆連接后鑒定是否有陽性克?。ê迦肫危┳罘絙ian快捷的方法。但是市面上能見到的菌落PCR鑒定試劑盒采用的都是T3,T7或者SP6等特異T載體引物,只能用于某種特定T載體連接陽性克隆的鑒定。如果使用不同T載體,便需同時(shí)購買多種鑒定試劑盒,大大增加了使用成本。本公司采用通用T載體引物研制的通用T載體菌落PCR鑒定試劑盒,只需購買一種試劑盒,便可用于市面上所有常見的T載體(包括pGEM,pUC,pBluescript系列) 連接陽性克隆的鑒定。此外,采用T3,T7或者SP6做引物的菌落PCR鑒定試劑盒引物距離插入位點(diǎn)的距離非常短,因此在鑒定100bp左右或者更小片段的插入時(shí),陰性克隆的引物二聚體條帶和陽性克隆擴(kuò)增條帶大小接近,無法區(qū)分。往往把引物二聚體的條帶看成是陽性擴(kuò)增條帶,造成假陽性。反之,造成假陰性。本試劑盒通用T載體引物在未插入片段時(shí)的距離至少有150bp以上,加上插入片段的長度,可以清晰的區(qū)分是插入片段擴(kuò)增出的條帶還是引物二聚體擴(kuò)增出的條帶。避免假陽性或者假陰性,大大提高了準(zhǔn)確性。本公司研發(fā)的一管便攜式PCR MasterMix預(yù)混系統(tǒng),無需您一一加入各種成分,直接加入需篩選單菌落,經(jīng)過1小時(shí)左右的PCR反應(yīng)和電泳檢測即可得到重組菌落鑒定的結(jié)果。

預(yù)期擴(kuò)增片段:

T載體名稱

載體來源

未插入片段時(shí)

通用T載體引物間距離

預(yù)期擴(kuò)增片段長度

(以插入300bp片段舉例)

pGEM-T Easy

pGEM

281bp

581bp

pGEMX-T Easy

pGEM

289bp

589bp

pMD18-T

pUC18

158bp

458bp

pMD19-T

pUC19

158bp

458bp

pSURE-T

pUC19

239bp

539bp

pUCm-T

pUC19

239bp

539bp

pBLUE-T

pBluescript

300bp

600bp

注意事項(xiàng):

1.        重組菌落鑒定時(shí),挑取單菌落前,應(yīng)先做好標(biāo)記,便于鑒定后使用。

2.     挑取菌落時(shí),應(yīng)選擇單菌落,不要挑取太多菌體,以免影響PCR 結(jié)果。

3.    設(shè)定PCR 程序時(shí),請根據(jù)插入片段大小決定延伸時(shí)間,如果插入片段大小為1 kb 以下,延伸時(shí)間30-45 秒即可,如果片段更長,可按此比例增加延伸時(shí)間。

操作步驟(以25ml體系舉例,客戶也可以采用20ml體系):

1.   按以下體系配好含有引物的1 x Taq MasterMix 反應(yīng)液。

2 × Taq PCR MasterMix

12.5ml

UniversalprimerF(10mM)

0.5ml

UniversalprimerR(10mM)

0.5ml

ddH2O

11.5ml

2.將過夜培養(yǎng)的平板上的菌落編號后,使用滅菌的槍頭挑取一部分單菌落加入上述反應(yīng)液,吹打混勻使菌落充分分散到反應(yīng)液中。

可多設(shè)置一管不加菌落的陰性對照,以便于分析實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

3.將PCR管置于熱循環(huán)儀上按以下條件開始反應(yīng),建議條件如下:

94℃ 10 min

94℃ 30 sec

55℃ 30 sec        30-33 cycles

72℃ 0.5-1 min

72℃ 5 min

注意:延伸時(shí)間請根據(jù)插入片段大小調(diào)整。預(yù)變性時(shí)間延長到10分鐘,主要是為了裂解菌落,釋放DNA模板。

反應(yīng)結(jié)束后,取5-10ml直接上樣電泳檢測。

注:如果細(xì)菌難裂解或者雜質(zhì)多假陰性,嘗試下面的方法,裂解釋放DNA后進(jìn)行。

1.     挑取菌落加入 50ml dd水 (或者10ml dd水中),振搖。

2.    99 度,10分鐘滅活菌液中的酶,并釋放DNA。

3.      12000rpm 離心 1分鐘去除細(xì)胞碎片。

4.      取上清 PCR,25ml PCR體系取5ml上清(起始50ml dd水),或者1ml上清(起始10ml dd水)做模板。


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