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上海語(yǔ)純生物科技有限公司
初級(jí)會(huì)員·1年CC96403Y2HGold Chemically Competent Cell
| 參考價(jià): | 面議 |
具體成交價(jià)以合同協(xié)議為準(zhǔn)- CC96403 產(chǎn)品型號(hào)
- 語(yǔ)純生物 品牌
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訪問(wèn)次數(shù)：70更新時(shí)間：2025-04-24 10:16:33
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產(chǎn)品簡(jiǎn)介
| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 10 ×100ul/100×100ul |
|---|---|---|---|
| 貨號(hào) | CC96403 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 醫(yī)療衛(wèi)生,化工,生物產(chǎn)業(yè),制藥/生物制藥 |
產(chǎn)品貨號(hào)：CC96403
產(chǎn)品規(guī)格：10 ×100ul/100×100ul
本產(chǎn)品僅供科學(xué)研究或進(jìn)一步生產(chǎn)使用，不可用于臨床診斷或治療。
產(chǎn)品介紹
Y2HGold Chemically Competent Cell
產(chǎn)品簡(jiǎn)介
Y2HGold 菌株是 Clontech 公司開(kāi)發(fā)的 GAL4 系統(tǒng)酵母雙雜實(shí)驗(yàn)用菌株，MATa 型，可直接轉(zhuǎn)化質(zhì)粒
或與 MATα 型酵母菌株 Y187 通過(guò) mating 操作進(jìn)行蛋白互作驗(yàn)證或篩庫(kù)試驗(yàn)。Transformation marker
為：trp1，leu2，報(bào)告基因?yàn)椋?nbsp;AbAr，HIS3，ADE2，MEL1。Y2HGold-GAL4 酵母雙雜系統(tǒng)需要兩
種質(zhì)粒配套使用：pGBKT7 和 pGADT7。質(zhì)粒 pGBKT7 的篩選標(biāo)志為 TRP1，用于表達(dá) DNA-BD (來(lái)
自酵母轉(zhuǎn)錄因子 GAL4N 端 1 ~ 174 位氨基酸)與目標(biāo)蛋白 (Bait) 的融合蛋白；質(zhì)粒 pGADT7 的篩選
標(biāo)志為 LEU，用于表達(dá) AD(GAL4 C 端 768 ~ 881 位氨基酸)與目標(biāo)蛋白 (Prey)的融合蛋白。GAL4 系
統(tǒng)原理：一個(gè)完整的酵母轉(zhuǎn)錄因子 GAL4 可分為功能上相互獨(dú)立的兩個(gè)結(jié)構(gòu)域：位于 N 端 1 ~ 174
位氨基酸區(qū)段的 DNA 結(jié)合域 (DNA-BD)和位于 C 端 768 ~ 881 位氨基酸區(qū)段的轉(zhuǎn)錄激活域 (AD)。
DNA-BD 能夠識(shí)別 GAL4-responsive gene 的上游激活序列 UAS，并與之結(jié)合。而 AD 可以啟動(dòng) UAS
下游的基因進(jìn)行轉(zhuǎn)錄。BD 和 AD 單獨(dú)存在不能激活轉(zhuǎn)錄，但當(dāng)二者接近時(shí)，則呈現(xiàn)完整的 GAL4
活性，使含有 UAS 的啟動(dòng)子下游基因轉(zhuǎn)錄表達(dá)。正常條件下，BD 不與 AD 結(jié)合，將要檢測(cè)的蛋白
質(zhì)分別與 BD 和 AD 融合，形成 bait 融合蛋白 (bait -BD)和 prey 融合 蛋白 (prey-AD)，如果 bait 和
prey 發(fā)生相互作用，就會(huì)促使 BD 和 AD 的相互接近，形成完整的 GAL4，從而激活報(bào)告基因的轉(zhuǎn)
錄。Y2HGold 有四個(gè)報(bào)告基因：AbAr，HIS3，ADE2，MEL1，分別由三種不同的啟動(dòng)子 (G1，G2，
M1) 啟動(dòng)，這三種啟動(dòng)子只有 GAL4 識(shí)別的 17 bp 核心區(qū)相同，其余部分均不同，大大降低了酵母
雙雜假陽(yáng)性發(fā)生的概率。此外新報(bào)告基因 AbAr 與以前的營(yíng)養(yǎng)缺陷報(bào)告基因相比具有更低背景的優(yōu)
點(diǎn)，也可以降低酵母雙雜假陽(yáng)性發(fā)生的概率。Y2HGold 感受態(tài)細(xì)胞經(jīng)特殊工藝制作，-80℃可保存
三個(gè)月，pGADT7 質(zhì)粒檢測(cè)轉(zhuǎn)化效率>104cfu/μg DNA。
產(chǎn)品組分
名稱(chēng)
規(guī)格
儲(chǔ)存方式
Y2HGold Competent Cell
100 μl /支
-80℃（3 個(gè)月）
pGADT7 (control vector, 10 ng/μl)
10 μl
-80℃（12 個(gè)月）
Carrier DNA (10 μg/μl)
100 μl
-20℃（12 個(gè)月）
PEG/LiAC
5 ml
4℃（12 個(gè)月）
基因型：MATa, trp1-901, leu2-3, 112, ura3-52, his3-200, gal4Δ, gal80Δ, LYS2::GAL1UAS-Gal1TATA-His3,
GAL2UAS- Gal2TATA-Ade2 URA3::MEL1UAS-Mel1TATA AUR1-C MEL1
使用方法：
1. 從-80℃取出 Y2HGold 感受態(tài)細(xì)胞，置于冰上融化，依次加入預(yù)冷的目的質(zhì)粒 2-5 µg，Carrier
DNA (95-100℃，5 min，快 速冰浴，重復(fù)一次) 10 µl，PEG/LiAc 500 µl ，吸打混勻，30℃水浴 30
min (15 min 時(shí)翻轉(zhuǎn) 6 - 8 次混勻)。
32. 42℃水浴 15 min (7.5 min 時(shí)翻轉(zhuǎn) 6 - 8 次混勻)。
3. 5000 rpm 離心 40 s 棄上清，ddH2O 400 µl 重懸，離心 30 s 棄上清。
4. ddH2O 50 µl 重懸，涂板，29℃培養(yǎng) 48 - 96 h。
● 培養(yǎng)基配制
① YPDA (1L): Tryptone 20 g ，Yeast extract 10 g ，0.2% adenine 15 ml 補(bǔ)水到 950 ml，用鹽酸調(diào) pH
到 6.5； Agar 20 g(for plates only) 121℃，15 min 高壓滅菌； 待培養(yǎng)基溫度降到 55℃時(shí)，加入已過(guò)
濾的 40% 葡萄糖 50 ml。
② SD medium (1L): Yeast Nitrogen base 6.7 g ，葡萄糖 20 g ，Dropout 適量（按說(shuō)明書(shū)） 補(bǔ)水到 1L，
調(diào) pH 至 5.8； Agar 20 g(for plates only) 121℃，15 min 高壓滅菌。
③ 0.2% adenine (1L): Adenine 2 g,，補(bǔ)水到 1 L；溶解后高壓滅菌或 0.22 µm 濾膜過(guò)濾除菌。
注意事項(xiàng)
1. 感受態(tài)細(xì)胞最好在冰上融化。
2. 轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì)?？上鄳?yīng)減少最終用于涂板的菌量。
3. 同時(shí)轉(zhuǎn)化 2 - 3 種質(zhì)粒時(shí)可增加質(zhì)粒的用量。
4. Y2HGold 酵母菌株對(duì)高溫敏感，最適生長(zhǎng)溫度為 27 - 30℃；高于 31℃，生長(zhǎng)速度和轉(zhuǎn)化效率呈
指數(shù)下降。
5. 菌落變粉不是污染，是酵母細(xì)胞生長(zhǎng)中一個(gè)常見(jiàn)現(xiàn)象。當(dāng)細(xì)胞在平板培養(yǎng)幾天后，平板上的
Adenine 被酵母消耗完畢，酵母試圖通過(guò)自身代謝途徑合成 Adenine 以供利用，然而，有些菌株的
ADE2 基因被破壞，Adenine 合成途徑受阻；又由于其 ADE4,5,6,7,8 基因均正常，所以造成中間產(chǎn)物
P-ribosylamino imidazole (AIR) 在細(xì)胞中積累而使菌落變?yōu)榉奂t色。
6. 酵母在缺陷培養(yǎng)基中生長(zhǎng)速度比 YPDA 培養(yǎng)基慢，培養(yǎng)基中缺陷成分越多，生長(zhǎng)越慢，以轉(zhuǎn)化涂
板為例：涂 YPDA 平板 29℃，48 h 培養(yǎng)可見(jiàn)直徑 1 mm 克??；涂 SD 單缺平板 29℃，48 - 60 h 培養(yǎng)
可見(jiàn)直徑 1 mm 克隆，涂 SD 雙缺平 板 29℃，60 - 80 h 培養(yǎng)可見(jiàn)直徑 1 mm 克隆，涂 SD 三缺或四缺
平板平板 29℃，80 - 90h 培養(yǎng)可見(jiàn)直徑 1 mm 克隆。
Y2HGold Chemically Competent Cell
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