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產(chǎn)品簡介：

免DNA提取PCR試劑盒是可以直接用新鮮的動物、植物、細菌樣品的裂解液進行 PCR 擴增的試劑盒。免 DNA 提取 PCR，即在傳統(tǒng) PCR 技術的基礎上，免去 DNA 提取步驟。

規(guī)格及成分：

免 DNA 提取 PCR 試劑盒第一部分，常溫運輸和保存。

免 DNA 提取 PCR 試劑盒第二部分，低溫運輸，-20℃保存。

產(chǎn)品參數(shù)：

產(chǎn)品規(guī)格

400次

保存和運輸

常溫運輸及保存，2×PCR MasterMix 需要低溫運輸，-20℃保存。有效期一年。

自備試劑：

自備PCR 引物，陽性 DNA 樣品，超純水。

使用方法：

1.首-次使用本制品時需要詳細檢查免 DNA 提取 PCR 溶液 A 和免 DNA 提取PCR 溶液B 是否有結(jié)晶析出。如果有需要 37℃溶解后搖晃均勻待用。未用完部分可以放常溫保存。

2.根據(jù)材料不同參考下表取少量樣品到 1.5 mL 塑料離心管中。

3.注意：未列出的樣品，用戶需要自己摸索最佳用量。對富含多醌多酚的植物材料（如棉花），組織使用量最好不要超過0.5 mg。

4.加入100 μL免DNA提取PCR溶液A，確保免DNA提取PCR溶液A完-全將樣品淹埋。

5.用離心管專用研磨杵小心將樣品在離心管內(nèi)搗碎。血液一般情況搗碎30秒即可；實體組織需要搗碎到溶液的顏色變渾濁（植物葉片的話，溶液的顏色將變成綠色）。如需更多研磨杵，可從我司另購。對棘手的樣品，還可以增加95℃保溫10～60分鐘一步，待溫度冷卻到室溫后再進入下一步。殘留的實 體組織碎片不會影響后續(xù)試驗。

6.加入100 μL免DNA提取PCR溶液B，震蕩10秒混勻。

7.常溫12000×g離心2分鐘。

8.將上清液轉(zhuǎn)移到一個干凈的1.5 mL離心管中。如果不用，可以放-80℃長期保存。如果用于后續(xù)PCR，請直接進入下步。

9.簡短振蕩混勻后取樣品裂解產(chǎn)物原液用超純水進行梯度稀釋（1E1-1E5）， 分別取5 μL直接進行30 μL體系的PCR擴增，選能檢測到的梯度作為模板。如果有N個樣品則設置N+3個PCR管，其中N個用于待檢測樣品，1個用于水的陰性對照，一個用于免DNA提取PCR溶液A和B混合液的陰性對照，另一個用于陽性DNA樣品的陽性對照。30 μL體系的PCR反應體系如下：

成份N 個

樣品管陰性對

照管 1陰性對

照管 2陽性

對照管

2×PCR MasterMix15 μL15 μL15 μL15 μL

細胞裂解液（來于上步）5 μL不加不加不加

免 DNA 提取 PCR 溶液 A 和 B

混合液

不加

不加

5 μL

不加

陽性 DNA 樣品不加不加不加5 μL

自備PCR 引物 1（10 μM）1 μL1 μL1 μL1 μL

自備PCR 引物 2（10 μM）1 μL1 μL1 μL1 μL

補自備超純水到30 μL30 μL30 μL30 μL

注意：裂解液體積最好不要超過 PCR 體積的 1/10。如果需要增加模板的加入量，則 PCR 體系應該相應的增加。如果加入 5 μL 裂解液，則可以使用 50 μL 的PCR 體系。

10.放入 PCR 儀中進行 PCR，PCR 參數(shù)需要根據(jù)引物 Tm 值和靶分子長度等參數(shù)設置。一般不低于 35 次循環(huán)。

11.PCR 結(jié)束后取 5～10 μL 直接上樣電泳（本產(chǎn)品不需要上樣液），紅色染

料電泳速度相當于 50 bp DNA 片段。

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