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產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

蛋白質(zhì)定量是蛋白質(zhì)研究中的一項(xiàng)基礎(chǔ)性工作，有多種方法可以測(cè)定蛋白質(zhì)的濃度，其中就包括 Biuret 雙縮脲法。其原理是在強(qiáng)堿性溶液中，雙縮脲與CuSO4 反應(yīng)形成紫色絡(luò)合物，其顏色的深淺與蛋白質(zhì)濃度成正比，而與蛋白質(zhì)分子量及氨基酸組成無(wú)關(guān)，故可用來進(jìn)行蛋白質(zhì)定量檢測(cè)。雙縮脲法反應(yīng)的示意圖如下：

產(chǎn)品特點(diǎn)：

1.即開即用，用戶只需要提供樣本。

2.檢測(cè)跟蛋白質(zhì)分子量及氨基酸組成無(wú)關(guān)，只能濃度相關(guān)。

3.一步法操作，操作簡(jiǎn)單快速，只需要 20 分鐘，干擾因素少。但硫酸銨和 Tris

和某些氨基酸會(huì)干擾。

4.該方法適用于蛋白質(zhì)濃度較高的樣品，尤其是動(dòng)物材料。

5.起始材料可以是實(shí)體動(dòng)物或植物組織、懸浮的微生物或液體樣本。

6.可測(cè)的蛋白質(zhì)濃度范圍為 1-20 mg/mL，靈敏度較低，適合測(cè)定血液中蛋白的濃度（蛋白質(zhì)濃度為 60-80 mg/mL，適當(dāng)稀釋后適合用本方法測(cè)定）。

7.本產(chǎn)品足夠 50 次體積為 1 mL 比色皿檢測(cè)，或 150 次體積為 300 ?L 的

96 孔板檢測(cè)。

8.蛋白濃度測(cè)試試劑盒（Biuret 雙縮脲法）只能用于科研。

產(chǎn)品參數(shù)：

產(chǎn)品規(guī)格

保存和運(yùn)輸

常溫運(yùn)輸和保存，但牛血清白蛋白標(biāo)準(zhǔn)品需要低溫運(yùn)輸，-20℃保存，有效期一年。

自備試劑

蛋白提取液（不得含有硫酸銨和Tris）、蒸餾水、PBS 或生理鹽水

使用方法：

一、樣本蛋白提取

9.對(duì)于實(shí)體組織樣本：按照組織質(zhì)量（g）：自備蛋白提取液體積（mL）為 1： 5~10 的比例將組織樣品加入到蛋白提取液中（0.1 g 組織需要 1 mL 蛋白提取液），冰浴勻漿，10000 rpm 4℃離心 10 分鐘，取上清待測(cè)。由于動(dòng)物組織的蛋白濃度常常較高，故最好預(yù)實(shí)驗(yàn)確定稀釋多少倍后蛋白質(zhì)的濃度才會(huì)在本試劑盒的線性范圍。

10.對(duì)于細(xì)菌真菌樣本：按照細(xì)胞數(shù)量（1E4 個(gè)）：自備蛋白提取液體積（mL） 為 500~1000：1 的比例將細(xì)胞和蛋白提取液混合（500 萬(wàn)細(xì)胞需要加入 1 mL 蛋白提取液），冰浴超聲波破碎細(xì)胞（功率 300 w，超聲 3 秒，間隔 7 秒，總時(shí)間 3 分鐘），然后 8000×g 4℃離心 10 分鐘，取上清置于冰上待測(cè)。

11.對(duì)于液體樣品，無(wú)需進(jìn)行額外處理，可直接進(jìn)行后續(xù)測(cè)定步驟。

二、蛋白濃度測(cè)定（1 mL 比色皿法）

12.準(zhǔn)備 N+2 個(gè) 1.5 mL EP 管，N 個(gè)用于待測(cè)樣品、1 個(gè)用于標(biāo)準(zhǔn)品，1 個(gè)用于空白對(duì)照。

13.按下表在各管中加入各成分：

成分N 個(gè)樣本管標(biāo)準(zhǔn)管空白管

雙縮脲法蛋白定量溶液A各 600 μL600 μL600 μL牛血清白蛋白標(biāo)準(zhǔn)品不加300 μL不加2 mg/mL

N 個(gè)待測(cè)樣本各 300 μL不加不加自備蒸餾水不加不加300 μL

總體積900 μL900 μL900 μL

14.混勻后室溫靜置 15 分鐘。

15.測(cè)定 540 nm 處的吸光度。

三、蛋白濃度測(cè)定（0.3 mL 96 孔板酶標(biāo)儀檢測(cè)法）

16.在 96 孔板中的 N+2 個(gè)對(duì)應(yīng)孔中，預(yù)留 N 個(gè)用于待測(cè)樣品、1 個(gè)用于標(biāo)準(zhǔn)品，1 個(gè)用于空白對(duì)照。

17.按下表在各孔中加入各成分：

成分N 個(gè)樣本孔標(biāo)準(zhǔn)孔空白孔

雙縮脲法蛋白定量溶液A各 200 μL200 μL200 μL

牛血清白蛋白標(biāo)準(zhǔn)品

2 mg/mL不加100 μL不加

N 個(gè)待測(cè)樣本各 100 μL不加不加

自備蒸餾水不加不加100 μL

總體積300 μL300 μL300 μL

18.混勻后室溫靜置 15 分鐘。

19.測(cè)定 540 nm 處的吸光度。所得標(biāo)準(zhǔn)品光吸收四、蛋白濃度計(jì)算

20.組織樣品：蛋白質(zhì)濃度（mg/g 鮮重）=C 標(biāo)÷(A 標(biāo)－A 空)×(A 樣-A 空)×V總÷W 樣品

說明：C 標(biāo)=標(biāo)準(zhǔn)品的濃度=2 mg/mL，A 標(biāo)=標(biāo)準(zhǔn)品的光吸收值，A 空=空白管的光吸收值，A 樣=樣本管的光吸收值，V 總=樣本總體積mL，W 樣品

=樣品鮮重 g。

21.細(xì)胞樣品：蛋白質(zhì)濃度（mg/1E4cell）=C 標(biāo)÷(A 標(biāo)－A 空)×(A 樣－A空)×V 總÷Q 細(xì)胞相對(duì)數(shù)

22.說明：Q 細(xì)胞相對(duì)數(shù)=細(xì)胞總數(shù)/1E4

23.液體樣品：蛋白質(zhì)（mg/mL）=C 標(biāo)÷(A 標(biāo)－A 空)×(A 樣－A 空)。

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