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產品簡介：

堿變性法是最常見的質粒 DNA 提取方法，其過程是首先菌體經離心懸浮后，細胞被 SDS 和堿裂解，并且堿使基因組 DNA 和質粒DNA 變性，隨后用酸中和，質粒DNA 可以快速復性，而基因組 DNA 不能快速復性，故可以通過離心去除。如果用柱式法，則含質粒 DNA 的上清用離心吸附柱吸附質粒DNA，洗去雜質，得到純化的質粒 DNA。但此方法不適合特別大的質粒。因此本公司推出沉淀法，用于純化柱式法不能回收的質粒 DNA。

產品特點：

1.快速、步驟少，整個操作在 40 分鐘左右完成。

2.質粒 DNA 純化溶液 B 中有藍色染料，便于目測非常關鍵的堿變性和中和反應兩步的溶液混勻狀況，保證實驗效果。

3.產量高，一次可以處理 1-5 mL 過夜培養(yǎng)的菌液，每毫升過夜培養(yǎng)的菌液可以提取到 2-5 ?g/mL（取決于質粒是高拷貝、中拷貝還是低拷貝）。

4.本產品足夠 50 次微量提取。

5.純度高，采用本試劑盒提取的質粒 OD 比值在 1.8-2.0 之間，可以直接用于酶切、轉化、測序及PCR 等。

6.質粒 DNA 純化試劑盒（沉淀法）只能用于科研。

產品參數：

產品規(guī)格

成分規(guī)格包裝

質粒 DNA 純化溶液A13 mL15 mL 本色瓶

質粒 DNA 純化溶液 B13 mL15 mL 棕色瓶

質粒 DNA 純化溶液 C18 mL30 mL 本色瓶

RNase A 溶液，10 mg/mL0.6 mL1.5 mL 本色管

去蛋白溶液30 mL30 mL 棕玻瓶

質粒沉淀液30 mL30 mL 本色瓶

DNA 洗脫液（基因組純化專用）10 mL10 mL 本色瓶

使用手冊1 份無

保存和運輸

常溫運輸和保存，RNase A 溶液需要-20℃保存低溫運輸，有效期一年。

自備試劑

75%乙醇。

使用方法：

從篩選平板上挑取單菌落至含抗生素的培養(yǎng)基中，37℃震蕩培養(yǎng) 12-16 小時（搖床轉速 200-300）。注意：建議使用 LB 培養(yǎng)基，營養(yǎng)更豐富的培養(yǎng)基會使菌體濃度過高，超過純化系統(tǒng)的處理能力而降低質粒 DNA 的質量。另外，延長培養(yǎng)時間會因細胞死亡、裂解而造成質粒 DNA 濃度降低。

2.用 1.5 mL 離心管收集 1-5 mL 過夜培養(yǎng)飽和菌液，室溫 12,000×g 離心 1 分鐘，棄上清，再短暫離心，吸棄殘留液體。

3.第一次使用本試劑盒時，先將本試劑盒提供的全部 RNase A 溶液加入到質粒DNA 純化溶液 A（簡稱溶液 A，下同）中，搖勻后再取用，未用完的溶液 A 放 4℃ 保存。

4.加入 250 ?L 溶液 A 到第 2 步得到的細菌沉淀中，用槍頭充分吹打使菌體重懸。注意：細胞未充分懸浮會影響后續(xù)堿變性，可以使用漩渦振蕩器混勻或使用槍頭吸頭吹打沉淀至完-全混勻。

5.加入 250 ?L 質粒 DNA 純化溶液 B（下面簡稱溶液B，如果溶液 B 在低溫放置產生沉淀，須 37℃加熱溶解后冷卻到室溫方可使用），溫和顛倒 4-6 次混勻， 藍色將變得均勻并且溶液將變得粘稠。注意：千萬不要劇烈振蕩，否則基因組DNA 斷裂產生的片段非常容易污染質粒 DNA。

6.冰上放置不超過 5 分鐘。注意：冰上放置不要超過 5 分鐘，否則質粒 DNA 會有堿損傷。溶液 B 用后需要將蓋擰緊存放，否則空氣中的二氧化碳會進入溶液，形成碳酸，中和溶液 B 中的堿，降低其效率。如果溶液 B 顏色不是藍色，則表示變質，應該棄之不用并且跟廠家聯(lián)系。

7.加入 350 ?L 冰上預冷的質粒 DNA 純化溶液 C（下面簡稱溶液C），溫和反復顛倒 4-6 次，溶液將變成無色，將有白色絮狀沉淀產生。

8.冰上放置至少 5 分鐘讓質粒 DNA 復性。不能短于 5 分鐘，一般 10 分鐘。

9.12,000×g 離心 3 分鐘，小心將上清液轉移到新離心管中。由于此時的溶液比重較大，部分絮狀物懸浮在上清液中屬正?，F(xiàn)象，吸取上清時避開這些懸浮物即可。如果此步的離心在 4℃進行，可減輕沉淀物漂浮。

10.加入 0.6 mL 去蛋白溶液，充分震蕩 2 分鐘后常溫 12，000×g 離心 2 分鐘， 取水相（無色）到新離心管中，不要取有顏色的部分。

11.加等體積的質粒沉淀液，顛倒 30 秒混勻后室溫 12,000×g 離心 10 分鐘，質粒

DNA 將形成沉淀，棄上清。

12.加入 1 mL 的自備 75%乙醇，室溫 12,000×g 離心 1 分鐘，棄上清。

13.室溫 12,000×g 離心 1 分鐘，取出殘留液體（約 50 ?L）。

14.室溫短暫放置半分鐘。

15.加入 DNA 洗脫液 50-100 ?L 重懸沉淀，即得質粒 DNA 溶液，可以直接用于后續(xù)實驗。

選擇我們的質粒 DNA 純化試劑盒（沉淀法），就是選擇精準、高效、可靠的檢測方案，為您的科研實驗保駕護航！