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產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

本產(chǎn)品是一種通過化學(xué)處理釀酒酵母和裂殖酵母電感受態(tài)細(xì)胞，使之不但馬上能用于電轉(zhuǎn)化，還能長(zhǎng)期放置后用于電轉(zhuǎn)化。

產(chǎn)品特點(diǎn)：

1.操作簡(jiǎn)單，單溶液制備，除酵母培養(yǎng)的時(shí)間外，整個(gè)操作只需要 10 余分鐘。

2.制備得到的感受態(tài)細(xì)胞可以-80℃保存一年，方便多次使用，免去每次轉(zhuǎn)化都要新鮮制備感受態(tài)細(xì)胞。

3.主要用于釀酒酵母和粟酒裂殖酵母，但能否用于其他酵母不詳。

4.最高轉(zhuǎn)化效率可達(dá)到 0.2-1×10E6 個(gè)轉(zhuǎn)化子/μg 質(zhì)粒 DNA。

5.得到的感受態(tài)細(xì)胞可以用各種線性或環(huán)狀酵母穿梭質(zhì)粒 DNA 進(jìn)行轉(zhuǎn)化，例如

YIp,YRp,YCp,YEp 和 YAC 等。

6.可以用于酵母雙雜交、定點(diǎn)突變、基因破壞、等位突變基因修復(fù)等實(shí)驗(yàn)。

7.酵母電轉(zhuǎn)感受態(tài)細(xì)胞制備試劑盒足夠處理 200 mL 酵母菌液，制備 40 管酵母感受態(tài)細(xì)胞。

產(chǎn)品參數(shù)：

成分規(guī)格包裝

酵母電轉(zhuǎn)感受態(tài)細(xì)胞制備試劑A100 mL120 mL 本色瓶

使用手冊(cè)1 份無

運(yùn)輸及保存

常溫運(yùn)輸和保存，有效期一年。

自備試劑

滅菌水、SD 液體培養(yǎng)基（不含氨基酸的 0.67%Bacto Yeast Nitrogen Base，2%葡萄糖）、SD 固體培養(yǎng)基（在 SD 液體培養(yǎng)基中再加 2%瓊脂）、YPD 液體培養(yǎng)基（1%Bacto Yeast Extract，2%Bacto Peptone,2%葡萄糖）、YPD 固體培養(yǎng)基（在 YPD 液體培養(yǎng)基中再加 2%瓊脂）

使用方法：

一：電感受態(tài)細(xì)胞的制備

說明：按本方法制備 1 管酵母電轉(zhuǎn)感受態(tài)細(xì)胞就需要 OD600 達(dá)到 1.0 的新鮮酵母培養(yǎng)液 5 mL，用戶需根據(jù)制備的酵母感受態(tài)細(xì)胞數(shù)量決定培養(yǎng)細(xì)胞的體積。下面操作只是以 10 mL 酵母為例說明。

1.培養(yǎng)粟酒裂殖酵母細(xì)胞：挑取新鮮單菌落（4℃放置不超過 3 周的也可以），接種到

10 mL SD 液體培養(yǎng)基中。30℃搖晃培養(yǎng)，搖床速度 250 rpm/分鐘，直到 OD600 達(dá)到 1.0 左右（相當(dāng)于 1×10E7 細(xì)胞/mL）。

2.培養(yǎng)釀酒酵母細(xì)胞：挑取新鮮單菌落（4℃放置不超過 3 周的也可以），接種到裝在10 mL YPD 液體培養(yǎng)基中。30℃搖晃培養(yǎng)，搖床速度 250 rpm/分鐘，直到 OD600達(dá)到 1.0 左右（相當(dāng)于 1×10E7 細(xì)胞/mL）。

3.冰上放置 15 分鐘后室溫 1600 rpm 離心 5 min，棄上清。

4.用冰浴的滅菌水洗滌 3 次。

5.用 0.2 mL 冰浴的酵母電轉(zhuǎn)感受態(tài)細(xì)胞制備試劑A 重懸細(xì)胞。

6.按每管 0.1 mL 分裝到 1.5-2 mL 的冷凍管中，直接放入-80℃冰箱待用。注意：不能放在液氮中，否則將喪失電轉(zhuǎn)化能力。

二：電轉(zhuǎn)化酵母感受態(tài)細(xì)胞

1.將裝有 0.1 mL 感受態(tài)細(xì)胞的冷凍管從冰箱取出的、放置在 30℃水浴中快速化凍（快速化凍的效果好于緩慢化凍）。

2.用 1 mL 冰浴的酵母電轉(zhuǎn)感受態(tài)細(xì)胞制備試劑 A 洗滌一次。

3.加入 50 μL 冰浴的酵母電轉(zhuǎn)感受態(tài)細(xì)胞制備試劑A 重懸細(xì)胞。

4.加入 1-30 ng 質(zhì)粒 DNA 并輕柔混勻。

5.轉(zhuǎn)移到預(yù)冷的、距離為 0.2 cm 的電擊杯中。

6.按電擊儀的手冊(cè)設(shè)置電擊參數(shù)并進(jìn)行電擊處理，參考條件為：10kV/cm(對(duì)

0.2 cm 的電擊杯，則為 2kV)，5 ms(25  F,200)（各廠家儀器的使用略有不同，請(qǐng)嚴(yán)格按電擊儀廠家提供的手冊(cè)進(jìn)行操作）。

7.電擊后將細(xì)胞轉(zhuǎn)移到 1mL 預(yù)冷的本產(chǎn)品中，輕柔混勻。

8.取 0.2 mL 轉(zhuǎn)化細(xì)胞涂盤（粟酒裂殖酵母細(xì)胞需涂盤在 SD 固體培養(yǎng)基上， 釀酒酵母細(xì)胞需涂盤在YPD 固體培養(yǎng)基上），30℃培養(yǎng) 4-6 天。

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