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供貨周期 | 現貨 | 規(guī)格 | 50次 |
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貨號 | XY-D-1767 | 應用領域 | 化工,生物產業(yè) |
主要用途 | 科研 | 英文名稱 | Probe qRT-PCR Kit |
保存條件 | -20℃ | 有效期 | 1年 |
產品簡介:
本產品是基于熒光探針檢測的即用型 RT-PCR 試劑盒,可以對靶 RNA 分子進行實時定量 RT-PCR 分析(quantitative RT-PCR、qRT-PCR)。產品含有經過優(yōu)化的緩沖液組分、逆轉錄酶、熱啟動 Taq DNA 聚合酶、Taq DNA 穩(wěn)定劑dNTPs、MgCl2 和穩(wěn)定劑等所有實時定量 RT-PCR 所需要的成分,用戶只需加入 RNA 模板、引物和探針即可進行探針法實時定量 RT-PCR 反應,具有廣泛的用途。
產品特點:
1.以 2×Mix 提供,用戶只需準備模板、引物、探針和 ROX 染料(取決于 qPCR儀器)即可以進行探針法實時定量 RT-PCR 實驗,非常方便快捷,降低了操作誤差。
2.各成分的濃度和比例都經過精心優(yōu)化,反應的靈敏度高,特異性強。靈敏度 最高時可以達到 50 拷貝/反應(跟模板質量,引物設計等相關)。
3.既可用于TaqMan 探針qRT-PCR,也可以是分子信標(molecular beacon的 qRT-PCR。
4.靈敏度和專一性比染料法熒光定量 RT-PCR 更高。
5.可用于基因表達分析、SNP 分析、拷貝數分析等實驗。也可以用于定性檢。
6.探針法qRT-PCR試劑盒只能用于科研,1 mL 足夠 100 次 20 μL 體系的探針法 qRT-PCR反應。
產品參數:
產品規(guī)格
50次
運輸及保存
低溫運輸,-20℃保存,保存期限為 12 個月。
放置三周。
自備試劑
RNA 模板、引物、TaqMan 探針、超純水。
使用方法:
一、如果有 N 個樣品并且做定量分析,最好設置 N+7 個反應,多出的 7 個中, 6 個是做標準曲線的陽性對照,一個是陰性對照(NC)。在 N+7 個 PCR 管中加入下列成分。如果是做定性分析,則 6 個做標準曲線的樣品縮減成一個陽性對
照(PC),用戶自己需要根據下表進行適當修改(把 6 個標曲反應改成 1 個陽
性對照反應)。
成分N 個樣品
管6 個標準曲線
管NC 管
探針法 qRT-PCR 緩沖液各 10 μL10 μL10 μL
自備引物 1(10 μM)各 1 μL各 1 μL1 μL
自備引物 2(10 μM)各 1 μL各 1 μL1 μL
N 個自備模板 RNA各 1-2 μL不加不加
自備陽性對照模板(6 個梯度)不加各 1 μL(1 管
加 1 個梯度)不加
陰性對照模板(水)不加不加1 μL
自備探針(5 μM)各 1 μL各 1 μL1 μL
自備 50×ROX I 染料或自備
50×ROXII 染料(見注)各 0.4 μL各 0.4 μL0.4 μL
探針法 qRT-PCR 酶混合液2 μL2 μL2 μL
補超純水到20 μL20 μL20 μL
注,下列信息僅供參考,具體以 qPCR 儀器的使用手冊為準。
1、不需要ROX 的機型:AgilentMX3000 和MX4000、iCycler IQ、LightCycler 480、SmartCycler System、Thermal Cycler Dice RealTime System 等型號的熒光 PCR 儀器不需要加 ROX 染料,但加入的話也不會影響整個 PCR 分析2、需要使用ROXI 的機型:ABIPrism7000、7300、7700、7900HT、Step One Step One Plus。
3、需要使用 ROXII 的機型:ABIPrism7500、7500Fast、MJ Opticon、MJ Chromo4、CorbettRotorGene3000。
二、放入熒光 PCR 儀中進行擴增, 下表的擴增參數僅供參考,一定需要根據靶分子長度,引物和探針的 Tm 值、標記染料的種類等進行調節(jié)。一般選擇三步法PCR:蓋上蓋子后上機,按下面參數進行 RT-PCR:
三、數據處理
1. 如果把本試劑盒用于定量檢測,則以陽性對照濃度的 log 值為橫軸,以 Ct 值為縱軸,繪制標準曲線。再以待測樣品的 Ct 值從標準曲線上推算出樣品DNA 濃度的 log 值,再推算出其濃度。如果把本試劑盒用于定性檢測,只判斷陽性或陰性。一般情況下,陰性對照 Ct 大于或等于 40(閾值需要以陰性
對照的Ct 值確定,此處為便于敘述以40 為例,具體情況很可能閾值不一樣)
陽性對照必須有熒光對數增長,有典型擴增曲線,Ct 值應該小于或等于 30。對待測樣品,如果其 Ct 大于或等于 40 則為陰性,如果小于或等于 35 則為陽性。如果在 35-40 之間,則重復一次。重復實驗的 Ct 值如果大于或等于
40 則為陰性,如果小于 40,則為陽性。
選擇我們的探針法qRT-PCR試劑盒,就是選擇精準、高效、可靠的檢測方案,為您的科研實驗保駕護航!