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產(chǎn)品簡介：

細胞增殖及細胞毒性檢測試劑盒，簡稱 CCK-8（Cell Counting Kit-8）試劑盒，是一種基于 WST-8 的廣泛應(yīng)用于細胞增殖和細胞毒性的快速高靈敏度檢測試劑盒。WST-8 是一種類似于 MTT 的化合物，在電子耦合試劑 1-Methoxy PMS 存在的情況下，可以被還原生成橙黃色水溶性的甲臜（Formazan）。細胞增殖越多越快，則顏色越深；細胞毒性越大，則顏色越淺。對于同樣的細胞，顏  色的深淺和細胞數(shù)目呈線性關(guān)系。

產(chǎn)品參數(shù)：

成分規(guī)格包裝

細胞增殖及細胞毒性檢測溶液

100 次1 mL 本色管

使用手冊1 份無

運輸及保存

低溫運輸，-20℃保存，有效期 12 個月，避免反復(fù)凍融。

自備試劑

96 孔板，酶標儀，420-480 nm 的濾光片

使用方法：

一、胞增殖及細胞毒性實驗

1.在 96 孔板中接種細胞懸液（100 ?L/孔），通常細胞增殖實驗每孔約 2000 個細胞，細胞毒性實驗每孔約 5000 個細胞。具體每孔所用的細胞的數(shù)目， 需根據(jù)細胞的大小，細胞增殖速度的快慢等因素決定。

2.按照實驗需要，進行培養(yǎng)并給予 0-10 ?L 特定的藥物刺激，處理一段適當?shù)臅r間（例如:6，12，24 或 48 小時）。

3.每孔加入 10 ?L 細胞增殖及細胞毒性檢測溶液。如果起始的培養(yǎng)體積為 200

?L，則需加入 20 ?L 細胞增殖及細胞毒性檢測溶液，以此類推?？梢杂眉酉鄳?yīng)量細胞培養(yǎng)基和細胞增殖及細胞毒性檢測溶液但不加細胞的孔作為空  白對照，若擔(dān)心所使用的藥物會干擾檢測，可以設(shè)置加相應(yīng)量細胞培養(yǎng)液、藥物和細胞增殖及細胞毒性檢測溶液不加細胞的孔作為空白對照。

4.在細胞培養(yǎng)箱內(nèi)繼續(xù)孵育 1-4 小時，具體時間可以通過預(yù)實驗確定。預(yù)實驗時可以在 0.5，1，2 和 4 小時后分別用酶標儀檢測，然后選取吸光度范圍比較適宜的一個時間點用于后續(xù)實驗。注意：使用酶標儀前需確保每個孔內(nèi)  沒有氣泡，否則會干擾測定。

5.用酶標儀測定在 450 nm 處的吸光值，若無 450 nm 濾光片，可以使用420-480 nm 的濾光片。如果樣品為高渾濁度的細胞懸液，可以使用大于600 nm 的波長，例如 650 nm，作為參考波長進行雙波長測定。

6.如果需要暫時不測定 OD 值，可以向每孔中加入 10 ?L 0.1M HCl 溶液或者 1% w/v 的 SDS 溶液，避光保存在室溫，24 小時內(nèi)吸光度不會發(fā)生變化。

二、實驗結(jié)果分析

7.  細胞活力 = [OD(加藥) - OD(空白)] / [OD(0 加藥) - OD(空白)] × 100%。

8.  抑制率 = [OD(0 加藥) - OD(加藥)] / [OD(0 加藥) - OD(空白)] × 100%。

9.OD(加藥)：具有細胞、培養(yǎng)基、CCK-8 溶液和藥物溶液的孔的吸光值。

10.OD(空白)：具有培養(yǎng)基、細胞增殖及細胞毒性檢測溶液，沒有細胞的孔的吸光值。

11.OD(0 加藥)：具有細胞、培養(yǎng)基、細胞增殖及細胞毒性檢測溶液，沒有藥物

溶液的孔的吸光值。

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