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產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

本產(chǎn)品利用酶法對(duì) DNA 進(jìn)行片段化。

產(chǎn)品特點(diǎn)：

1.即開(kāi)即用，用戶(hù)不用單獨(dú)購(gòu)買(mǎi)各種成分并進(jìn)行優(yōu)化。

2.操作簡(jiǎn)便省時(shí)，只需要在樣本中加入片段化酶，再反應(yīng)一段時(shí)間即可。

3.跟后續(xù)的高通測(cè)序（NGS）兼容。

4.安全無(wú)毒，本試劑盒對(duì)人體無(wú)毒，無(wú)腐蝕性和刺激性氣味。

5.性?xún)r(jià)比高。

6.本產(chǎn)品足夠 20 次 DNA 片段化反應(yīng)。

7.DNA 片段化試劑盒（酶法）只能用于科研。

產(chǎn)品參數(shù)：

成份規(guī)格包裝

片段化酶 120μL0.5mL 紅蓋管

片段化酶 1 稀釋液1040μL1.5mL 綠蓋管

DNA 片段化溶液 A20μL0.5mL 白蓋管

DNA 片段化溶液 B50μL0.5mL 白蓋管

DNA 片段化反應(yīng)終止液400μL0.5mL 本色管

150 mM MgCl2 溶液40μL0.5mL 本色管

片段化酶 2 稀釋液200μL0.5mL 綠蓋管

片段化酶 220μL0.5mL 紅蓋管

DNA 級(jí) EDTA 溶液50μL0.5mL 本色管

超純水1mL×101mL 藍(lán)蓋管

使用手冊(cè)1 份無(wú)

運(yùn)輸及保存

低溫運(yùn)輸、-20℃保存，有效期一年。

自備試劑

電泳上樣緩沖液，推薦使用 Orange G 作為電泳示蹤劑，因?yàn)殇宸铀{(lán)（BPB）和

二甲苯青（Xylene Cyanol）與 DNA 片段重疊，應(yīng)避開(kāi)使用。

使用方法：

一、基因組 DNA 片段化反應(yīng)

1.確定反應(yīng)體積。

2.基因組 DNA 在 100ng 以下使用 10μL 反應(yīng)體系；基因組 DNA 在 100ng～ 1μg 之間使用 20μL 反應(yīng)體系。注意：基因組 DNA 超過(guò) 1μg 時(shí)，以 1μg/20 μL 的反應(yīng)體系增加反應(yīng)管數(shù)或擴(kuò)大反應(yīng)體系，很好地為 5μg/100μL。

3.將 2 臺(tái) Thermal Cycler PCR 儀的溫度分別設(shè)定為 16℃和 70℃。只有 1 臺(tái)

儀器時(shí)設(shè)定為 16℃。

4.在冰上將基因組 DNA 以外的下列試劑添加到 0.2mL 反應(yīng)管中，配制混合液，充分混勻后再加入基因組 DNA。用移液槍輕輕吸打或用手輕彈管壁，離心后使用，避免產(chǎn)生氣泡，不能使用振蕩器混勻。

注意：以上為基因組 DNA 1μg/20μL 反應(yīng)體系；如果基因組 DNA 量少，那么要調(diào)整為適合的體系。

5.片段化酶 1 的稀釋?zhuān)ㄊ褂们靶迈r調(diào)制）。稀釋方法如下：在冰上按下列順序在1.5mL 反應(yīng)管中加入 450μL 超純水和 50μL 片段化酶 1 稀釋液，充分混勻。輕輕振蕩離心。將 1μL 的片段化酶 1 加入到配好的混合液中，然后將 200μL的移液槍調(diào)到 100μL 刻度后，輕輕吸打 10 次左右，避免產(chǎn)生氣泡。再上下顛倒混勻（5 次以下），離心。不能使用振蕩器混勻。注意：稀釋后的片段化酶 1 請(qǐng)?jiān)?10 分鐘內(nèi)使用，不能保存。

6.確認(rèn) Thermal Cycler PCR 儀的溫度在 16℃后，將 1μL 稀釋后的片段化酶 1添加到上述加入基因組 DNA 的混合液中。吸打數(shù)次后，立即在 16℃條件下進(jìn)行反應(yīng)。推薦反應(yīng)時(shí)間 5-8 分鐘。注意：在冰上進(jìn)行試劑添加和混勻的操作。

7.不要移動(dòng)反應(yīng)管，在 Thermal Cycler PCR 儀上直接加入 20μL 的 DNA 片段化反應(yīng)終止液終止反應(yīng)。用移液槍吸打 2-3 次后，再轉(zhuǎn)移到冰上吸打數(shù)次。

8.確認(rèn) Thermal Cycler PCR 儀溫度為 70℃后，將吹打后溶液的 0.2mL 反應(yīng)管轉(zhuǎn)移到 PCR 儀上。

9.70℃反應(yīng) 5 分鐘后，轉(zhuǎn)移到冰上。注意：在冰上放置 2 分鐘以上。

10.只進(jìn)行 DNA 片段化反應(yīng)時(shí)，在冰上放置后的 0.2mL 反應(yīng)管中加入 1μL 的 0.5M EDTA 溶液，用移液槍吸打，充分混勻后，進(jìn)行 DNA 片段的精制。

二、末端平滑化反應(yīng)

11.將兩臺(tái)擴(kuò)增儀分別設(shè)定為 16℃和 70℃。如果只有一臺(tái)，則設(shè)定為 16℃。

12.片段化酶 2 的稀釋?zhuān)ㄊ褂们罢{(diào)制）。稀釋方法：在冰上準(zhǔn)備 0.2mL 反應(yīng)管，試劑按下述的比例（片段化酶 2 稀釋液:片段化酶 2=9:1）配成混合液后，輕輕吸打，充分混勻，避免產(chǎn)生氣泡。

13.在在冰上放置后的 0.2mL 反應(yīng)管中加入 2μL 的 150mM MgCl2 溶液，移液槍吸打，充分混勻，避免產(chǎn)生氣泡。不能使用振蕩器混勻。

14.將 2μL 稀釋后的片段化酶 2 添加到 0.2mL 反應(yīng)管中，吸打數(shù)次混勻后，立即在 16℃反應(yīng) 10 分鐘。注意：此步操作在冰上進(jìn)行。

15.反應(yīng)結(jié)束后，把 0.2mL 反應(yīng)管轉(zhuǎn)移到冰上。只有一臺(tái)擴(kuò)增儀時(shí)，把溫度調(diào)至 70℃。

16.加入 1μL 的 0.5M EDTA 溶液，充分吸打混勻后離心。

17.確認(rèn) Thermal Cycler PCR 儀設(shè)定的溫度為 70℃后，將 0.2mL 反應(yīng)管轉(zhuǎn)移到 Thermal Cycler PCR 儀上反應(yīng) 5 分鐘。

18.將 0.2mL 反應(yīng)管轉(zhuǎn)移到冰上。

19.片段化 DNA 的確認(rèn)：取相當(dāng)于 200～250ng 量基因組 DNA（在冰上放置后） 的反應(yīng)液約 10μL 進(jìn)行 1.5%瓊脂糖凝膠電泳。

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