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產(chǎn)品簡介：

本產(chǎn)品是基于熒光染料檢測的即用型 PCR 試劑盒，可以對靶片段進(jìn)行實時定量PCR 分析。產(chǎn)品含有經(jīng)過優(yōu)化的緩沖液組分、Taq DNA 聚合酶、dNTPs、MgCl2、 SYBR Green I 及耐熱 RNase H 等所有實時定量 PCR 所需要的成分，用戶只需加入模板和引物即可進(jìn)行實時定量 PCR 反應(yīng)，具有廣泛的用途。

產(chǎn)品特點：

1.方便，用戶只需準(zhǔn)備模板和引物即可以進(jìn)行實時定量 PCR 實驗。

2.含有耐熱 RNase H,可以抑制殘存 mRNA 對 PCR 反應(yīng)的作用。

3.產(chǎn)品為 2×預(yù)配液，操作步驟已經(jīng)最大限度地簡化，能減少污染，降低實驗誤差。

4.擴(kuò)增效率和靈敏度更高。

5.快捷，即用型的預(yù)配液使加樣操作步驟簡化，避免了交叉污染，降低實驗誤差。

6.各成分的濃度和比例都經(jīng)過精心優(yōu)化，反應(yīng)的靈敏度高，特異性強(qiáng)。

7.本規(guī)格有 1mL，足夠 100 次 20uL 體系的染料法熒光定量 PCR。

8.2×染料法 qPCR MasterMix（含 RNase H） 2×只供科研使用。

產(chǎn)品參數(shù)：

成份規(guī)格包裝

2×染料法 qPCR MasterMix

（含 RNase H）1mL1.5mL 棕色管

使用手冊1 份1 份

運(yùn)輸及保存

低溫運(yùn)輸，-20℃保存,有效期一年。

自備試劑

DNA 模板、引物、超純水。

使用方法：

1. 如果有 N 個樣品（最好含一個樣本制備陽性對照和一個樣本制備陰性對照）并且做定量分析，最好設(shè)置 N+7 個反應(yīng)，多出的 7 個中，6 個用于 6 點標(biāo)準(zhǔn)曲線，一個是擴(kuò)增陰性對照（NC）。在 N+7 個 PCR 管中，加入下列成分。如果是做定性分析，則 6 個做標(biāo)準(zhǔn)曲線的樣品縮減成一個擴(kuò)增陽性對照（PC），用戶自己需要

根據(jù)下表進(jìn)行適當(dāng)修改（把 6 個標(biāo)曲反應(yīng)改成 1 個陽性對照反應(yīng)）。

成分N 個樣品管6 個標(biāo)準(zhǔn)曲線管NC 管

2×染料法 qPCR MasterMix

（含 RNase H）各 10uL各 10uL10uL

自備引物 1（10uM）各 1uL各 1uL1uL

自備引物 2（10uM）各 1uL各 1uL1uL

自備基因組 DNA10-100ng不加不加

或自備 cDNA1-10ng不加不加

自備陽性對照模板（6 各梯度）不加各 1uL不加

陰性對照模板(一般用水)不加不加1uL

自備 50×自備 ROX I

或 ROX II 染料(見附)各 0.4uL各 0.4uL0.4uL

補(bǔ)超純水到20uL20uL20uL

2.放入熒光 PCR 儀中進(jìn)行擴(kuò)增,下表的擴(kuò)增參數(shù)僅供參考。

3.通過溶解曲線分析的結(jié)果排除無效數(shù)據(jù)。有 Ct 值，但 Tm 值跟擴(kuò)增陽性對照 Tm 不一樣的樣品（包括對照和待測樣品），歸為假陽性，數(shù)據(jù)無效，不予以分析。Tm 跟擴(kuò)增陽性對照 Tm 一致的，為有效 Ct。

4.如果兩種陰性對照（樣本制備陰性對照和擴(kuò)增陰性對照）的溶解曲線所得 Tm 值跟擴(kuò)增陽性對照的Tm 值一樣，說明環(huán)境或試劑可能有過去的PCR 擴(kuò)增產(chǎn)物污染， 則此次實驗無效，需要解決污染問題再進(jìn)行實驗。

5.如果兩種陰性對照（樣品制備陰性對照和 PCR 陰性對照）是假陽性，可以繼續(xù)分析其它樣品有效數(shù)據(jù)。

6.對定量檢測，以 6 個標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品的濃度的 log 值為橫軸，以有效 Ct 值為縱軸， 繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。再以待測樣品的有效 Ct 值從標(biāo)準(zhǔn)曲線上推算出樣品 DNA 濃度的log 值，再換算出待測樣品的 DNA 濃度。

7.對定性檢測，則得到有效 Ct 值的樣本為陽性，無有效 Ct 值的為陰性。附：

下列信息僅供參考，具體以 qPCR 儀器的使用手冊為準(zhǔn)。

1 ． 不需要 ROX 的機(jī)型： Agilent MX3000 和 MX4000 、iCycler IQ 、Light Cycler480、Smart Cycler System、Thermal Cycler Dice Real Time System等型號的熒光 PCR 儀器不需要加 ROX 染料，但加入的話也不會影響整個 PCR 分析。

2.需要使用 ROX I 的機(jī)型：ABI Prism7000、7300、7700、7900HT、Step One、 Step One Plus。

3.需要使用 ROX II 的機(jī)型： ABI Prism7500、7500Fast、MJ Opticon、MJChromo4、Corbett Rotor Gene 3000。

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