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內(nèi)標(biāo)摻入 SILAC 法用于小量組織 的蛋白質(zhì)組及磷酸化蛋白質(zhì)組定量

閱讀:688      發(fā)布時(shí)間:2019-08-30
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非靶向蛋白質(zhì)組學(xué)中有多種定量方法用于研究蛋白質(zhì)表 達(dá)以及翻譯后修飾的調(diào)控,總體來說分為三類 : 非標(biāo)記定 量(label free),體內(nèi)代謝標(biāo)記和體外化學(xué)標(biāo)記。穩(wěn)定 同位素氨基酸培養(yǎng)摻入標(biāo)記(Stable Isotope Labeling by Amino acid in Cell culture, SILAC)是使用為廣泛的一種 體內(nèi)代謝標(biāo)記方法[1],除了能都實(shí)現(xiàn)對(duì)細(xì)胞系樣品實(shí)的定 量研究外,SILAC 方法還可以用于組織樣品的定量蛋白質(zhì) 組學(xué)研究。通過使用合適的 SILAC 標(biāo)記的細(xì)胞系樣品作為 內(nèi)標(biāo),我們可以對(duì)組織樣本的全蛋白質(zhì)組[2],乃至翻譯后 修飾[3] 進(jìn)行系統(tǒng)的定量研究。

 

液相色譜儀: Easy nLC 1200(ThermoFisher Scientific) 分析柱:自制 C18 納升級(jí)噴針柱,長(zhǎng)度 20 cm,內(nèi)徑 75 µm, 粒徑 3 µm 流動(dòng)相:A,0.1% 甲酸/水;B,0.1% 甲酸/80% 乙腈 梯度:0-2 min,4-8% B;2-125 min,8-28% B; 125-140 min,28-40% B;140-142 min,40-99% B; 142-150 min,99%B 流速:300 nL/min

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