水果和蔬菜中阿維菌素殘留量的測(cè)定液相色譜儀

規(guī)范性引用文件

GB 2763 食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品中農(nóng)藥最大殘留

GB/T 6682 分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法

方法提要

試樣中的阿維菌素用丙酮提取，經(jīng)濃縮后用 SPE C 18 柱凈化，并用甲醇洗脫。洗脫液經(jīng)濃縮、定容、過濾后，用水果和蔬菜中阿維菌素殘留量的測(cè)定液相色譜儀配有紫外檢測(cè)器的高效液相色譜測(cè)定，外標(biāo)法定量。

試劑和材料

除另有規(guī)定外，所有試劑均為分析純，水為符合 GB/T 6682 中規(guī)定的一級(jí)水 。

試劑丙酮 C 3 H 6 O 色譜純。

甲醇 CH 4 O 色譜純 。

標(biāo)準(zhǔn)品

阿維菌素標(biāo)準(zhǔn)品 （分子式 C 48 H 72 O 14 ））：純度 96.0% 。

標(biāo)準(zhǔn)溶液配制

阿維菌素標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液：稱取 0.1 g( 準(zhǔn)確至 0.0002 g ) 阿維菌素標(biāo)準(zhǔn)品于 100m L 容量瓶中 , 用甲

醇溶解并定容至刻度配制成濃度為 1.0 mg/mL 的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液。

阿維菌素標(biāo)準(zhǔn)工作液 根據(jù)需要移取適量的阿維菌素標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液 用甲醇稀釋成適當(dāng)濃度的標(biāo)

準(zhǔn)。標(biāo)準(zhǔn)工作液需每周配制一次。

儀器和設(shè)備

高效液相色譜儀：配有紫外檢測(cè)器

分析天平：感量 0.01 g 和 0.0001 g

組織搗碎機(jī)。

振蕩器。

旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器。

固相萃取柱： SPE C 18 。規(guī)格： 60 mg/3 mL 使用前用 5 mL 甲醇和 5 mL 水活化。

試樣制備與保存

試樣制備

將所取樣品縮分出1 kg ，取樣部位按 GB 2763 附錄 A 執(zhí)行 樣品經(jīng)組織搗碎機(jī)搗碎，均分為兩份，裝入潔凈容器內(nèi)，作為試樣密封并標(biāo)明標(biāo)記。

試樣保存

將試樣于18 ℃以下保存。在抽樣和制樣的操作過程中，應(yīng)防止樣品受到污染或發(fā)生殘留物含量的變化。

分析步驟

提取

稱取試樣約20 g （精確至 0.1 g ）于 100 mL 具塞錐形瓶中，加入 50 mL 丙酮，于振蕩器上振蕩 0.5h 用布氏漏斗抽濾，用 20 mL × 2 丙酮洗滌錐形瓶及殘?jiān)?。合并丙酮提取液，?40 ℃水浴旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至約2 mL 。

凈化

將上述的濃縮提取液轉(zhuǎn)入SPE C18 柱，再用 5 mL 水淋洗，去掉淋洗液。最后用 5 mL 甲醇洗脫，收集洗脫液，用氮?dú)獯抵两?。?zhǔn)確加入 1.0 mL 甲醇溶解殘?jiān)?用 0.45 μ m 濾膜過濾 , 濾液供液相色譜測(cè)定。外標(biāo)法定量。

測(cè)定

高效液相色譜 參考 條件：

色譜柱： ODS C 18 反相柱， 4.6 mm × 125 mm

流動(dòng)相：甲醇：水 90+10, V/V

流速： 1.0 mL/min

檢測(cè)波長(zhǎng)： 245 nm

柱溫： 40

進(jìn)樣量： 20 μ L 。

色譜測(cè)定

根據(jù)樣液中阿維菌素含量情況，選定峰高相近的標(biāo)準(zhǔn)工作液標(biāo)準(zhǔn)工作液和樣液中阿維菌素響應(yīng)值均應(yīng)在儀器檢測(cè)線性范圍內(nèi)，標(biāo)準(zhǔn)工作液和樣液等體積參插進(jìn)樣。在上述色譜條件下，阿維菌素保留時(shí)間約為 5.3 min 。

標(biāo)準(zhǔn)色譜圖參見附錄

A ，標(biāo)準(zhǔn)品紫外光譜圖參見附錄 B 。