ATCC細胞培養(yǎng)之換液與消化傳代

ATCC即美國模式培養(yǎng)物集存庫（American type culture collection）的簡寫。ATCC向發(fā)布其獲取、鑒定、保存及開發(fā)的生物標準品，推動科學研究的驗證、應用及進步。上海乾思生物專業(yè)經營進口ATCC細胞，GIBCO血清，Abcam抗體，GE試劑等等科研產品，為你助力。

ATCC細胞有29,000多種不同品系。以下為網上收集來的，細胞實驗技巧。

1、細胞復蘇，養(yǎng)細胞不要循規(guī)蹈矩，書上說的是經典，但有時也需要靈活運用。一般要求37℃復蘇細胞，但使用39℃，融化了就馬上把細胞拿走，細胞不會升溫到37℃以上，這樣復蘇的時間更短，細胞受的傷害更小，有利于提高細胞存活率。

2、復蘇好的細胞是否要離心去除保護劑，要看你的細胞是不是對保護劑敏感，一般是不離心的，直接放到培養(yǎng)皿里，加入新鮮培養(yǎng)液，待細胞貼壁后換培養(yǎng)液就行了，其實對細胞的處理過程越簡單，對細胞的損傷就越小。

3、關于培養(yǎng)液中是否要加雙抗。開始養(yǎng)細胞時是加的，后來發(fā)現(xiàn)基本沒有用。該污染的還是污染。而且雙抗對細胞有毒性，如果細胞很脆弱，要盡量減少對它的傷害。

4、關于污染。防止污染要從良好的無菌操作做起。國內一般使用酒精燈燎燒，其實用酒精燈很危險，而且未必能起到燒死細菌的作用，如果燒的時間短，物品表面跟本燒不熱，也燒不死細菌，燒時間長了容易把物品燒壞，而且容易燒到自己。在國外一般是不允許用酒精燈的。所謂的基本無菌操作就是主要那幾條，如不要在打開的容器上方運動，不要過早打開容器，取物品要小心不要觸及其他等等，還有一個zui重要的：手上要干凈，操作時可以經常用酒精噴一下，這點很關鍵。

5、關于污染后的救治。如果細胞不是很重要，發(fā)現(xiàn)污染就及時扔掉！否則容易污染到培養(yǎng)箱里其他細胞，甚至整個細胞房都會有污染源。平時要養(yǎng)成及時凍存的習慣。對于細胞培養(yǎng)液中經常出現(xiàn)的小黑點，數(shù)量少一般不會影響實驗，如果數(shù)量很多，可以使用環(huán)丙沙星或諾氟沙星等，很便宜，加入一點點就可以了，連續(xù)使用一個禮拜細胞會很干凈。

6、關于換液。如果細胞很脆弱，可以采用一次只換一半培養(yǎng)液的方法，如果細胞分裂很旺盛，每次可以全換掉。

7、關于消化傳代。消化一定不要太過，不然對細胞影響很大。消化前使用PBS先洗一遍，可以縮短消化時間，細胞很容易就能消化掉了。

8、關于凍存。用棉花包起來，然后直接放到-20℃，半小時后轉-70℃，過一夜轉液氮罐。

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