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三色書(shū)虱體內(nèi)wolbachia的分子檢測(cè)2015/03/23: 實(shí)驗(yàn)試劑氯仿[重慶川東化工集團(tuán)有限公司]異丙醇[重慶川東化工集團(tuán)有限公司]無(wú)水乙醇[重慶川東化工集團(tuán)有限公司]異戊醇[上?；瘜W(xué)試劑有限公司]溴酚藍(lán)[上海三愛(ài)思試劑有限公司]二甲苯氰FF[AmerscoCo.]溴化乙錠[AmerscoCo.]飽和酚(pH7.0)[Tianjin,H&YBio.Co.Ltd]TaqDNA聚合酶[Tianjin,H&YBio.Co.Ltd]十二烷基肌氨酸鈉[Tianjin,H&YBio.Co.Ltd]十二烷基硫酸鈉[Tianjin,H&YBio.Co.Ltd]三輕甲基

人類染色體核型分析2015/03/23: 實(shí)驗(yàn)原理核型（karyotype）一詞在20世紀(jì)20年代首先由蘇聯(lián)學(xué)者T.A.Levzky等人提出。核型分析的發(fā)展有三項(xiàng)技術(shù)起了很重要的促進(jìn)作用，一是1952年美籍華人細(xì)胞學(xué)家徐道覺(jué)發(fā)現(xiàn)的低滲處理技術(shù)，使中期細(xì)胞的染色體分散良好，便于觀察；二是秋水仙素的應(yīng)用便于富集中期細(xì)胞分裂相；三是植物凝集素（PHA）刺激血淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化、分裂，使以血培養(yǎng)方法觀察動(dòng)物及人的染色體成為可能。核型是指染色體組在有絲分裂中期的表型，包括染色體數(shù)目、大小、形態(tài)特征等。核型分析是對(duì)染色體進(jìn)行測(cè)量計(jì)算的基礎(chǔ)上，進(jìn)行分組、排

高壓蒸汽滅菌步驟2015/03/23: 實(shí)驗(yàn)試劑牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基實(shí)驗(yàn)材料培養(yǎng)皿（6套一包）注意事項(xiàng)檢查培養(yǎng)基滅菌是否*。

中藥免疫抑制成份杠柳苷全合成（杠柳苷,免疫抑制,中藥）2015/01/22: 中國(guó)科學(xué)院上海有機(jī)化學(xué)研究所生命有機(jī)化學(xué)國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室俞飚課題組于近期實(shí)現(xiàn)了對(duì)杠柳苷PeriplosideA的全合成。該類化合物具有一個(gè)*的亞甲基縮醛橋連的七元環(huán)原酸酯結(jié)構(gòu)，這一的結(jié)構(gòu)模塊加之連續(xù)的2-脫氧-beta-糖苷鍵，使得它的化學(xué)合成挑戰(zhàn)性。俞飚課題組利用分子內(nèi)縮醛環(huán)化反應(yīng)成功地構(gòu)建了七元環(huán)原酸酯的核心骨架，并應(yīng)用該課題組原創(chuàng)的三氟亞胺酯糖苷化和金催化糖苷化反應(yīng)，完成了原酸酯二糖與甾體苷元的拼接以及脫氧四糖的延伸，zui終以總計(jì)76步、線性zui長(zhǎng)29步和9.2%的總產(chǎn)率完成了全合成。該

研究揭示H10N8禽流感病毒感染人的分子機(jī)制2015/01/22: HA蛋白對(duì)人氣管組織及鴨子小腸組織的免疫熒光染色繼2013年先后在H5N1和H7N9禽流感病毒跨種間傳播研究中取得重要進(jìn)展后，中國(guó)科學(xué)院微生物研究所高福課題組在H10N8禽流感病毒感染人的分子機(jī)制(MolecularMechanisms)和跨種間傳播趨勢(shì)評(píng)估上取得新的進(jìn)展，研究結(jié)果已經(jīng)于2015年1月9日在雜志《自然通信》（NatureCommunications）在線發(fā)表。2013年12月起，我國(guó)先后發(fā)生3例人感染H10N8禽流感病毒病例，并導(dǎo)致2人死亡。這種能感染人的H10N8病毒是否像H7

細(xì)胞計(jì)數(shù)儀的選擇2015/01/22: 細(xì)胞生物學(xué)研究中的一些常規(guī)操作只是整個(gè)項(xiàng)目中微不足道但又非常重要的一步。這些常規(guī)操作簡(jiǎn)單沒(méi)有技術(shù)內(nèi)涵，卻消耗了研究者大量時(shí)間與體力，且結(jié)果也不能得到保證。其中使用血球計(jì)數(shù)板在顯微鏡下進(jìn)行手動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)*。手工計(jì)數(shù)不僅浪費(fèi)了研究者大部分的時(shí)間，繁冗無(wú)聊的計(jì)數(shù)過(guò)程往往讓人頭暈眼花，影響了研究者的積極性，有種大材小用的感覺(jué)。不少研究者提起細(xì)胞計(jì)數(shù)都頻頻搖頭，不僅費(fèi)時(shí)費(fèi)力，枯燥無(wú)味，又沒(méi)有成就感。同時(shí)，手工計(jì)數(shù)的主觀性強(qiáng)，造成計(jì)數(shù)結(jié)果的可靠性大大打折，重復(fù)性差。不同操作者之間的計(jì)數(shù)結(jié)果一致性差，無(wú)可比性，

十招搞定免疫熒光2015/01/22: 免疫熒光是標(biāo)記免疫技術(shù)發(fā)展zui早的一種，它是在免疫學(xué)、生物化學(xué)和顯微鏡技術(shù)的基礎(chǔ)上建立起來(lái)的一項(xiàng)技術(shù)，通過(guò)將抗體與一些示蹤物質(zhì)結(jié)合，利用抗原抗體反應(yīng)進(jìn)行組織或細(xì)胞內(nèi)抗原物質(zhì)的定位。免疫熒光步驟包括，細(xì)胞固定和通透，封閉，孵育一抗，二抗等。除了這些基本步驟，以下建議可以幫助您獲得更好的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。細(xì)胞固定和通透為達(dá)到*的檢測(cè)效果，細(xì)胞需要經(jīng)過(guò)固定和通透。這些步驟非常關(guān)鍵，細(xì)胞和抗原需要保證*的結(jié)構(gòu)，并利于抗體與抗原結(jié)合。通常情況下，需要通過(guò)以下步驟得以實(shí)現(xiàn)：細(xì)胞用2%-4%多聚甲醛固定，之后用0.

質(zhì)粒純化方案中的關(guān)鍵步驟2015/01/14: 如今質(zhì)粒純化不再是什么難題，那么做了這么次質(zhì)粒抽提的你了解質(zhì)粒純化的原理嗎？你知道哪些步驟對(duì)質(zhì)粒純化的成功起著關(guān)鍵作用嗎？QIAGEN質(zhì)粒抽提簡(jiǎn)單原理：在堿性條件下裂解細(xì)菌之后，將裂解液以的鹽濃度加入QIAGEN-tip當(dāng)中。質(zhì)粒DNA將發(fā)生選擇性的結(jié)合而從RNA、蛋白質(zhì)及其他細(xì)胞污染物中被分離出來(lái)。1、制備細(xì)胞裂解產(chǎn)物細(xì)胞產(chǎn)率很大程度上依賴于細(xì)胞裂解質(zhì)量。因此制備澄清的細(xì)胞裂解產(chǎn)物是QIAGEN純化方案中的重要一環(huán)，QIAGEN已經(jīng)仔細(xì)針對(duì)*的裂解條件進(jìn)行了相關(guān)的專業(yè)設(shè)計(jì)。對(duì)培養(yǎng)物進(jìn)行收獲和重

Agilent安捷倫PCR相關(guān)產(chǎn)品小結(jié)2015/01/13: 安捷倫科技公司（AgilentTechnologies）是新一代測(cè)序靶向序列捕獲解決方案和基因組學(xué)微列陣芯片領(lǐng)域的。安捷倫于2007年6月收購(gòu)了生命科學(xué)試劑儀器品牌美國(guó)Stratagene公司，Stratagene公司的分子生物學(xué)、遺傳學(xué)、蛋白質(zhì)組學(xué)、藥物研發(fā)和毒理學(xué)等領(lǐng)域的產(chǎn)品遍及學(xué)術(shù)界、政府研究機(jī)構(gòu)和工業(yè)研究領(lǐng)域，特別是在生命科學(xué)研究領(lǐng)域的試劑、儀器尤為。例如文庫(kù)構(gòu)建、定點(diǎn)突變、高保真Pfu酶等，部分經(jīng)典產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)更成為被譽(yù)為生命科學(xué)研究圣地的冷泉港實(shí)驗(yàn)室實(shí)驗(yàn)課程的標(biāo)準(zhǔn)參考。1、Strata

Agilent安捷倫突變產(chǎn)品小結(jié)2015/01/13: 突變是指在PCR過(guò)程中通過(guò)堿基改變而引起蛋白質(zhì)氨基酸的改變。定點(diǎn)突變：在DNA片段的特定位點(diǎn)引入堿基改變，或者片段的插入以及刪除。AgilentQuikChangeLighting定點(diǎn)突變產(chǎn)品優(yōu)勢(shì)1、可突變?nèi)魏蝸?lái)源于dam+陽(yáng)性菌株的質(zhì)粒2、非PCR線性反應(yīng)，可減少不需要的錯(cuò)誤3、點(diǎn)突變，缺失突變，插入突變4、突變擴(kuò)增4-14kb大小，具有85%突變效率5、突變AgilentQuikChangeLighting多點(diǎn)突變產(chǎn)品優(yōu)勢(shì)1、Agilent*2、非PCR線性反應(yīng)減少不需要的錯(cuò)誤3、可突變?nèi)魏?

質(zhì)粒DNA質(zhì)量如何評(píng)估才可靠？2015/01/13: 質(zhì)粒抽提過(guò)程中有很多步驟會(huì)影響zui后的產(chǎn)量和質(zhì)量，那么如何評(píng)估質(zhì)粒DNA的產(chǎn)量和質(zhì)量呢？目前使用分光光度法定量質(zhì)粒DNA和通過(guò)瓊脂糖凝膠電泳進(jìn)行質(zhì)粒DNA產(chǎn)率和質(zhì)量的分析是兩種zui常用的方法。溶液中的核酸濃度可通過(guò)260nm的吸光度方便地進(jìn)行計(jì)算。A260的數(shù)值處于0.1至1.0之間時(shí)測(cè)量結(jié)果具有良好的重復(fù)性，但當(dāng)A260數(shù)值小于0.1或大于1.0的時(shí)候，結(jié)果的可重復(fù)性將顯著下降。而且，3.0以上的讀值是無(wú)法使用的，它可能會(huì)潛在導(dǎo)致對(duì)DNA質(zhì)量的低估。因此，為了獲得可靠的DNA分光光度定量結(jié)

間充質(zhì)干細(xì)胞的傳代培養(yǎng)2015/01/06: 間充質(zhì)干細(xì)胞的傳代培養(yǎng)試劑和材料：1.*培養(yǎng)基：α-MEM：α-*基礎(chǔ)培養(yǎng)基，含谷氨酰胺，無(wú)核苷酸或脫氧核苷酸；添加：20%附加L-谷氨酰胺2mmol/L、經(jīng)F雜交瘤純化，非熱滅活、青霉素100U/ml、鏈霉素100μg/ml。過(guò)濾除菌。儲(chǔ)存于4℃，不超過(guò)2周；2.A；3.胰蛋白酶/EDTA；4.聚丙烯離心管，15ml和50ml；5.塑料組織培養(yǎng)皿，直徑15cm；6.塑料微量移液器槍頭，10—1000μl；7.0.85%臺(tái)盼藍(lán)鹽溶液；8.微量移液器；9.改良的Neubauer血細(xì)胞計(jì)數(shù)器實(shí)驗(yàn)方法

臍帶血干細(xì)胞的準(zhǔn)備2015/01/06: 臍帶血干細(xì)胞的準(zhǔn)備試劑和材料：1.運(yùn)輸培養(yǎng)基：Eagle基礎(chǔ)培養(yǎng)基（EBM），添加300U/ml青霉素和300μg/ml鏈霉素，150μg/ml慶大霉素和1μg/ml兩性霉素B；2.夾子；3.剪刀；4.抗凝劑：CPDA-1：122mmol/L（26g/L）枸櫞酸鈉，0.142mol/L（25.5g/L）葡萄糖，15.6mmol/L（3.0g/L）枸櫞酸和18.3mmol/L（2.2g/L）磷酸二氫鈉；5.etadine﹡或70%乙醇；6.18號(hào)注射器針頭；7.臍帶收集袋，175ml，含24.5m

從臍靜脈分離干細(xì)胞2015/01/06: 從臍靜脈分離干細(xì)胞試劑和材料：1.培養(yǎng)基：*LG-DMEM：含2mmol/L的左旋谷氨酰胺的低糖DMEM，添加10%熱滅活胎牛血清，100U/ml青霉素和100μg/ml鏈霉素；2.A；3.胰蛋白酶，0.05%，含EDTA；4.膠原酶A，0.1%用A配制；5.培養(yǎng)瓶；6.導(dǎo)管；實(shí)驗(yàn)方法：1.在正常分娩后6-12h內(nèi)收集和處理臍帶；2.在臍靜脈內(nèi)插入導(dǎo)管，用A*地洗2次；3.夾住遠(yuǎn)端臍帶；4.用0.1%膠原酶溶液充滿靜脈；5.夾住近端臍帶；6.將臍帶在37℃孵育20min；7.輕輕按摩臍帶，收集含

細(xì)胞株的保存12014/12/25: 1.紫外消毒30min后關(guān)閉紫外燈，開(kāi)啟超凈臺(tái)正常工作狀態(tài)，用酒精消毒操作者的雙手。2.將所需的培養(yǎng)基，胰酶確保瓶身干凈后放于工作臺(tái)面內(nèi)，點(diǎn)燃酒精燈，將培養(yǎng)基和胰酶瓶口用酒精棉球擦拭后，再將瓶口對(duì)準(zhǔn)在酒精燈上消毒2-3次，旋開(kāi)瓶蓋后再次分別消毒瓶口和瓶蓋，分別放于酒精燈的兩側(cè)。特別是將培養(yǎng)基瓶放于斜架上，瓶口對(duì)準(zhǔn)酒精燈，且放在距離酒精燈zui近的位置，瓶蓋置于酒精燈的另一側(cè)。3.將培養(yǎng)瓶瓶口在酒精燈上消毒2-3次，旋開(kāi)后分別再次消毒瓶口和瓶蓋2-3次，蓋放于酒精燈右側(cè)后將培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)的培養(yǎng)液懸空倒進(jìn)

重組細(xì)胞因子溶解2014/12/25: 1．離心（Centrifuge）：高速離心(10,000rpm)20-30秒，或低速離心(2,000rpm)5分鐘。2．溶解（Reconstitution）：用去離子水或其它緩沖液（根據(jù)說(shuō)明書(shū)要求進(jìn)行選擇）溶解至說(shuō)明書(shū)要求的濃度(一般為0.1-1.0mg/ml)。溶解時(shí)不可振蕩，避免因化學(xué)鍵的斷裂造成蛋白失活，可加入適當(dāng)?shù)娜軇┹p搖并靜置一段時(shí)間，待細(xì)胞因子*溶解后使用。溶劑的選擇：1）要求用去離子水溶解的產(chǎn)品，務(wù)必不可用鹽溶液，避免過(guò)高的鹽濃度造成蛋白不可逆的析出；2)要求用鹽溶液溶解的產(chǎn)品，請(qǐng)

細(xì)胞凋亡的早期檢測(cè)方法有哪些？2014/12/25: 1、PS（磷脂酰絲氨酸）在胞外膜分布的檢測(cè)PS從胞膜內(nèi)側(cè)轉(zhuǎn)移到外側(cè)現(xiàn)象是在細(xì)胞凋亡的早期即可發(fā)生標(biāo)志。AnnexinV是一種鈣依賴性的磷脂結(jié)合蛋白，能專一性的結(jié)合暴露在胞膜外側(cè)的PS，使用熒光素標(biāo)記的AnnexinV蛋白（如AnnexinV-FITC）即可檢測(cè)細(xì)胞凋亡。由于這是一種凋亡早期的活細(xì)胞檢測(cè)（懸浮細(xì)胞和貼壁細(xì)胞都適用），可與DNA染料或別的晚期檢測(cè)方法相結(jié)合來(lái)標(biāo)記凋亡的發(fā)展階段。操作簡(jiǎn)便快速，10分鐘就可完成檢測(cè)。靈敏度高，可作為流式方法分析凋亡細(xì)胞的基礎(chǔ)。2、細(xì)胞內(nèi)氧化還原狀態(tài)改變的

微生物菌種冷凍干燥和液氮保藏菌種技術(shù)2014/12/03: 微生物菌種冷凍干燥和液氮保藏菌種技術(shù)－、安瓶管開(kāi)封1．用浸過(guò)70％酒精的脫脂棉擦凈安瓿管。2．用火焰將安瓿管頂端加熱。3．滴無(wú)菌水至加熱的安瓿管頂端使玻璃開(kāi)裂。4．用挫刀或鑷子敲下已開(kāi)裂的安瓿管的頂端。二、菌株恢復(fù)培養(yǎng)1．用無(wú)菌吸管，吸取0.3～0.5ml適宜的液體培養(yǎng)基，滴人安瓿管內(nèi)，輕輕振蕩，使凍于菌體溶解呈懸浮狀。2．取0.1～0.2ml菌體懸浮液，移植于適宜的瓊脂斜面／平板培養(yǎng)基上，剩余的菌液，注入適宜的液體培養(yǎng)基內(nèi)，然后在建議的溫度下培養(yǎng)。3．若未能活化，或活化后有疑問(wèn)時(shí)，請(qǐng)于收到菌種

上皮細(xì)胞的培養(yǎng)方法2014/12/03: 上皮細(xì)胞的培養(yǎng)方法上皮細(xì)胞包括腺上皮是很多器官如肝、胰、乳腺等的功能成分,又由于癌起源于上皮組織,故上皮細(xì)胞培養(yǎng)特別受到重視.但上皮細(xì)胞培養(yǎng)中?；祀s有成纖維細(xì)胞,培養(yǎng)時(shí)生長(zhǎng)速度往往超過(guò)上皮細(xì)胞,并難以純化,同時(shí)上皮細(xì)胞難以在體外長(zhǎng)期生存,因此純化和延長(zhǎng)生存時(shí)間是培養(yǎng)關(guān)鍵.體內(nèi)上皮細(xì)胞生長(zhǎng)在膠原構(gòu)成的基膜,因此培養(yǎng)在有膠原的底物上可能利于生長(zhǎng),另外人或小鼠表皮細(xì)胞培養(yǎng)在以3T3細(xì)胞為飼養(yǎng)層（用射線照射后）時(shí),細(xì)胞易生長(zhǎng)并可發(fā)生一定程度的分化現(xiàn)象.降低PH、Ca2+含量和溫度,向培養(yǎng)基中加入表皮生長(zhǎng)

細(xì)胞的純化的兩種方法2014/12/03: 細(xì)胞的純化的兩種方法細(xì)胞的純化一般分為兩種,即自然純化很人工純化.常用的純化方法有,酶消化法,細(xì)胞因子依賴純化法,機(jī)械刮除法,反復(fù)貼壁法,電烙篩選法.體外培養(yǎng)的細(xì)胞源于人或動(dòng)物或胚胎組織,體內(nèi)的細(xì)胞都是混雜生長(zhǎng),每一種組織都有血管和間葉組織,因此,來(lái)源于上述組織的培養(yǎng)材料的原代細(xì)胞、傳代細(xì)胞絕大多數(shù)都呈混合生長(zhǎng),既有上皮樣細(xì)胞又有纖維樣細(xì)胞,纖維樣細(xì)胞又包括成纖維細(xì)胞、肌細(xì)胞、骨細(xì)胞、滑膜細(xì)胞等,混雜的細(xì)胞會(huì)直接影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果,而利用體外培養(yǎng)細(xì)胞進(jìn)行實(shí)驗(yàn)研究時(shí),為了保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可靠性、一致性、穩(wěn)

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