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免疫組化實(shí)驗(yàn)沒有任何著色的解決辦法2024/04/24: 良好的免疫組化染色切片是正確判斷染色結(jié)果的基礎(chǔ)和前提。由于免疫組化染色過程中存在很多步驟或環(huán)節(jié)，每一個(gè)步驟或環(huán)節(jié)都可能影響到染色的最終結(jié)果，因此，要做好一張高質(zhì)量的免疫組化切片并不是一件非常容易的事。從染色的結(jié)果看，一般可分為兩類：無色片（即無陽性信號(hào)）和“雜音”染色片（有陽性信號(hào)）。一、無色片染色結(jié)束后，切片中見不到任何陽性信號(hào)。這是常規(guī)工作中比較常見的現(xiàn)象，出現(xiàn)這種現(xiàn)象，有兩種可能：1、真陰性結(jié)果：整個(gè)染色過程沒有出現(xiàn)問題，組織或細(xì)胞確實(shí)不表達(dá)與抗體相關(guān)的抗原。2、假陰性結(jié)果：即此陰性結(jié)果不

單克隆抗體制備原理與詳細(xì)過程2024/04/23: 單克隆抗體制備的原理：B淋巴細(xì)胞在抗原的刺激下,能夠分化、增殖形成具有針對(duì)這種抗原分泌特異性抗體的能力、B細(xì)胞的這種能力和量是有限的,不可能持續(xù)分化增殖下去，因此產(chǎn)生免疫球蛋白的能力也是極其微小的、將這種B細(xì)胞與非分泌型的骨髓瘤細(xì)胞融合形成雜交瘤細(xì)胞，再進(jìn)一步克隆化，這種克隆化的雜交瘤細(xì)胞是既具有瘤的無限生長的能力，又具有產(chǎn)生特異性抗體的B淋巴細(xì)胞的能力，將這種克隆化的雜交瘤細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)或注入小鼠體內(nèi)即可獲得大量的高效價(jià)、單一的特異性抗體.這種技術(shù)即稱為單克隆抗體技術(shù)。單克隆抗體制備的過程：免疫

抗A、抗B血型定型試劑（單克隆抗體）操作規(guī)程2024/04/22: 【簡介】抗A,抗B血型定型試劑(單克隆抗體)用A血型單克隆抗體或B血型單克隆抗體配制而成，用于鑒定人ABO血型。單克隆抗體是由單一B細(xì)胞克隆產(chǎn)生的高度均一、僅針對(duì)某一特定抗原表位的抗體。通常采用雜交瘤技術(shù)來制備，雜交瘤（hybridoma）抗體技術(shù)是在細(xì)胞融合技術(shù)的基礎(chǔ)上，將具有分泌特異性抗體能力的致敏B細(xì)胞和具有無限繁殖能力的骨髓瘤細(xì)胞融合為B細(xì)胞雜交瘤?！居猛尽勘驹噭┖袃H供鑒定人血型用，具有快速簡便、靈敏度高、特異性強(qiáng)、重復(fù)性好等優(yōu)點(diǎn)?！緶y定原理】利用單克隆抗A、抗B抗體和相應(yīng)的紅細(xì)胞抗原發(fā)

簡述凝膠層析技術(shù)的原理和過程2024/04/19: 凝膠層析（又叫凝膠過濾或分子篩）凝膠層析是指混和物隨流動(dòng)相流經(jīng)固定相的層析柱時(shí)，混合物中各組分按其分子大小不同而被分類的技術(shù)。1.原理凝膠層析的固定相是凝膠。凝膠是一種不帶電荷的具有三維空間多孔網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)的物質(zhì)，凝膠的每個(gè)顆粒內(nèi)部都具有很多細(xì)微的小孔，如同篩子一樣。常用凝膠有瓊脂糖凝膠、聚丙烯酰胺凝膠、葡聚糖凝膠等。葡聚糖凝膠介質(zhì)是由多聚葡聚糖與環(huán)氧綠丙烷交連而成。zui常用的葡聚糖凝膠層析介質(zhì)是SephadexG系列，不同型號(hào)的凝膠用G表示，G代表交聯(lián)度，從G10到G100?！癎”后面的數(shù)字表示

血清和血漿制備方法說明2024/04/18: 血清和血漿均是不含細(xì)胞（包括血小板）等有形成分的血液液體部分，其主要區(qū)別是血清不含凝血因子和血小板，血漿則含有凝血因子，它們的制備方法如下：1、血清的制備：獲得的血液不能抗凝，盛于離心管或可以離心的器皿中，靜置或置37℃環(huán)境中促其凝固，待血液凝固后，將其平衡后離心（一般為3000rpm，離心5～10min），得到的上清液即為血清，可小心將上清吸出（注意切勿吸出細(xì)胞成分），分裝備用。2、血漿制備：在盛血的容器中先加人一定比例的抗凝劑（抗凝劑：血液=1：9，將血液加到一定量后顛倒混勻，離心（離心條件

BCA蛋白濃度測定方法和注意事項(xiàng)說明2024/04/17: BCA蛋白定量法是一種快速靈敏、穩(wěn)定可靠的蛋白定量測定方法，其測定范圍是10－2000ug/ml，是比Lowry法更*的專用于檢測總蛋白質(zhì)含量的產(chǎn)品。BCA蛋白定量測定方法：（96孔板）1、配制BCA工作液:根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品和樣品數(shù)量，按50體積試劑A，1體積試劑B配制適量BCA工作液，充分混勻。2、將蛋白標(biāo)準(zhǔn)品按0,1,2,4,6，8,10微升加到96孔板的蛋白標(biāo)準(zhǔn)品孔中，加滅菌雙蒸水補(bǔ)足到10微升；取10微升待測樣品加入96孔板。每個(gè)測定要做2-3個(gè)平行。3、向帶測樣品孔和蛋白標(biāo)準(zhǔn)品孔中加入200

細(xì)胞株生長過程容易被影響的原因2024/04/16: 細(xì)胞株在體外進(jìn)行培養(yǎng)，失去了機(jī)體的調(diào)節(jié)和控制，因此，除滿足營養(yǎng)的要求外，還必須使細(xì)胞生存環(huán)境晝接近活體的環(huán)境。外環(huán)境的培養(yǎng)條件如溫度、滲透壓、酸堿度等均能影響細(xì)胞的生長。一、溫度：一般哺乳類及禽類細(xì)胞體外培養(yǎng)的適宜溫度是37~38℃。溫度過高或過低都會(huì)影響到細(xì)胞的生長。細(xì)胞耐受低溫的能力比抗熱的能力強(qiáng)，在低溫下，細(xì)胞的代謝活力及核分裂降低。溫度低于0℃時(shí)，雖影響細(xì)胞代謝，但并無傷害作用。把細(xì)胞置于23~25℃時(shí)，細(xì)胞仍能生存和生長，但速度減緩，不過，魚類細(xì)胞的適宜培養(yǎng)溫度為23~25℃。若溫度過

原代細(xì)胞VS細(xì)胞株那種更適合做實(shí)驗(yàn)2024/04/15: 細(xì)胞實(shí)驗(yàn)主要包括細(xì)胞培養(yǎng)、細(xì)胞凋亡和增殖、細(xì)胞遷移和侵襲、細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和蛋白質(zhì)表達(dá)等內(nèi)容。這些實(shí)驗(yàn)方法的應(yīng)用可以幫助科學(xué)家們深入了解細(xì)胞的結(jié)構(gòu)和功能，推動(dòng)生命科學(xué)的發(fā)展。原代細(xì)胞：從體內(nèi)直接分離的細(xì)胞。功能、代謝、形態(tài)類似體內(nèi)細(xì)胞的特點(diǎn)，因此原代細(xì)胞適用于分析單個(gè)細(xì)胞形態(tài)、代謝、功能。原代細(xì)胞的缺點(diǎn)是：細(xì)胞均一性差，因?yàn)閺奶囟ńM織取下來的原代細(xì)胞可能處于不同的發(fā)育時(shí)期。增殖能力差、培養(yǎng)時(shí)間受限、轉(zhuǎn)染效率低。細(xì)胞株：原代細(xì)胞經(jīng)過長期培養(yǎng)和篩選后，功能、代謝、形態(tài)趨于均一化的無限增殖細(xì)胞。適用于整體

酸堿緩沖溶液的類型及選擇標(biāo)準(zhǔn)2024/04/12: 酸堿緩沖溶液有三種類型：1、弱酸和它的鹽（如：HAc---NaAc）的水溶液組成；2、弱堿和它的鹽（如：NH3·H2O---NH4Cl）的水溶液組成；3、多元弱酸的酸式鹽及其對(duì)應(yīng)的次級(jí)鹽（如：NaH2PO4---Na2HPO4）的水溶液組成。酸堿緩沖溶液的選型：一般應(yīng)根據(jù)具體情況進(jìn)行選擇。緩沖酸性可選用堿性緩沖液，緩沖酸性可采用堿性緩沖液。常用作緩沖溶液的酸類由弱酸及其共軛酸鹽組合成的溶液具有緩沖作用。生化實(shí)驗(yàn)室常用的緩沖系主要有磷酸、檸檬酸、碳酸、醋酸、巴bi妥酸、Tris（三羥甲基氨基甲烷）

淺談細(xì)胞的基本結(jié)構(gòu)及主要組成部分2024/04/11: 一、細(xì)胞的基本結(jié)構(gòu)：細(xì)胞的基本結(jié)構(gòu)是細(xì)胞質(zhì)、細(xì)胞核、細(xì)胞膜。細(xì)胞分為動(dòng)物細(xì)胞、細(xì)菌和真菌和植物細(xì)胞。細(xì)胞是生物體基本的結(jié)構(gòu)和功能單位。已知除病毒之外的所有生物均由細(xì)胞所組成，但病毒生命活動(dòng)也必須在細(xì)胞中才能體現(xiàn)。動(dòng)物細(xì)胞結(jié)構(gòu)：動(dòng)物細(xì)胞有細(xì)胞膜、細(xì)胞質(zhì)、細(xì)胞核。動(dòng)物細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)包括細(xì)胞質(zhì)基質(zhì)和細(xì)胞器。動(dòng)物細(xì)胞的細(xì)胞器包括內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、線粒體、高爾基體、核糖體、溶酶體、中心體。動(dòng)物細(xì)胞與植物細(xì)胞相比較，具有很多相似的地方，如動(dòng)物細(xì)胞也具有細(xì)胞膜、細(xì)胞質(zhì)、細(xì)胞核等結(jié)構(gòu)。但是動(dòng)物細(xì)胞與植物細(xì)胞又有一些重要的區(qū)

無血清培養(yǎng)基的優(yōu)點(diǎn)以及使用方法2024/04/10: 細(xì)胞培養(yǎng)（cellculture）就是從機(jī)體中取出相關(guān)的組織，將它分散成單個(gè)細(xì)胞，然后在適宜的培養(yǎng)基中，讓這些細(xì)胞生長和增殖。體外細(xì)胞培養(yǎng)最常見的是合成培養(yǎng)基如DMEM,F12,MEM等混合一定比例的牛血清進(jìn)行培養(yǎng)；但是大量使用牛血清制品有許多缺陷，如，動(dòng)物源成分，無法用于臨床研究；成分復(fù)雜，批間差大，質(zhì)量不穩(wěn)定，重復(fù)性差，影響實(shí)驗(yàn)和生產(chǎn)，而且極易引起交叉污染；所以無血清培養(yǎng)正在替代有血清培養(yǎng)；無血清培養(yǎng)基的基本配方:基本成分為基礎(chǔ)培養(yǎng)基及添加組分兩大部分。用于生物制藥和疫苗生產(chǎn)的細(xì)胞在體外培養(yǎng)

菌種提純復(fù)壯的四種主要方法介紹2024/04/09: 菌種提純復(fù)壯的幾個(gè)主要方法1、純種分離法通過純種分離，可將衰退菌種細(xì)胞群體中一部分仍保持原有典型性狀的單細(xì)胞分離出來，經(jīng)擴(kuò)大培養(yǎng)，就可恢復(fù)原菌株的典型性狀。常用的分離純化的方法可歸納成兩類：一類較粗放，只能達(dá)到“菌落純”的水平，即從種的水平來說是純的。例如采用稀釋平板法、涂布平板法、平板劃線法等方法獲得單菌落。另一類是較精細(xì)的單細(xì)胞或單孢子分離方法。它可以達(dá)到“細(xì)胞純”即“菌株純”的水平。后一類方法應(yīng)用較廣，種類很多，既有簡單的利用培養(yǎng)皿或凹玻片等作分離室的方法，也有利用復(fù)雜的顯微操縱器的純種分

流式細(xì)胞術(shù)介紹及實(shí)驗(yàn)常見問題2024/04/08: 流式細(xì)胞術(shù)廣泛應(yīng)用于細(xì)胞表面和細(xì)胞內(nèi)分子表達(dá)特征的分析，界定不同種類的細(xì)胞群，測定分離出的亞類純度，分析細(xì)胞的大小和總量，它可以同時(shí)分析單個(gè)細(xì)胞的多個(gè)參數(shù)。它主要用于檢測標(biāo)記在抗體上的熒光強(qiáng)度，這些熒光抗體則可以檢測與特定細(xì)胞分子結(jié)合的蛋白或配體，如與DNA結(jié)合的溴化丙啶(PI)等。染色步驟包括：將培養(yǎng)的細(xì)胞或組織樣品制成單細(xì)胞懸液，然后將細(xì)胞放入管子或酶標(biāo)板中與熒光標(biāo)記或未標(biāo)記的抗體孵育。之后將細(xì)胞放入流式細(xì)胞儀中進(jìn)行分析。懸浮緩沖液中染色的細(xì)胞樣品通過流式細(xì)胞儀時(shí)，由于鞘液的作用被限制在液流

細(xì)胞培養(yǎng)的體內(nèi)、外細(xì)胞的差異和分化2024/04/07: 細(xì)胞培養(yǎng)的體內(nèi)、外細(xì)胞的差異和分化1、差異：細(xì)胞離體后，失去了神經(jīng)體液的調(diào)節(jié)和細(xì)胞間的相互影響，生活在缺乏動(dòng)態(tài)平衡相對(duì)穩(wěn)定環(huán)境中，日久天長，易發(fā)生如下變化：分化現(xiàn)象減弱；形態(tài)功能趨于單一化或生存一定時(shí)間后衰退死亡；或發(fā)生轉(zhuǎn)化獲得不死性，變成可無限生長的連續(xù)細(xì)胞系或惡性細(xì)胞系。因此，培養(yǎng)中的細(xì)胞可視為一種在特定的條件下的細(xì)胞群體，它們既保持著與體內(nèi)細(xì)胞相同的基本結(jié)構(gòu)和功能，也有一些不同于體內(nèi)細(xì)胞的性狀。實(shí)際上從細(xì)胞一旦被置于體外培養(yǎng)后，這種差異就開始發(fā)生了。2、分化：細(xì)胞分化（celldiffer

ELISA實(shí)驗(yàn)細(xì)胞處理方法整理！2024/04/03: （酶聯(lián)免疫吸附劑測定）是一種快速、靈敏、準(zhǔn)確可靠的一種定量分析方法，樣本的處理對(duì)于實(shí)驗(yàn)的成功有著舉足輕重的作用。利用進(jìn)行檢測的樣本類型包括常見的血液（血清、血漿），組織勻漿、細(xì)胞裂解液、細(xì)胞培養(yǎng)上清以及不常見的皮膚組織、尿液、糞便、肺泡灌洗液、唾液、腦脊液、胸腹水、前列腺液、精液、陰道分泌物等，這些樣本收集的時(shí)間、處理方法和保存都會(huì)影響到實(shí)驗(yàn)的結(jié)果。下面就常見細(xì)胞處理方法的整理，希望對(duì)您有所幫助。細(xì)胞樣本根據(jù)目的物所在部位可選擇細(xì)胞裂解液或細(xì)胞培養(yǎng)上清作為樣本。需要注意的是：因該類樣本干擾因素較

HE染色的實(shí)驗(yàn)步驟及注意事項(xiàng)2024/04/02: 一、實(shí)驗(yàn)步驟：（1）樣品制備：對(duì)于貼壁生長細(xì)胞，胰酶消化，調(diào)整細(xì)胞濃度約1×105/ml，滴加于蓋玻片上(置于6孔板中)，培養(yǎng)相應(yīng)時(shí)間后，取出細(xì)胞爬片，用PBS洗滌3次。（2）樣品固定：95%乙醇固定20min，PBS洗滌2次，每次1min。（3）染核：蘇木素染液染色2-3min，自來水洗滌。（4）分色：鏡下觀察，若細(xì)胞核染色過深，用1%鹽酸酒精溶液分色數(shù)秒，自來水洗滌。（5）染胞質(zhì)：浸入伊紅染液染色1min，自來水洗滌。（6）吹干或自然晾干細(xì)胞爬片后，中性樹膠封片。若細(xì)胞用4%多聚甲醛固定，則

細(xì)胞死亡的不同類型分析2024/04/01: 細(xì)胞死亡是所有生物的基本過程，通過不同的機(jī)制發(fā)生。程序性細(xì)胞死亡的三種主要類型是凋亡、焦亡和壞死，每一種途徑都使用復(fù)雜的分子和細(xì)胞機(jī)制。盡管每種途徑都有特定的機(jī)制和結(jié)果，但它們具有共同的組成部分和特征。凋亡（即I型細(xì)胞死亡）是程序性細(xì)胞死亡（PCD）的嚴(yán)格調(diào)控形式，可觸發(fā)細(xì)胞自我毀滅而不受任何外部影響。它是生命的重要組成部分，特別是對(duì)于必須控制細(xì)胞的生長、發(fā)育和更新以維持體內(nèi)平衡的多細(xì)胞生物而言。凋亡是胚胎正常發(fā)育的關(guān)鍵，典型例子如手指之間的細(xì)胞為了分開手指而凋亡。自噬（即II型細(xì)胞死亡）也經(jīng)常

Western blot檢測的抗體怎么選擇合適的？2024/03/29: WB免疫印跡法，也稱免疫轉(zhuǎn)移技術(shù)IBT(Immunoblotting)，是Towbin將1975年Southern發(fā)明的Soutnernblotting技術(shù)應(yīng)用于蛋白-蛋白相互作用建立的免疫學(xué)檢測方法。其操作簡便，主要用于未知蛋白檢測及抗原組分、抗原決定簇鑒定，同時(shí)也用于未知抗體的檢測和單抗鑒定等，在生物學(xué)基礎(chǔ)研究和臨床疾病早期診斷和預(yù)后跟蹤分析方面都有應(yīng)用。WB實(shí)驗(yàn)中使用到的有三種抗體：一抗、二抗和內(nèi)參抗體。一抗是唯1針對(duì)目標(biāo)抗原的抗體，可以進(jìn)行制備也可以購買現(xiàn)貨，難度系數(shù)較高；二抗直接買就O

抗體和重組蛋白的使用攻略及保存原則2024/03/28: 抗體和重組蛋白無論是保存還是運(yùn)輸，請(qǐng)避免反復(fù)凍融。反復(fù)凍融，冰晶會(huì)破壞抗體和重組蛋白的空間結(jié)構(gòu)，導(dǎo)致蛋白變性形成多聚體和重組蛋白構(gòu)象改變，從而降低抗體的結(jié)合能力，也加快了抗體球蛋白和重組蛋白的降解速度?？贵w和重組蛋白保存得當(dāng)與否，直接決定了抗體和重組蛋白的活性使用效果，如果保存得當(dāng)，抗體和重組蛋白活性大部分都可以維持?jǐn)?shù)年。1.收到抗體和重組蛋白后的操作收到抗體和重組蛋白后（大部分抗體和重組蛋白是溶液態(tài)），請(qǐng)務(wù)必在4℃，12000rpm，離心3分鐘，再打開管蓋進(jìn)行分裝、溶解和保存（如果抗體和重組蛋

PBS緩沖液(溶解保護(hù)試劑)配制標(biāo)準(zhǔn)與使用范圍2024/03/27: PBS緩沖液是一種廣泛應(yīng)用于生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)中的緩沖溶液，它的全稱是PhosphateBufferSaline(PB)，中文通常稱為"磷酸鹽緩沖鹽溶液"或者"磷酸鹽緩沖生理鹽水"。這種溶液之所以能夠保持穩(wěn)定的pH值，主要得益于其中的磷酸緩沖對(duì)（H2PO4-和HPO42-）。在PBS中，陰離子主要是碳酸氫根離子(HCO3-)，而陽離子則是鈉離子(Na+)或鉀離子(K+)。這些離子共同構(gòu)成了一個(gè)穩(wěn)定的酸堿平衡體系，使得PBS能夠在一定的范圍內(nèi)保持穩(wěn)定的pH值。因此，PBS不僅適用于作為培養(yǎng)基的成分之一，

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