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中級(jí)會(huì)員 | 第6年
專性厭氧菌的培養(yǎng)方法及注意事項(xiàng)2024/07/31
一、專性厭氧菌的介紹根據(jù)細(xì)菌生長(zhǎng)對(duì)氧的需求,主要可分為四大類:專性需氧菌、兼性厭氧菌、專性厭氧菌、微需氧菌。專性厭氧菌需要在嚴(yán)格無(wú)氧的氣體環(huán)境中生長(zhǎng),氧氣會(huì)對(duì)菌產(chǎn)生毒害作用,也有一些厭氧菌在含5%-10%二氧化碳?xì)怏w環(huán)境中可耐受低濃度的氧氣。常見的專性厭氧菌有梭菌屬(如產(chǎn)氣莢膜梭菌、肉毒梭菌、破傷風(fēng)梭菌、艱難梭菌等)、雙歧桿菌屬(如嬰兒雙歧桿菌、動(dòng)物雙歧桿菌等)、擬桿菌屬、梭桿菌屬、厭氧消化鏈球菌屬等。二、厭氧培養(yǎng)環(huán)境的構(gòu)造(1)使用厭氧培養(yǎng)箱,通氣培養(yǎng)。一些厭氧培養(yǎng)箱可同時(shí)進(jìn)行接種等微生物操作
甘露醇卵黃培養(yǎng)基基礎(chǔ)原理和使用方法2024/07/19
一、試驗(yàn)原理:用于分離培養(yǎng)病原性金黃SE葡萄球菌。蛋白胨和牛肉粉提供氮源、維生素和生長(zhǎng)因子;D—甘露醇為可發(fā)酵糖類;7.5%濃度氯化鈉可抑制除葡萄球菌外的大部分微生物的生長(zhǎng);瓊脂是培養(yǎng)基的凝固劑;酚紅為pH指示劑,金黃SE葡萄球菌可分解培養(yǎng)基中的甘露醇產(chǎn)酸,使菌落周圍變黃,并能降解卵黃中的卵磷脂使菌落產(chǎn)生暈圈。二、培養(yǎng)基配方(g/L):蛋白胨10.0D-甘露醇10.0牛肉粉2.5氯化鈉75.0酚紅0.025瓊脂15.0pH7.4±0.225℃三、試驗(yàn)方法:粉體裝培養(yǎng)基的使用:1.稱取本品112.
M-肉湯培養(yǎng)基的原理及使用方法2024/07/11
一、試驗(yàn)原理:用于食品中沙門氏菌酶標(biāo)免疫試驗(yàn)的后增菌培養(yǎng)。胰酪蛋白胨、酵母浸粉提供碳源和氮源;D-甘露糖提供能源;磷酸氫二鉀為緩沖劑;氯HUA錳、硫酸鎂和硫酸亞鐵提供必需的微量元素;氯化鈉維持均衡的滲透壓;吐溫80是非離子表面活性劑。二、培養(yǎng)基配方(g/L):胰酪蛋白胨12.5酵母浸粉5.0D-甘露糖2.0檸檬酸鈉5.0氯化鎂0.14氯化鈉5.0磷酸氫二鉀5.0硫酸鎂0.8硫酸亞鐵0.04吐溫800.75pH7.0±0.225℃三、試驗(yàn)方法:1、稱取本品36.2g,加熱溶解于1000ml蒸餾水中
梭菌鑒定培養(yǎng)基(DCA)原理及現(xiàn)象2024/07/05
一、用途及原理用于干燥食品中亞硫酸鹽還原梭菌的計(jì)數(shù)。蛋白胨、牛肉浸粉、酵母浸粉可為細(xì)菌的生長(zhǎng)提供豐富的營(yíng)養(yǎng),葡萄糖、淀粉可做為碳源供細(xì)菌利用,同時(shí)淀粉有助于芽孢的萌發(fā)生長(zhǎng),L-半胱氨酸鹽酸鹽為還原劑,幫助維持厭氧環(huán)境,有利于厭氧菌的生長(zhǎng);刃天青為氧氣指示劑,有氧時(shí)變?yōu)榧t色,可幫助監(jiān)測(cè)培養(yǎng)基是否處于無(wú)氧環(huán)境;檸檬酸鐵銨和亞硫酸鈉可檢測(cè)硫化氫的產(chǎn)生,能還原亞硫酸鹽的梭菌可將亞硫酸鹽還原為硫化氫,硫化氫與鐵離子結(jié)合,使菌落呈現(xiàn)黑色。二、培養(yǎng)基配方(g/L)胰酪蛋白胨5.0蛋白胨5.0牛肉浸粉8.0可溶
乳酸菌檢驗(yàn)的計(jì)數(shù)方法與規(guī)則詳解2024/06/27
一、引言前期曾介紹了乳酸菌的分類和乳酸菌檢驗(yàn)所用的幾種主要培養(yǎng)基,本文將進(jìn)一步就GB4789.35中乳酸菌檢驗(yàn)時(shí)所用的計(jì)數(shù)方法和規(guī)則進(jìn)行詳細(xì)解讀。二、計(jì)數(shù)方法《GB4789.35食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品微生物學(xué)檢驗(yàn)乳酸菌檢驗(yàn)》中,主要涉及了3種乳酸菌,分別為乳桿菌屬、雙歧桿菌屬和嗜熱鏈球菌屬。由于3種乳酸菌的培養(yǎng)條件和特征各有不同,要檢驗(yàn)出樣品中乳酸菌的總數(shù),就需要根據(jù)菌種的不同選擇使用合適的培養(yǎng)基,對(duì)結(jié)果進(jìn)行計(jì)數(shù)。標(biāo)準(zhǔn)中是這樣規(guī)定的:(表1)其中:6.2.3.2是使用改良MRS培養(yǎng)基傾注,厭氧培養(yǎng)
乳酸桿菌選擇性培養(yǎng)基原理及實(shí)驗(yàn)現(xiàn)象2024/06/20
一、用途:用于乳酸菌的分離培養(yǎng)。二、實(shí)驗(yàn)原理:胰酪蛋白胨、牛酵母浸粉提供氮源、維生素、生長(zhǎng)因子;葡萄糖提供碳源;磷酸氫二鉀為緩沖劑;枸櫞酸三銨、硫酸鎂、硫酸錳、硫酸亞鐵、吐溫-80和乙酸鈉為培養(yǎng)各種乳酸菌提供生長(zhǎng)因子,吐溫80為乳酸桿菌提供所需的代謝脂肪酸;檸檬酸銨和乙酸鈉能夠抑制一些雜菌的生長(zhǎng),包括鏈球菌、霉菌和除乳酸桿菌外的大多數(shù)口腔微生物菌群;加入乙酸,使pH值降低,抑制了其它細(xì)菌的生長(zhǎng),有利于乳酸桿菌的分離;加入碳酸鈣是由于乳酸菌在培養(yǎng)基中產(chǎn)酸可以形成溶鈣環(huán),便于區(qū)分;瓊脂是培養(yǎng)基的凝固
SS瓊脂(沙門菌、志賀氏菌瓊脂)原理及用途2024/06/14
一、用途及原理該培養(yǎng)基主要用于沙門氏菌的分離培養(yǎng),也可用于志賀氏菌、小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌等腸道致病菌的分離培養(yǎng)。月示胨、牛肉粉提供碳源、氮源、維生素和礦物質(zhì);乳糖為可發(fā)酵的糖類;三號(hào)膽鹽、枸櫞酸鈉和煌綠抑制革蘭氏陽(yáng)性菌及大多數(shù)的大腸菌群和變形桿菌,但不影響沙門氏菌的生長(zhǎng);硫代硫酸鈉和枸櫞酸鐵用于檢測(cè)硫化氫的產(chǎn)生,使菌落中心呈黑色;中性紅為pH指示劑,發(fā)酵糖產(chǎn)酸的菌落呈紅色,不發(fā)酵糖的菌落為無(wú)色;瓊脂是培養(yǎng)基的凝固劑。多數(shù)沙門氏菌不發(fā)酵乳糖,并產(chǎn)硫化氫,在SS平板上菌落為無(wú)色透明并有黑色中心,不產(chǎn)
布氏肉湯培養(yǎng)基的使用原理及方法2024/06/06
一、實(shí)驗(yàn)原理:蛋白胨、酵母浸粉、胰酪蛋白胨提供氮源、維生素和生長(zhǎng)因子;葡萄糖提供碳源;氯化鈉維持均衡的滲透壓;亞硫酸氫鈉為還原劑。二、實(shí)驗(yàn)方法:稱取本品28.1g,加熱攪拌溶解于1000ml蒸餾水中,分裝試管,121℃高壓滅菌15分鐘,備用。1、制備質(zhì)控菌液。2、把質(zhì)控菌液加入試管中。3、在42℃微需氧培養(yǎng)48小時(shí),記錄實(shí)驗(yàn)結(jié)果。三、結(jié)果判定:接種以下質(zhì)控菌株,放置42±1℃微需氧培養(yǎng)48±2小時(shí)。質(zhì)控菌株菌株編號(hào)接種量(CFU)生長(zhǎng)情況其他特征空腸彎曲菌ATCC3329110-100+++渾濁
MLCB寒天培地培養(yǎng)基的試驗(yàn) 原理、試驗(yàn)方法及結(jié)果2024/05/30
一、試驗(yàn)原理:本產(chǎn)品用于沙門氏菌的分離培養(yǎng)。酵母浸粉、蛋白胨和牛心浸粉提供微生物生長(zhǎng)所需的碳源和氮源;氯化鈉用于維持均衡的滲透壓,甘露醇作為可發(fā)酵的糖類被沙門氏菌利用產(chǎn)酸;沙門氏菌產(chǎn)生的脫羧酶與L-賴氨酸鹽酸鹽反應(yīng)生成堿性物質(zhì);在堿性條件下,硫代硫酸鈉和檸檬酸鐵銨與沙門氏菌產(chǎn)生的硫化氫反應(yīng)使得菌落的顏色呈現(xiàn)黑色;煌綠和結(jié)晶紫可抑制大腸桿菌等革蘭氏陽(yáng)性菌的生長(zhǎng);瓊脂起凝固的作用。二、培養(yǎng)基配方(g/L):表1MLCB寒天培地培養(yǎng)基配方成分添加量酵母浸粉5.0蛋白胨10.0牛心浸粉2.0氯化鈉4.0
Bolton肉湯的簡(jiǎn)單介紹2024/05/23
一、培養(yǎng)基用途:用于空腸彎曲菌的增菌(GB標(biāo)準(zhǔn))。二、培養(yǎng)基成分及使用方法:1.培養(yǎng)基成分2.使用方法稱取本品27.6g,加熱溶解于1000ml蒸餾水中,分裝,每瓶100mL,121℃高壓滅菌15min,冷卻至45-50℃時(shí),每瓶培養(yǎng)基加入5mL無(wú)菌裂解脫纖維羊或馬血和1支Bolton肉湯添加劑,混勻,備用。注:培養(yǎng)基高壓滅菌后有少量沉淀。三、原理:動(dòng)物組織酶解物和乳白蛋白水解物提供碳源、氮源;酵母浸粉提供各種維生素;氯化鈉維持滲透壓;丙酮酸鈉和偏亞硫酸氫鈉能中和培養(yǎng)基的有毒物質(zhì),也能增強(qiáng)菌的耐
培養(yǎng)基保存的注意事項(xiàng)2024/05/14
一、商品化脫水干燥培養(yǎng)基的保存(1)濕度:干粉培養(yǎng)基具有很強(qiáng)的吸濕性,因此必須在保存的干燥的環(huán)境中,特別是已經(jīng)開瓶的培養(yǎng)基,需要盡可能在濕度低的環(huán)境中密封保存。如保存過(guò)程中發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)基出現(xiàn)吸潮結(jié)塊、粘稠變色等現(xiàn)象,則不能使用。注:有些培養(yǎng)基因干粉中添加了吐溫80(如MRS培養(yǎng)基)等液體成分,粉末略有粘連或小塊狀,可以輕松壓碎,并非吸潮導(dǎo)致,不影響使用。(2)溫度:多數(shù)商品化脫水培養(yǎng)基可常溫保存(一般指10-30℃)或陰涼處保存(一般指不超過(guò)20℃),對(duì)于含不穩(wěn)定成分的培養(yǎng)基(如某些抗生素、顯色底物
丙二酸鹽生化管的使用原理及結(jié)果判定2024/05/06
一、試驗(yàn)原理:酵母浸粉提供碳源、氮源、維生素和生長(zhǎng)因子;氯化鈉維持均衡的滲透壓;磷酸氫二鉀和磷酸二氫鉀為緩沖劑;細(xì)菌能夠利用丙二酸鈉為碳源,并將其分解為碳酸鈉,使培養(yǎng)基變堿,遇指示劑后由綠色變?yōu)樗{(lán)色。二、試驗(yàn)方法:1、用磨砂輪在安瓿瓶頸部劃線一圈,掰開待用;2、將標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備菌株接種到非選擇性肉湯中或采用其他制備方法,制備成5McFarland濁度(約109CFU/mL)的菌懸液;3、吸取100uL菌懸液至生化管中,36±1℃培養(yǎng)24h后,觀察試驗(yàn)結(jié)果。三、試驗(yàn)結(jié)果:四、注意事項(xiàng)1、該生化管需放置陰
硝酸鹽還原試驗(yàn)的簡(jiǎn)單介紹2024/04/22
一、培養(yǎng)基用途:以HB0277硝酸鹽肉湯為例,該培養(yǎng)基用于蠟樣芽孢桿菌的硝酸鹽還原試驗(yàn)。二、培養(yǎng)基成分及使用方法:1.培養(yǎng)基成分2.使用方法稱取本品9.0g,加熱溶解于1000ml蒸餾水中,分裝試管,每管5mL(觀察產(chǎn)氣需加小倒管),121℃高壓滅菌15min。此培養(yǎng)基需配套HB8282硝酸鹽還原試劑使用。三、原理:蛋白胨和牛肉粉提供碳源、氮源、維生素和生長(zhǎng)因子;某些細(xì)菌可利用硝酸鹽產(chǎn)亞硝酸鹽、氨或氮?dú)?。滴加硝酸鹽還原試劑后若試驗(yàn)菌培養(yǎng)物中有亞硝酸鹽,可與乙酸、對(duì)苯氨基苯磺酸和α-萘胺反應(yīng)生成紅
胰化大豆堅(jiān)固綠瓊脂的使用與實(shí)驗(yàn)現(xiàn)象2024/04/15
一、試驗(yàn)原理用于濾膜法中細(xì)菌總數(shù)測(cè)定。胰蛋白胨和大豆胨提供氮源、維生素和生長(zhǎng)因子;氯化鈉維持均衡的滲透壓;固綠是一種染含有漿質(zhì)的纖維素細(xì)胞組織的染色劑;瓊脂是培養(yǎng)基的凝固劑。二、培養(yǎng)基配方(g/L)1.稱取本品40.25g加熱溶解于1000ml蒸餾水中,分裝,121℃高壓滅菌15分鐘。2.將滅菌完畢后的培養(yǎng)基倒入無(wú)菌空平皿中,備用。3.將質(zhì)控菌株稀釋至合適梯度,用移液槍吸取100微升均勻涂布于平皿表面,并用TSA平板做參比培養(yǎng)基。三、實(shí)驗(yàn)結(jié)果按標(biāo)簽用法制備培養(yǎng)基,接種以下質(zhì)控菌株,放置36±1℃
改良Skirrow氏瓊脂基礎(chǔ)的原理及實(shí)驗(yàn)現(xiàn)象2024/04/09
一、用途:用于空腸彎曲桿菌的分離培養(yǎng)(GB4789.9-2014,GB4789.28-2013,ISO標(biāo)準(zhǔn))二、實(shí)驗(yàn)原理:蛋白胨、酵母浸粉和胰酪蛋白胨提供碳源、氮源、維生素和礦物質(zhì);氯化鈉提供均衡的滲透壓;無(wú)菌凍融脫纖維羊血提供額外的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì);鐵、焦亞硫酸鈉和丙酮酸鈉有利于空腸彎曲菌的生長(zhǎng);TMP、多粘菌素B和萬(wàn)古霉素可抑制樣本中非彎曲菌的生長(zhǎng),從而便于分離空腸彎曲菌;瓊脂是凝固劑。三、培養(yǎng)基配方(g/L)FBP溶液:丙酮酸鈉、焦亞硫酸鈉、鐵各0.25g溶解于100mL純化水中,用0.22μm微
我妻氏培養(yǎng)基基礎(chǔ)的原理和使用方法2024/04/07
一、試驗(yàn)原理:本培養(yǎng)基用于副溶血性弧菌神奈川現(xiàn)象試驗(yàn)。蛋白胨、酵母浸粉提供氮源、維生素、生長(zhǎng)因子;7%氯化鈉可以抑制一些非弧菌的細(xì)菌生長(zhǎng),不影響副溶血性弧菌生長(zhǎng);磷酸氫二鉀為pH緩沖劑;甘露醇為可發(fā)酵的醇;結(jié)晶紫抑制革蘭氏陽(yáng)性菌,特別抑制革蘭氏陽(yáng)性桿菌和糞鏈球菌;兔血紅細(xì)胞用于檢測(cè)副溶血性弧菌是否具有特定溶血素;瓊脂為凝固劑。二、培養(yǎng)基配方(g/L)三、試驗(yàn)方法:1.稱取本品11.3g,溶解于100mL蒸餾水中,加熱滅菌30分鐘,待冷至50℃左右時(shí),按5%的體積加入新鮮兔血球,混勻后傾入無(wú)菌平皿
班氏試劑的使用原理及結(jié)果判定2024/04/02
一、實(shí)驗(yàn)原理:班氏試劑也稱本尼迪克試劑,是一種由硫酸銅、檸檬酸鈉和無(wú)水碳酸鈉配制成的淺藍(lán)色化學(xué)試劑,在沸水浴的作用下可以與醛或醛糖反應(yīng)生成紅黃色沉淀。班氏試劑可以長(zhǎng)時(shí)間存放備用,而斐林溶液必須現(xiàn)配現(xiàn)用,因此班氏試劑為斐林試劑的改良版,常用作樣品中還原糖的檢測(cè)。二、試驗(yàn)方法:1、取一支試管,加入一定量的待測(cè)樣品。2、向試管內(nèi)注入等體積的班氏試劑。3、將試管沸水浴2-10分鐘。4、觀察溶液顏色變化。三、實(shí)驗(yàn)結(jié)果:還原性糖如葡萄糖,果糖,半乳糖等呈陽(yáng)性,變?yōu)榇u紅色或橙黃色。非還原性糖如蔗糖,淀粉,纖維
V-J瓊脂培養(yǎng)基的原理和使用方法2024/03/28
一、試驗(yàn)原理:本培養(yǎng)基用于金黃色葡萄球菌的選擇性分離培養(yǎng)。明膠蛋白胨、酵母浸粉為微生物的生長(zhǎng)提供氮源、碳源及維生素;甘露醇為可發(fā)酵糖類;酚紅為酸堿指示劑;磷酸氫二鉀為pH緩沖劑;甘氨酸和氯化鋰對(duì)金黃色葡萄球菌以外的其它菌株有抑制作用;較高濃度的亞碲酸鉀可抑制多數(shù)雜菌的生長(zhǎng),金黃色葡萄球菌可還原亞碲酸鉀,使菌落顯黑色,同時(shí)可分解培養(yǎng)基中的甘露醇產(chǎn)酸,使培養(yǎng)基變黃;瓊脂是培養(yǎng)基的凝固劑。二、培養(yǎng)基配方(g/L):三、試驗(yàn)方法:1、稱取本品61.0g,加熱攪拌溶解于1000mL蒸餾水中,煮沸1分鐘,1
THB原理和質(zhì)控方法2024/03/25
一、用途用于鏈球菌的增菌培養(yǎng)。二、培養(yǎng)基配方(g/L)此配方可以進(jìn)行改良或增加營(yíng)養(yǎng)成分以獲得最佳的結(jié)果三、原理牛肉粉、胰蛋白胨、葡萄糖提供碳氮源、維生素和生長(zhǎng)因子;磷酸氫鈉和磷酸二氫鉀為緩沖劑;氯化鈉維持滲透壓;多粘菌素E與萘啶酮酸為抗生素,對(duì)革蘭氏陰性菌有很強(qiáng)的抑制性。四、試驗(yàn)方法1、稱取本品36.4g,溶解于1000ml蒸餾水中,121℃高壓滅菌15分鐘待培養(yǎng)基冷至45-50℃時(shí),加入多粘菌素E10mg和萘啶酮酸15mg,混勻,分裝于滅菌的18mm*180mm試管中。2、制備質(zhì)控菌液,選擇合
酵母粉葡萄糖氯霉素瓊脂培養(yǎng)基原理和使用方法2024/03/08
一、試驗(yàn)原理:用于牛奶和乳制品中霉菌及酵母菌總數(shù)測(cè)定。酵母浸粉提供碳源、氮源、維生素和生長(zhǎng)因子;較高含量的葡萄糖提供碳源,有利于真菌的生長(zhǎng);氯霉素可抑制細(xì)菌的生長(zhǎng);瓊脂是培養(yǎng)基凝固劑。二、培養(yǎng)基配方(g/L):三、試驗(yàn)方法:粉體裝培養(yǎng)基的使用:1.稱取本品40.0g,加熱溶解于1000ml蒸餾水中,121℃高壓滅菌15分鐘,冷卻至50℃左右時(shí),傾入無(wú)菌平皿,備用。2.制備質(zhì)控菌液。3.選擇合適稀釋度的質(zhì)控菌液0.1ml,均勻涂布于平板上,每一稀釋度接種兩個(gè)平板。4.28±1℃需氧培養(yǎng)48-72小
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