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全自動外泌體熒光檢測分析
美國NanoView公司所開發(fā)的全自動外泌體熒光檢測分析是款無需純化的、全自動的可對單個外泌體進行表征分析的全新設備。該設備能夠提供外泌體表征信息，包括外泌體粒徑大小、計數(shù)、分布、攜帶蛋白表達、生物標志物（CD9，CD81，CD63等）共定位等。操作簡單，結果可靠。經(jīng)推出，便引起了外泌體域科研工作者的廣泛關注，短短兩年時間已有50多個實驗室采用該技術，發(fā)表重要文獻近百篇。
基本原理是種基于異性免疫捕獲技術，允許研究者直接分析定群體的外泌體或外囊泡。通過配套的試劑盒，客戶次性能夠分析多達9個不同的樣本，大大節(jié)省了時間和經(jīng)濟成本。兼容各種生物樣本，除了純化的外泌體之外，對于血液、尿液、惡性腫瘤、腹水中的外泌體也可直接檢測分析，大大拓展了研究范圍。
應用方向及主要征
生物標記物共定位 可量化4種標記物的表達情況 |
計數(shù)分析 直接從樣品中計算抗原陽性外泌體的數(shù)量，無需提純 |
粒徑分析 高精度統(tǒng)計外泌體的顆粒大小及分布 |
檢測外泌體內容物 使用ExoView Cargo試劑盒可探測外泌體內部核酸的裝載情況，分析裝載率 |
熒光檢測 具備3個熒光通道，能夠探測單個蛋白的結合 |
線性工作流程 9個樣品的全自動分析 |
無須純化 無需擔心純化帶來的誤差，測量樣品間的表征和表達信息的差異 |
多重樣本分析 可使用6種表面標記物來篩選外泌體 |
ExoView™ Kit 配置清單:
ExoView™ Tetraspanin Kits | CD9 - 捕獲抗體 CD63 - 捕獲抗體 CD81 - 捕獲抗體 Mouse IgG 陰性對照 CD9、CD63、CD81三色共標記熒光抗體。 |
ExoView™ Tetraspanin Plasma Kits | CD9 - 捕獲抗體 CD63 - 捕獲抗體 CD81 - 捕獲抗體 CD41a - 捕獲抗體 多達三種定制化捕獲抗體 同種陰性對照 CD9、CD63、CD81三色共標記熒光抗體。 |
ExoView™ Tetraspanin Custom Kits | CD9 - 捕獲抗體 CD63 - 捕獲抗體 CD81 - 捕獲抗體 多達三種定制化捕獲抗體 同種陰性對照 CD9、CD63、CD81三色共標記熒光抗體。 |
ExoView™ Cargo Kits | 兼容所有ExoView Kit 標準 CD9, CD63和CD81 捕獲抗體 Mouse IgG 陰性對照 ExoView Cargo 試劑 CD9、CD63、CD81三色共標記熒光抗體。 Sytenin熒光抗體 |
粒徑分析
全自動外泌體熒光檢測分析能夠對>50 nm的外泌體進行全方面的表征，無論是粒徑尺寸、粒徑分布還是外泌體的亞型均可在次測試中得到。并且所用來測試的樣本無需進行純化，避免因純化帶來的樣本偏差。
分析不同大小和不同尺度的外泌體亞群，在CD171過表達系統(tǒng)中，100 nm以上的外泌體僅表達了CD171。
量化外泌體亞群
通過抗體捕獲的模式，外泌體熒光檢測分析能夠量化含有不同標記物的外泌體亞群，并對不同種群的外泌體進行異性計數(shù)和分析。整個過程無需純化，并且線性范圍可跨越3個數(shù)量。
TSPAN8陽性細胞外囊泡的稀釋曲線。使用1:3比例的梯度稀釋。用R2 = 0.9986計算與TSPAN8熒光數(shù)據(jù)的線性擬合。
檢測外囊泡中的裝載物
MISEV建議在表征外泌體和外囊泡時，應當同時測量表面和載體蛋白。使用ExoView芯片可穿透外泌體，探測膜內蛋白和載體。并且單次可定量3種表面、管腔蛋白。
檢測細胞外泌體內的Syntenin。
WT細胞在未穿膜的條件下幾乎觀測不到Syntenin的信號。進行穿膜處理后可以觀測到Syntenin信號，而KO之后信號消失
生物標志物共定位
外泌體熒光檢測分析能夠在單個外泌體樣本上檢測多達4種標記物，并同時提供外泌體的其它表征數(shù)據(jù)諸如計數(shù)、顆粒尺寸統(tǒng)計等。
無需純化
外泌體熒光檢測分析只測量含有靶標抗原的定細胞外泌體群體。僅需35ul的稀釋樣品，即可直接獲得外泌體的表型、l粒徑和計數(shù)信息。并且無需擔心污染物對測試的影響。
無論純化與否，Exoview均可進行分析
發(fā)表文章
2020年已發(fā)表文獻
