單細胞可視化分選系統——isoPick

單細胞可視化分選系統——isoPick是英國iotaSciences公司新推出的一款基于GRID技術、高通量、高自動化的單細胞可視化分選系統。isoPick采用微射流技術，利用界面張力對細胞培養(yǎng)基（或干細胞涂層）進行重塑，在培養(yǎng)皿上雕刻出單獨的細胞腔室GRID。isoPick可以在 6 厘米培養(yǎng)皿上創(chuàng)建 256 個單細胞腔室GRID陣列，并將細胞以納升體積全自動地分配到各個 GRID 單細胞腔室中，通過isoPick的光學顯微鏡可以清楚地看到 GRID 室中的單細胞。基于GRID技術和光學成像信息，isoPick可以確保分選出的細胞100%為單細胞。

設備特點

- 全自動化流程

- 操作簡單，對細胞無損傷

- 結果可追蹤

- 分離效率高達100%

- 直接轉移到PCR管或96孔板

- 結構緊湊，體積小

傳統單細胞分離手段無法保證所得的樣品內只有一個單細胞，有可能有多個細胞或細胞團，導致下游的實驗出現誤差。單細胞可視化分選系統—isoPick采用的GRID技術結合圖像信息分析，結果可追蹤，保證100%準確的單細胞分選。而且isoPick分選條件溫和，可以顯著提高分選單細胞的存活率。同時isoPick可將單細胞樣品按照特定的體積直接轉移到96孔板或PCR管中，無縫銜接單細胞下游應用，確保后續(xù)單細胞組學信息完整性。

應用領域

部分用戶單位

部分應用案例

人類誘導多能干細胞(hiPSCs)的單細胞克隆

人類誘導多能干細胞(hiPSCs)構建單克隆細胞系培養(yǎng)步驟繁瑣，細胞對異常的處理和操作非常敏感，傳統單細胞分選容易導致細胞和遺傳毒性應激的積累，進而導致不良分化和多能性喪失。

使用isoPick可以溫和、自動地將人類誘導多能干細胞(hiPSCs)進行單細胞分選，以高效率培養(yǎng)hiPSCs單克隆細胞系，顯著提高了細胞分離與克隆效率。

K562細胞單細胞測序

傳統單細胞測序需對單細胞進行全基因組擴增（WGA），但傳統單細胞WGA受限于如何獲得單個細胞并轉移到小體積的WGA反應中。

使用isoPick自動將K562細胞拾取并轉移至含3.5 µl scWGA試劑的PCR管中，并無縫銜接scWGA反應。瓊脂糖凝膠電泳結果顯示（下圖），單細胞WGA的DNA樣本(+)中兩種基因均被特異性擴增，而陰性對照(-)沒有這兩種擴增產物，符合預期。

對人類誘導多能干細胞 (hiPSCs) Prime 編輯構建工程細胞系

Prime 編輯可在 HEK3 基因座中高效精確插入三個核苷酸，用于構建工程細胞系hiPSCs。通過引入靶標特異性 pegRNA 來編輯單個或多個基因組位點，以進行精確有效的基因組編輯，促進疾病建模和功能遺傳學研究。

Prime 編輯使用與逆轉錄酶融合的 Cas9 切口酶，將 DNA 序列從“Prime 編輯"引導 RNA (pegRNA) 復制到特定基因座。通過Prime 編輯將多西環(huán)素誘導型 Prime Editor 蛋白 (PE2) 整合到 iPSC 細胞系的AAVS1 基因組，之后使用isoPick分選轉入靶基因的hiPSCs細胞系，以確保細胞的單克隆性。（見上圖）

該研究使用isoPick來確保工程細胞系的單克隆性與準確性。

參考文獻：Bharucha N, Ataam J A, Gavidia A A, et al. Generation of AAVS1 integrated doxycycline-inducible CRISPR-Prime Editor human induced pluripotent stem cell line[J]. Stem Cell Research, 2021, 57: 102610.

膠質母細胞瘤（GBM）通過表觀遺傳免疫編輯獲得骨髓相關轉錄程序以引發(fā)免疫逃逸

研究人員通過將多形性膠質母細胞瘤干細胞 (GSC) 連續(xù)移植到免疫活性宿主中，發(fā)現 GSC 通過建立增強的免疫抑制腫瘤微環(huán)境來免疫逃逸。從機制上講，GSC通過表觀遺傳免疫編輯過程引起，其在免疫攻擊后強制執(zhí)行 GSC 中穩(wěn)定的轉錄和表觀遺傳變化。研究中使用Irf8敲除細胞系實驗證明，Irf8的激活是細胞免疫逃逸的一個重要因素，且在體內可能通過IFNγ介導的激活發(fā)生。該研究使用isoPick構建Irf8克隆敲除系。

參考文獻：Gangoso E, Southgate B, Bradley L, et al. Glioblastomas acquire myeloid-affiliated transcriptional programs via epigenetic immunoediting to elicit immune evasion[J]. Cell。

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