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ASFV檢測(cè)肉制品廠的非洲豬瘟檢測(cè)方案

廣州健侖生物科技有限公司

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非洲豬瘟檢測(cè)試劑

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（4）按1%的比例(v/v)加入*，37°C振蕩30min。
（5）按5.84g/100ml加入NaCl，混勻溶解，冰浴1h，10000g離心10min，去細(xì)菌碎片，收集上清。
（6）加入固體PEG 8000至終濃度10%(w/v)，充分振蕩溶解，冰浴1h，使噬菌體顆粒形成沉淀，4°C 12000g離心10min，棄上清。
（7）按每100ml原始菌液加2ml的比例，加入TM緩沖液重懸沉淀。
（8）加等體積*，振蕩30 sec，5000g離心10min，收集上層水相。
（9）再用等體積*抽提1次，得到噬菌體的粗制顆粒。
二、噬菌體基因組DNA的提取
（1）在粗制的噬菌體顆粒中加入DNase I至終濃度5μg/ml，RNase A至1μg/ml，37°C水育1h，以降解殘留的來源于宿主菌的核酸。
（2）加入EDTA (pH8.0)至終濃度20mmol/l，滅活DNase I。
（3）加蛋白酶K至終濃度50μg/ml，SDS至終濃度0.5%，混勻，56°C水浴1h，裂解噬菌體。
（4）加入等體積飽和酚 (pH8.0)抽提，5000g離心10min，收集上層水相。
（5）加入等體積*抽提，5000g離心10min，收集上層水相。