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Zeocin可選擇Sh ble 基因表達的細胞。與現在使用的其他動物細胞標記物無交叉抗性。因此這種抗生素可用來分離對其他篩選劑(如:慶大霉素,潮霉素)有抗性的克隆。Zeocin 是一種屬于爭光霉素家族的糖蛋白抗生素,在體內能作用于大多數細菌(包括E. coli )、真菌(如:酵母菌)、植物細胞、動物細胞。
使用:
● 液體Zeocin 可用于細胞培養(yǎng)。
● 用于篩選轉化株的Zeocin 濃度根據PH 值和鹽濃度改變。
● PH 越高,鹽濃度越低Zeocin 活性越大。
● 普通大腸桿菌菌株篩選可在25 µg/ml zeocin 濃度的低鹽LB 瓊脂培養(yǎng)基中進行,PH 調至7.5 。
● 動物細胞篩選:根據不同細胞系從100 到 750 µg/ml 。
● 植物細胞篩選:根據不同的細胞種類和培養(yǎng)基從50 到 250 µg/ml 。
● 酵母篩選:取決于種屬和培養(yǎng)基,S. cerevisiae Sh ble 轉化株在50 µg/ml 濃度的YPD 培養(yǎng)基中篩選,PH7.0.
舉例:構建融合Zeocin和GFP雙篩選標記質粒pcB-Zeo-GFP。方法質粒LeCo-G/Zeo含有Zeo-GFP融合基因片段,通過PCR反應、BamHI酶切后連接替換空白質粒pCB的篩選基因gpt,通過菌落PCR,酶切圖譜分析及測序分析鑒定重組質粒,構建成功后將其與野生型痘苗病毒進行位點特異性同源重組,經Zeocin藥物篩選2代后,用流式細胞儀觀察重組痘苗病毒GFP表達。結果經菌落PCR,1號、5號和10號菌落中擴增出426bp的目的條帶,與預期的大小**,經酶切分析和DNA測序進一步驗證了重組質粒pCB-zeo-GFP;該質粒與野生型痘苗病毒同源重組,得到了重組的痘苗病毒;Zeocin篩選2代后,病毒上清感染細胞,流式細胞分析7.18%的細胞中有GFP的表達,而陰性對照僅有1.43%;Zeocin藥物篩選5代后,通過激光共聚焦可在80%以上的細胞中觀察帶GFP;提取的重組痘苗基因組DNA也擴增出預期大小目的條帶。結論含Zeocin和GFP雙篩選標記的新型重組痘苗病毒不僅具有可觀察性且具有藥物抗性,非常容易進行篩選鑒定。
訂購:
貨號 | 名稱 | 產地 | 規(guī)格 | 報價 | *(元) | 庫存 |
R25001 | ZEOCIN 博來霉素 | Invitrogen | 125mg | 430 | 360 | 是 |
R25001 | ZEOCIN 博來霉素 | Invitrogen | 1g | 3520 | 2380 | 是 |