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產品簡介
| 供貨周期 | 一周 | 貨號 | 40206ES76 |
|---|---|---|---|
| 應用領域 | 生物產業(yè) |
產品介紹
MTT噻唑蘭 細胞增殖及細胞毒性檢測試劑盒
產品信息
產品名稱 | 產品編號 | 規(guī)格 | 儲存 | 價格（元） |
MTT Cell Proliferation Assay Kit MTT噻唑蘭 細胞增殖及細胞毒性檢測試劑盒 | 40206ES76 | 500T | 4℃避光 | 229.00 |
40206ES80 | 1000T | 4℃避光 | 419.00 | |
40206ES90 | 5000T | 4℃避光 | 1,759.00 |
產品描述
噻唑蘭（Methylthiazolyldiphenyl-tetrazolium bromide, MTT），也稱作溴化噻唑藍四氮唑，是一種黃色染料，已經普遍替代傳統(tǒng)的臺盼藍染色法或者放射性同位素插入法，用來檢測細胞的活力，細胞增殖以及細胞毒性分析。檢測原理在于：MTT是一種可接受氫離子的化合物染料，帶正電荷，具有細胞膜滲透性。活細胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶能夠將外源進入的MTT還原成為水不溶性的深藍色MTT-甲臜結晶，而死細胞不具有此功能。甲臜結晶是不能穿透細胞膜，因此沉積在處于增殖且未受損傷的細胞內。甲臜結晶可用DMSO或者酸化的異丙醇溶解出來，酶標儀下測定570 nm的吸光度反映甲臜的生成量。而甲臜的生成量與活細胞數(shù)目成正比，用以評估細胞存活狀況。
本試劑盒以MTT（高純度）作為指示劑，在經典操作步驟的基礎上，采用*的甲臜溶解液配方，可以直接溶解甲臜沉淀，無需去除原有的培養(yǎng)液。從而避免因去除培養(yǎng)液時甲臜被部分去除而引起的操作誤差。具有本底低，靈敏度高，線性范圍寬，操作簡單等特點。另外，本試劑盒還提供配套的一次性針頭過濾器和注射器，為實驗帶來更多的便利。
產品組分
編號 | 組分 | 產品編號/規(guī)格 | ||
40206ES76（500T） | 40206ES80（1000T） | 40206ES90（5000T） | ||
40206-A | MTT粉末 | 25mg | 50mg | 250mg |
40206-B | MTT溶劑 | 5ml | 10ml | 50ml |
40206-C | 甲臜溶解液 | 50ml | 100ml | 100ml×5 |
40206-D | 除菌套裝 | 1包 | 1包 | 1包 |
運輸和保存方法
冰袋運輸。
收到產品后，取出除菌套裝室溫保存，其他組分4℃保存。甲臜溶解液也可以放到室溫保存。一年有效。
注意事項
甲臜溶解液具有腐蝕性和毒性，使用時注意防護。
MTT有致癌性，應小心操作；MTT溶液需要無菌，因其對菌很敏感。MTT溶液不可4℃保存超過1周，因其可能發(fā)生降解，導致檢測結果錯誤。
MTT法只能用來檢測細胞相對數(shù)和相對活力，但不能測定細胞數(shù)。在用酶標儀檢測結果的時候，為了保證實驗結果的線性，MTT吸光度在0-0.7范圍內。
使用微孔板進行檢測，如果細胞培養(yǎng)時間比較長，需要注意蒸發(fā)的問題。一般情況，由于96孔板周圍一圈zui容易蒸發(fā)，建議棄用周圍一圈的方法，改加PBS，水或者細胞培養(yǎng)液等。也可通過將96孔板放在靠近培養(yǎng)箱內水源的位置，以減緩蒸發(fā)現(xiàn)象。
甲臜溶解液低溫或者常溫保存可能會產生沉淀，只需37℃水浴使其充分溶解，混勻后即可使用。
為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
使用方法（以96孔板為例）
細胞生長的培養(yǎng)條件會影響檢測效果，因此進行MTT檢測時需考慮這些條件，包括：培養(yǎng)時間，傳代次數(shù)以及生長培養(yǎng)基的成分等。一般情況，48-72h培養(yǎng)時間下，zui初鋪板的細胞密度可控制在5×103~5×104/100μl。也可根據(jù)細胞大小，增殖速度的快慢來優(yōu)化zui初的細胞鋪板密度以及培養(yǎng)時間。
注意：1）zui終檢測的培養(yǎng)液內含有酚紅會嚴重影響檢測結果。推薦MTT檢測時細胞培養(yǎng)在無酚紅環(huán)境下。也可以在進行MTT孵育的時候改用無酚紅培養(yǎng)液。2）每次實驗都要設置空白對照孔（不含細胞）。對于細胞毒性試驗，還要設置未經藥物處理的細胞孔，此對照孔的吸光度范圍一般控制在0.75-1.25之間；每個樣品孔建議做三個平行。
A．實驗前試劑準備
1. MTT溶液
用5ml MTT溶劑直接溶解25mg MTT粉末配制成5mg/ml的工作液，用試劑盒內提供的除菌套裝以除去溶液中的細菌，該溶液可4℃ 避光短時間保存（越短越好）。建議溶解后，直接將剩余液體小劑量分裝放到-20℃保存，避免反復凍融，6個月穩(wěn)定。
2） 甲臜溶解液（MTT終止液）
甲臜溶解液低溫或者常溫保存可能會產生沉淀，只需37℃水浴使其充分溶解，混勻后即可使用。
B．MTT細胞增殖檢測
接種細胞：用含10%胎牛血清（FBS）的培養(yǎng)液配制成單個細胞懸液，調整細胞密度，以每孔5×103~5×104個細胞接種到96孔板，每孔體積100µl，培養(yǎng)板的邊緣孔用無菌PBS，水或者培養(yǎng)液填充。設置空白對照孔（不含有細胞）。
37℃，5% CO2，培養(yǎng)24-72h。
可選：對于貼壁細胞，去除舊的培養(yǎng)液，更換100µl/孔新鮮的培養(yǎng)液（不含酚紅）；對于懸浮細胞，離心96孔板，去除盡可能多的上清液。然后加入100µl/孔新鮮的培養(yǎng)液（不含酚紅）重懸細胞；
每孔加入10µl MTT工作液（5 mg/ml），加樣時盡量勤換槍頭，控制加量誤差。
水平搖床上低速混勻1 min后，放入37℃培養(yǎng)箱孵育4h。注：對于高密度的細胞（>100,000 cells/孔）可縮短孵育時間至2h。
對于貼壁細胞，直接吸掉舊的培養(yǎng)液，避免槍尖刮破單細胞層。對于懸浮細胞，離心收集細胞，去除培養(yǎng)液。
加入100µl/孔甲臜溶解液，用槍充分混勻后放入37℃培養(yǎng)箱孵育4 h。注：更長的孵育時間會降低檢測靈敏度。
孵育結束，放置在酶標儀上搖勻后，選擇570nm，測定吸光度。記錄結果，比色以空白調零。如果無570nm濾光片，可以使用560-600nm濾光片。
注：對于細胞毒性檢測，以未經藥物處理細胞的OD值為100%，然后計算藥物處理細胞所占的比率（x），公式如下：OD（未處理細胞）/OD（藥物處理細胞）=100%/x。然后建立直方圖。
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