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翌圣生物科技（上海）股份有限公司
初級(jí)會(huì)員·12年
20561ES03His標(biāo)簽蛋白純化磁珠
| 參考價(jià) | ￥198 |
具體成交價(jià)以合同協(xié)議為準(zhǔn)
- 20561ES03 型號(hào)
- Yeasen/翌圣生物 品牌
- 生產(chǎn)商 廠商性質(zhì)
- 上海市 所在地
規(guī)格
| 1 ml | 198元 | 99 件 可售 |
訪問(wèn)次數(shù)：441更新時(shí)間：2023-12-11 17:34:36
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產(chǎn)品簡(jiǎn)介
| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 1ml |
|---|---|---|---|
| 貨號(hào) | 20561ES03 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 醫(yī)療衛(wèi)生,化工,生物產(chǎn)業(yè) |
產(chǎn)品介紹
產(chǎn)品信息
產(chǎn)品名稱 | 產(chǎn)品編號(hào) | 規(guī)格 | 價(jià)格（元） |
HisSep Ni-NTA MagBeads His標(biāo)簽蛋白純化磁珠 | 20561ES03 | 1 mL | 198.00 |
20561ES08 | 5 mL | 598.00 |
產(chǎn)品描述
His-tag蛋白純化磁珠是一種高容量的新型磁性微球產(chǎn)品，用于快速、高效的純化 His標(biāo)簽融合蛋白。磁珠在磁場(chǎng)作用下直接從生物樣品中可一步純化出高達(dá)95%純度的目的蛋白，極大的簡(jiǎn)化了純化工藝和提高純化效率。將含有His標(biāo)簽蛋白的細(xì)胞裂解物添加到MagBeads 中，讓蛋白質(zhì)與其充分結(jié)合，然后可從磁珠中洗脫分離出目的蛋白。
與傳統(tǒng)柱層析方法相比，使用磁珠純化His標(biāo)簽蛋白無(wú)需控制上樣流速和多次離心樣品，也不需要昂貴的層析和離心設(shè)備。樣品與磁珠的結(jié)合以及目的蛋白與磁珠的分離簡(jiǎn)單、快捷，而且更容易實(shí)現(xiàn)高通量、自動(dòng)化的蛋白純化方法。適合科研和工業(yè)客戶高通量地進(jìn)行標(biāo)簽蛋白的純化。
該磁珠以4%瓊脂糖凝膠為基質(zhì)通過(guò)化學(xué)方法偶聯(lián)了四配位的氮川三乙酸(NTA)，螯合鎳離子(Ni2+)后，可以形成非常穩(wěn)定的八面體結(jié)構(gòu)，鎳離子處于八面體的中心，這樣的結(jié)構(gòu)很有效的保護(hù)了鎳離子免受小分子的進(jìn)攻更加穩(wěn)定。
His標(biāo)簽蛋白純化磁珠廣泛適用于細(xì)菌、酵母、昆蟲和哺乳動(dòng)物細(xì)胞等分泌或胞內(nèi)表達(dá)的可溶性標(biāo)簽蛋白，也可用于變性蛋白的純化（包涵體需變性后再進(jìn)行純化）。
產(chǎn)品性質(zhì)
基質(zhì) | 磁性瓊脂糖微球 |
載量 | > 40 mg 6×His-tagged protein/mL磁珠 |
粒徑 | 30-100 μm |
磁珠濃度 | 磁珠懸浮于保護(hù)液中，含量為20%（V/V) |
儲(chǔ)存緩沖液 | 含20%乙醇的1×PBS |
運(yùn)輸和保存方法
冰袋運(yùn)輸。4℃長(zhǎng)期儲(chǔ)存，有效期2年。
注意事項(xiàng)
1.磁珠保存過(guò)程中避免冷凍、干燥和高速離心等操作。
2.磁珠使用前，請(qǐng)充分震蕩，使磁珠保持均勻的懸浮狀態(tài)。
3.使用過(guò)的磁珠重復(fù)使用時(shí)，建議純化同一種蛋白，純化不同種蛋白時(shí)，建議使用新磁珠，以避免交叉污染。
4.為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
5.本產(chǎn)品僅作科研用途！
使用方法
一、緩沖液配制
1.緩沖液使用基本原理：低咪唑上樣，高咪唑洗脫，或者高pH上樣，低pH洗脫。
2.Buffer在使用前最好用0.22 μm或者0.45 μm濾膜過(guò)濾除菌。
3.可溶性蛋白純化所需緩沖液及配方詳見(jiàn)附表1，包涵體蛋白純化所需緩沖液及配方詳見(jiàn)附表2和表3。
二、樣本制備
2.1細(xì)菌或酵母表達(dá)的蛋白
1）將培養(yǎng)液轉(zhuǎn)移到離心杯中，7,000 rpm (7,500 xg)，離心15 min收集菌體，然后按照菌體：Lysis Buffer=1: 10 （W/V）加入Lysis Buffer，加入終濃度為1 mM的PMSF。同時(shí)可加入其他蛋白酶抑制劑，但不能影響目的蛋白與磁珠的結(jié)合。
2）加入,使其工作濃度為0.2-0.4 mg/mL。如果表達(dá)的宿主細(xì)胞內(nèi)含pLysS或pLysE，可以不加。
3）將菌體沉淀懸浮起來(lái)，（如果菌液濃度高，也可考慮加入10 μg/mL RNase A和5 μg/mL DNase I）,混勻，冰上超聲破碎細(xì)胞，至菌液基本保持澄清。
4）將澄清的破碎液轉(zhuǎn)移至離心管中，10,000 rpm (15,000 xg)，4℃離心20-30 min。 取上清，置于冰上備用或-20℃保存。
2.2酵母、昆蟲和哺乳細(xì)胞分泌表達(dá)可溶性蛋白
1）將細(xì)胞培養(yǎng)液轉(zhuǎn)移至離心杯中，5,000 rpm (3,800 xg)，離心10 min，收集菌體得上清，如上清中不含EDTA、和還原劑等物質(zhì)，即可直接使用；如含有EDTA、和還原劑等物質(zhì)，需用Lysis Buffer透析才能上樣。
2）對(duì)于大量體積的上清，需加入硫酸銨沉淀濃縮后，然后用Lysis Buffer透析后才能上樣。
2.3包涵體蛋白純化（變性條件）
1）將培養(yǎng)液轉(zhuǎn)移到離心杯中，7,000 rpm (7,500 xg)，離心15 min收集菌體，去掉上清。
2）按照菌體：Lysis buffer（不含8M尿素）=1:10 (W/V)將菌體懸浮起來(lái)，混勻，冰浴超聲破碎。
3）將破碎液轉(zhuǎn)移至離心管中，10,000 rpm (15,000 xg)，4℃離心20-30 min。去掉上清，步驟2和3可以重復(fù)一次。
4）按照菌體：Lysis buffer（含8M尿素）=1:10 (w/v)的比例將包涵體充分懸浮。
三、磁珠預(yù)處理
3.1 準(zhǔn)備
將磁珠充分混勻，使用移液器取適量的磁珠懸浮液，置于離心管中，將離心管置于磁力架上，待溶液變澄清后，用移液器吸棄上清。
3.2平衡
將離心管從磁力架上取下來(lái)，加入與懸浮液等體積的Lysis Buffer，使用槍頭反復(fù)吹打5-10次，將離心管置于磁分離器上，待溶液變澄清后，用移液器吸棄清液，重復(fù)洗滌2次。
四、磁珠與目的蛋白結(jié)合
4.1 結(jié)合
將含有目的蛋白的上清液加入到處理好的磁珠中，顛倒混勻。將離心管置于混合儀上，室溫旋轉(zhuǎn)孵育30 min （如果目標(biāo)蛋白不穩(wěn)定，建議2-8℃下孵育1 h）。
4.2 洗雜
將離心管置于磁分離器，待溶液變澄清后，用移液器移出上清液，保留上清液，以備取樣檢測(cè)。向離心管中加入2倍懸浮液體積的Wash Buffer，使用槍頭反復(fù)吹打5-10次，將離心管置于磁分離器上，待溶液變澄清后，用移液器吸取上清液，保留，以備取樣檢測(cè)。重復(fù)上述步驟2次。
4.3 洗脫
建議將3-5倍磁珠體積的Elution Buffer加入到離心管中，使用移液器輕輕吹打3-5次，混勻，將離心管置于磁分離器上，待溶液變澄清后，用移液器吸取上清液，即為目的蛋白。如有需要，可以重復(fù)上述步驟1次，以提高目的蛋白的回收量。用戶也可根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果調(diào)整緩沖液中的咪唑濃度。
五、磁珠保存
1. 向裝有磁珠的離心管中加入1 mL Elution Buffer，用移液器反復(fù)吹打3-5次，使磁珠充分懸浮，然后置于磁分離器，吸棄上清，重復(fù)該操作2次。
2. 向離心管中加入1 mL去離子水，用移液器反復(fù)吹打3-5次，使磁珠充分懸浮，然后置于磁分離器，吸棄上清，重復(fù)該操作2次。
3. 向離心管中加入含20%乙醇的1×PBS，使總體積為磁珠初始懸浮液體積，保存于2-8 ℃。
六、SDS-PAGE 檢測(cè)
將純化得到的樣品（包括原始樣品、流出組分、洗雜及洗脫組分）使用SDS-PAGE檢測(cè)純化效果。
表1. 可溶性His標(biāo)簽蛋白純化所需緩沖液及配方
緩沖液名稱 | 配方 | 配制1L溶液所需各種試劑量 |
Lysis Buffer | 50 mM NaH2PO4 300 mM NaCl 10 mM imidazole NaOH調(diào)pH至8.0，0.22 µm或0.45 µm過(guò)濾除菌 | NaH2PO4 ·2H2O 7.80 g NaCl 17.54 g Imidazole 0.68 g
|
Wash Buffer | 50 mM NaH2PO4 300 mM NaCl 20 mM imidazole NaOH調(diào)pH至8.0，0.22 µm或0.45 µm過(guò)濾除菌 | NaH2PO4 ·2H2O 7.80 g NaCl 17.54 g Imidazole 1.36 g
|
Elution Buffer | 50 mM NaH2PO4 300 mM NaCl 250 mM imidazole NaOH調(diào)pH至8.0，0.22 µm或0.45 µm過(guò)濾除菌 | NaH2PO4 ·2H2O 7.80 g NaCl 17.54 g Imidazole 17.0 g
|
以上緩沖液適用于多數(shù)His標(biāo)簽蛋白的純化，客戶也可根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果調(diào)整緩沖液中的咪唑濃度。
表2. 包涵體His標(biāo)簽蛋白純化所需緩沖液及配方,pH洗脫方式
緩沖液名稱 | 配方 | 配制1L溶液所需各種試劑量 |
Lysis Buffer | 8 M Urea 100 mM NaH2PO4 100 mM Tris·HCl 鹽酸溶液調(diào)pH至8.0，0.22 µm或0.45 µm過(guò)濾除菌 | Urea 480.50 g NaH2PO4 ·H2O 13.80 g Tris·Cl 12.10 g
|
Wash Buffer | 8 M Urea 100 mM NaH2PO4 100 mM Tris·HCl 鹽酸溶液調(diào)pH至6.3，0.22 µm或0.45 µm過(guò)濾除菌 | Urea 480.50 g NaH2PO4 ·H2O 13.80 g Tris·Cl 12.10 g |
Elution Buffer | 8 M Urea 100 mM NaH2PO4 100 mM Tris·HCl 鹽酸溶液調(diào)pH至4.5，0.22 µm或0.45 µm過(guò)濾除菌 | Urea 480.50 g NaH2PO4 ·H2O 13.80 g Tris·Cl 12.10 g |
表3. 包涵體His標(biāo)簽蛋白純化所需緩沖液及配方,咪唑洗脫方式
緩沖液名稱 | 配方 | 配制1L溶液所需各種試劑量 |
Lysis Buffer | 8 M Urea 50 mM NaH2PO4 300 mM NaCl 10 mM imidazole NaOH調(diào)pH至8.0，0.22 µm或0.45 µm過(guò)濾除菌 | Urea 480.50 g NaH2PO4 ·2H2O 7.80 g NaCl 17.54 g Imidazole 0.68 g |
Wash Buffer | 8 M Urea 50 mM NaH2PO4 300 mM NaCl 20 mM imidazole NaOH調(diào)pH至8.0，0.22 µm或0.45 µm過(guò)濾除菌 | Urea 480.50 g NaH2PO4 ·2H2O 7.80 g NaCl 17.54 g Imidazole 1.36 g |
Elution Buffer | 8 M Urea 50 mM NaH2PO4 300 mM NaCl 250 mM imidazole NaOH調(diào)pH至8.0，0.22 µm或0.45 µm過(guò)濾除菌 | Urea 480.50 g NaH2PO4 ·2H2O 7.80 g NaCl 17.54 g Imidazole 17.0 g |
表4. Ni NTA Magarose Beads試劑耐受情況
試劑種類 | 濃度 |
還原劑 | 5 mM DTE 1 mM DTT 20 mM β-mercaptoethanol 5 mM TCEP 10 mM reduced glutathione |
變性劑 | 8 M urea 6 M Gua-HCl |
去污劑 | 2% TritonTM X-100, nonionic 2% TweenTM20, nonionic 2% NP-40, nonionic 2% Cholate, anionic 1% CHAPS, zwitterionic |
其他類 | 500 mM imidazole 20% ethanol 50% glycerol 100 mM Na2SO4 1.5 M NaCl 1 mM EDTA 60 mM citrate |
HB220315
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