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Rapid Silver Stain Kit for Nucleic Acid

快速核酸銀染試劑盒 Silver Stain Kit

產(chǎn)品信息

產(chǎn)品描述

分子生物學實驗中，常利用銀染的方法顯示聚丙烯酰胺凝膠或者瓊脂糖凝膠中的核酸條帶，其檢測原理是：銀離子(Ag⁺）可與核酸形成穩(wěn)定的復合物，隨后Ag⁺ 在堿性環(huán)境下被還原劑如甲醛還原成銀顆粒，后者通過顯色可把核酸電泳條帶染成黑褐色。該方法檢測靈敏度比EB高達200倍，常用于檢測SSR標記、SNP標記等。

常規(guī)的銀染方法由固定、氧化、染色、顯影、終止等若干個步驟組成，操作十分繁瑣，尤其不適用于大批量實驗。而本品的推出可大大改善上述問題，主要體現(xiàn)在：1）超快速，整個過程僅需20分鐘；2）操作簡單，只有染色和顯影兩步；3）靈敏度跟常規(guī)方法相當，比EB高200倍，能檢測到10ng的DNA條帶。4）兩個成分都是現(xiàn)用現(xiàn)配，可重復性好。

按照本方案提供的配制方法，共可配制試劑A和試劑B分別1000ml。

產(chǎn)品組分

運輸與儲存

常溫運輸和保存即可。有效期1年。

注意事項

1）為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

2）銀染主要出現(xiàn)在PAGE膠的表面，因此該方法更適合用于薄膠（0.5-0.75mm）的檢測。

3）染色過程中，緩慢的振蕩是必要的，一般選擇40-60 rpm。

4）凝膠表面的裂紋多是由于壓力、手印及表面干燥所致，所以全程操作中都應帶手套。

5）PAGE凝膠背景呈均一的黑色多是水中的雜質(zhì)引起的，所以溶液的配制應使用電導率小于1 μS的去離子水。

6） 如果染色后有呈灰塵或煙霧狀灰色或棕色的沉淀出現(xiàn)在凝膠表面，可能是幾步漂洗過程不夠*，或染色過程溫度太低。

7）較深的銀染背景多是丙烯酰胺中的雜質(zhì)所致。

8）室溫操作時，溫度的波動往往會干擾銀染的效果，恒溫水浴可以解決這個問題。

9）染色使用的玻璃器皿必須非常干凈，用酸浸泡可以滿足要求。

10）銀染應盡快照相，隨著時間延長，蛋白條帶會變淺，而背景會加深。

11）影響硝-酸銀染色效果的因素很多，其使用容器的材質(zhì)也是一個非常重要的因素。通常玻璃平皿是的銀染容器，其化學性質(zhì)極其穩(wěn)定，幾乎不與銀染試劑中的任何成分發(fā)生反應，且不具有吸附染料的特性。其次是醫(yī)用搪瓷盤，瓷釉為無機玻璃質(zhì)材料，能耐各種濃度的無機酸(包括強氧化性酸)、有機酸、弱堿和強有機溶劑，但不耐酸、堿介質(zhì)交替使用，而常規(guī)銀染法就是酸堿介質(zhì)交替使用，因此搪瓷盤銀染效果不如玻璃平皿。塑料種類較多，如果塑料是由含氨基官能團的有機物（脲、三聚氰胺或苯代三聚氰胺）與醛類（主要是甲醛）化合物經(jīng)縮聚反應而得，則這種塑料會在堿性溶液中與有強還原作用的甲醛發(fā)生反應，進而使甲醛消耗，減弱銀離子與蛋白的結(jié)合，降低顯色敏感度和顯色速度。

操作方法

1 配制試劑A（以100ml為例）

所需要配制的試劑A（即染色液）的體積跟PAGE膠的大小相關(guān)，一般的mini-PAGE膠需要20-30mL。本方案以配制100mL試劑A為例進行詳述，請根據(jù)具體凝膠大小，確定實際所需染色液用量，再按比例改變各組分用量。

以100ml試劑A為例，在一干凈燒杯中加入下列組分攪拌混勻即可。試劑A需要新鮮配制。

2 配制試劑B（以100ml為例）

所需要配制的試劑B（即顯色液）的體積跟PAGE膠的大小相關(guān)，一般的mini-PAGE膠需要20-30mL。本方案以配制100ml試劑B為例進行詳述，請根據(jù)具體凝膠大小，確定實際所需試劑B用量，再按比例改變各組分用量。

以100ml 為例，在一干凈燒杯中加入下列組分攪拌混勻即可。試劑B需要新鮮配制。

3 染色

1）PAGE電泳結(jié)束后，將PAGE膠轉(zhuǎn)移到裝有去離子水的瓷盤中，進行漂洗，2min/次，共2次。

2）將PAGE膠轉(zhuǎn)移到適當體積的試劑A，使試劑A在輕柔搖晃過程中能夠淹沒PAGE膠。室溫染色10min。

3）倒掉試劑A，用去離子水快速漂洗2次，每次30秒。

4）將PAGE膠轉(zhuǎn)移到適當體積的試劑B，使試劑B在輕柔搖晃過程中能夠淹沒PAGE膠。室溫搖晃直到顏色顯現(xiàn)，一般需要10min左右。

5）將PAGE膠置于適當背景下照相。

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