臺(tái)盼藍(lán)染色法細(xì)胞活力檢測(cè)試劑盒

臺(tái)盼藍(lán)（Trypan Blue），一種偶氮、親水性酸性藍(lán)色染料，可透過死亡細(xì)胞和垂死細(xì)胞的細(xì)胞膜，將其染成藍(lán)色，而活細(xì)胞由于其細(xì)胞膜的完整性，可將臺(tái)盼藍(lán)排斥在外，因此，通過顏色的變化即可將活細(xì)胞（活細(xì)胞呈透明無色）和死細(xì)胞鑒別開來，基于此原理，本品廣泛用于細(xì)胞活性水平的常規(guī)評(píng)估。臺(tái)盼藍(lán)還可染色膠原和淀粉樣蛋白。臺(tái)盼藍(lán)與蛋白結(jié)合形成的復(fù)合物可發(fā)出紅色熒光。另外，臺(tái)盼藍(lán)（合適濃度）還常用來淬滅細(xì)胞表面的自熒光或者其他熒光信號(hào)。

臺(tái)盼藍(lán)染色法細(xì)胞活力檢測(cè)試劑盒各組分均以無菌形式提供，可直接用于細(xì)胞實(shí)驗(yàn)。按照單次使用量0.1ml，40208ES60和40208ES76分別可供檢測(cè)100次和500次。

產(chǎn)品組分

運(yùn)輸和保存方法

室溫運(yùn)輸和保存即可，二年有效。

注意事項(xiàng)

1）細(xì)胞計(jì)數(shù)前需對(duì)細(xì)胞進(jìn)行充分的清洗，因?yàn)榧?xì)胞對(duì)血清蛋白具有非常高的親和力，殘留血清蛋白會(huì)導(dǎo)致較暗的染色背景。

2）臺(tái)盼藍(lán)對(duì)人體有害，請(qǐng)注意小心防護(hù)。

3）為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

使用方法

1）對(duì)于懸浮細(xì)胞，離心收集細(xì)胞，對(duì)其充分清洗后，加入適量細(xì)胞重懸液重懸細(xì)胞制成單細(xì)胞懸液；對(duì)于貼壁細(xì)胞，先用胰|酶消化細(xì)胞，再按照懸浮細(xì)胞的方法制備單細(xì)胞懸液。

2）取0.1ml單細(xì)胞懸液，按照1:1比例與0.1ml 0.4%臺(tái)盼藍(lán)染色液充分混勻，室溫染色3~10min。

【注】：因臺(tái)盼藍(lán)具有細(xì)胞毒性，染色時(shí)間過久會(huì)導(dǎo)致部分死細(xì)胞染色，干擾計(jì)數(shù)。通常染色3min即可。

3）取少量上述染色細(xì)胞加入計(jì)數(shù)板，于顯微鏡低倍鏡下計(jì)數(shù)，分別計(jì)算著色細(xì)胞（即損傷細(xì)胞和死細(xì)胞）和總細(xì)胞。

【注1】：用移液槍加染色細(xì)胞時(shí)，沿著蓋玻片的邊緣輕輕加液使其*覆蓋住整個(gè)小室。不可過量加液或者不足量。

【注2】：1mm²方格內(nèi)細(xì)胞數(shù)通常控制在20-50 cells，當(dāng)細(xì)胞數(shù)超過200個(gè)，需重新調(diào)整稀釋倍數(shù)。

4）按照以下公式來計(jì)算細(xì)胞數(shù)目和活細(xì)胞百分比，

a，計(jì)算每ml細(xì)胞數(shù)目：Cells/ml=1mm²大方格內(nèi)的平均細(xì)胞數(shù)×稀釋倍數(shù)×10⁴；【注】：此時(shí)的稀釋倍數(shù)為：步驟2所取的單細(xì)胞懸液與臺(tái)盼藍(lán)染色液混合后的稀釋倍數(shù)

b，總細(xì)胞數(shù)目：Total cells=（Cells/ml）×zui初制備單細(xì)胞懸液的總體積

c，細(xì)胞活力值：Viability（%）=（總細(xì)胞數(shù)-總著色細(xì)胞數(shù)）/總細(xì)胞數(shù)×100

【注】：通常情況，健康的對(duì)數(shù)期培養(yǎng)細(xì)胞，活細(xì)胞至少占到95%。

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