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HB170817

Hieff NGS^TM RNA Cleaner

產(chǎn)品信息

產(chǎn)品描述

Hieff NGS^TM RNA Cleaner是翊圣生物自主研發(fā)的專門用于RNA純化的磁珠，本產(chǎn)品利用*的磁珠與緩沖液系統(tǒng)，可以特異性地吸附RNA，有效去除蛋白、鹽離子和其它雜質(zhì)。常用于純化去除rRNA后的總RNA樣本，體外轉(zhuǎn)錄的RNA產(chǎn)物，RNA標(biāo)記產(chǎn)物以及合成的RNA等。純化后的RNA適用于RNA文庫(kù)構(gòu)建、RT-PCR、qRT-PCR、芯片分析、Northern Blot和RNAi等實(shí)驗(yàn)。

運(yùn)輸與保存方法

冰袋運(yùn)輸。2-8℃保存，效期一年。避免冷凍！

使用方法

所需額外試劑

100% 乙醇，Nuclease-free水，磁力架，Nuclease-free離心管。

實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備

將RNA clean beads 從4 ℃取出，平衡至室溫（約30 min）。

純化流程

RNA純化過(guò)程如圖1所示，具體操作參考以下說(shuō)明。

圖1 RNA純化流程

1. 樣本稀釋：在一個(gè)Nuclease-free PCR管中，用Nuclease-free水將0.5-5 μg總RNA稀釋至50 μL。

2. 磁珠結(jié)合：顛倒或渦旋振蕩混勻磁珠，吸取2×磁珠懸液（100 μL）加入至50 μL 的RNA樣品中，用移液器吹打6次，

使其充分混勻。室溫孵育5 min，使RNA與磁珠*結(jié)合。

3. 分離：將上述孵育后的樣品置于磁力架上5 min，待溶液澄清后，小心移除上清。

4. 漂洗：保持樣品置于磁力架上，加入200 μL新鮮配制的80%乙醇，漂洗磁珠，室溫孵育30 s，小心移除上清。

【注】：1）漂洗時(shí)使用的80%乙醇需要使用Nuclease-free水新鮮配制，防止引入RNase酶導(dǎo)致RNA降解。

2）建議在該輪漂洗后，室溫靜置2 min，再進(jìn)行下一輪漂洗，有助于提升RNA回收效率。

5. 再次漂洗：重復(fù)步驟4，共漂洗2次。

6. 磁珠干燥：保持樣品始終處于磁力架上，開蓋空氣干燥磁珠5 min。

【注】：磁珠開蓋晾干時(shí)要避免過(guò)分干燥，如果磁珠出現(xiàn)龜裂，則提示磁珠過(guò)分干燥，此時(shí)RNA的洗脫效率會(huì)降低。

7. 洗脫：將樣品從磁力架上取出，加入21 μL Nuclease-free水，用移液器吹打6次以充分混勻，室溫靜置5 min。

8. 樣本轉(zhuǎn)移：將樣品置于磁力架5 min，待溶液澄清后，小心轉(zhuǎn)移上清20 μL至一個(gè)新的Nuclease-free PCR管中。

【注】：建議轉(zhuǎn)移上清時(shí)留2-3 μL液體，以免吸到磁珠影響后續(xù)實(shí)驗(yàn)。得到的RNA極不穩(wěn)定，建議盡快進(jìn)入后續(xù)實(shí)驗(yàn)。若

要保存，請(qǐng)置于-80℃保存。

注意事項(xiàng)

1）磁珠使用前務(wù)必要回溫至室溫，并充分混勻，否則可能影響樣品的回收效率。

2）操作過(guò)程要嚴(yán)格保證無(wú)RNase酶和核酸污染。

3）80%乙醇需現(xiàn)用現(xiàn)配，否則將影響回收效率。

4）本產(chǎn)品和其他試劑配套使用時(shí)，請(qǐng)按照具體實(shí)驗(yàn)說(shuō)明來(lái)進(jìn)行操作。

5）為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

結(jié)果展示：

使用總RNA純化磁珠純化前后，RNA樣品qRT-PCR Ct值變化

【注】：使用Hieff NGS^TM RNA Cleaner可以有效去除影響RT-PCR的抑制劑，讓檢測(cè)結(jié)果更加真實(shí)。

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