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60224ES03Hygromycin B (50 mg/mL) 潮霉素B
參考價: 面議
具體成交價以合同協(xié)議為準(zhǔn)
  • 60224ES03 產(chǎn)品型號
  • Yeasen/翌圣生物 品牌
  • 生產(chǎn)商 廠商性質(zhì)
  • 上海市 所在地

訪問次數(shù):809更新時間:2019-07-05 10:33:54

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產(chǎn)品簡介
供貨周期 現(xiàn)貨 規(guī)格 1g
貨號 60224ES03 應(yīng)用領(lǐng)域 醫(yī)療衛(wèi)生,生物產(chǎn)業(yè)
潮霉素B(Hygromycin B)是由吸水鏈霉菌(Streptomyces hygroscopicus)代謝產(chǎn)生的一種氨基糖苷類抗生素,通過干擾70S核糖體易位和誘導(dǎo)對mRNA模板的錯讀而抑制蛋白合成,從而殺死原核(如細(xì)菌)、真核(如酵母菌,真菌)和高等哺乳動物真核細(xì)胞。
產(chǎn)品介紹

產(chǎn)品描述
 

潮霉素BHygromycin B)是由吸水鏈霉菌(Streptomyces hygroscopicus)代謝產(chǎn)生的一種氨基糖苷類抗生素,通過干擾70S核糖體易位和誘導(dǎo)對mRNA模板的錯讀而抑制蛋白合成,從而殺死原核(如細(xì)菌)、真核(如酵母菌,真菌)和高等哺乳動物真核細(xì)胞。

大腸桿菌( Escherichia coli.)來源的潮霉素抗性基因(hyghph),編碼潮霉素B磷酸轉(zhuǎn)移酶,將潮霉素B轉(zhuǎn)化成不具有生物活性的磷酸化產(chǎn)物,從而起到解毒作用。針對這一原理,潮霉素B是一種非常有用的選擇性標(biāo)記,用來篩選和維持培養(yǎng)成功轉(zhuǎn)染潮霉素抗性基因的原核或者真核細(xì)胞。另外,由于作用模式的差異,常與G418 (GeneticinTM)Zeocin™ Blasticidin S聯(lián)合使用進(jìn)行雙抗性陽性細(xì)胞株的選擇。潮霉素B還能用作抗病毒劑,因其選擇性滲透進(jìn)入病毒感染增強(qiáng)通透性的細(xì)胞,且具有抑制翻譯的功效。還可混合入動物飼料中起到驅(qū)蟲功能。

本品是無菌的潮霉素B溶液(50 mg/mL in PBS buffer),可直接用培養(yǎng)液稀釋使用。


產(chǎn)品性質(zhì)
 

CAS號(CAS NO.

31282-04-9

分子式(Formula)

C20H37N3O13

分子量(Molecular   Weight)

527.52 g/mol

純度(Purity)

>90% by HPLC

活力(Potency)

≥1050 U/mg

結(jié)構(gòu)式(Structure)

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運輸和保存方法
 

冰袋運輸。4℃或-20℃保存,避免反復(fù)凍融。有效期2年。


注意事項

1. 潮霉素B的抗性基因(hyghph)除了來自E. Coli.外,還發(fā)現(xiàn)于其他的菌株,包括Streptomyces hygroscopicusKlebsiella pneumoniae。

2. 本品為有毒化合物,避免與皮膚和眼睛接觸,請小心操作。

3. 為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。


使用方法
 

1. 常用篩選濃度
 

潮霉素B用來篩選穩(wěn)轉(zhuǎn)株的工作濃度需要根據(jù)細(xì)胞類型,培養(yǎng)基,生長條件和細(xì)胞代謝率而變化,推薦使用濃度為50-1000 μg/mL。對于*次使用的實驗體系建議通過建立殺滅曲線(kill curve),即劑量反應(yīng)性曲線,來確定蕞佳篩選濃度。

一般而言,哺乳動物細(xì)胞50-500 μg/mL;細(xì)菌/植物細(xì)胞20-200 μg/mL;真菌300-1000μg/mL。


2. 殺滅曲線的建立
 

【注意事項】:

為了篩選得到穩(wěn)定表達(dá)目的蛋白的細(xì)胞株,需要確定能夠殺死未轉(zhuǎn)染宿主細(xì)胞的抗生素低濃度,可通過建立殺滅曲線(劑量反應(yīng)曲線)來實現(xiàn),至少選擇5個濃度。

1)*天:未轉(zhuǎn)化的細(xì)胞按照20-25%的細(xì)胞密度鋪在合適的培養(yǎng)板上,37℃,CO2培養(yǎng)過夜。

【注】:對于需要更高密度來檢測活力的細(xì)胞,可增加接種量。

2)根據(jù)細(xì)胞類型,設(shè)定合適范圍內(nèi)的濃度梯度。以哺乳動物細(xì)胞為例,可設(shè)定50,100,250,500,750,1000 μg/mL。先用去離子水或者PBS buffer按照1:10的比例將母液稀釋到5 mg/mL,然后按照下表稀釋到相應(yīng)濃度的工作液。

終濃度(μg/mL

培養(yǎng)基體積(mL)

5 mg/mL潮霉素B加入體積(mL)

50

9.9

0.1

100

9.8

0.2

250

9.5

0.5

500

9.0

1.0

750

8.5

1.5

1000

8.0

2.0

3)第二天:替換舊的培養(yǎng)基,換用新鮮配制的含有相應(yīng)濃度藥物的培養(yǎng)基。每個濃度做三個平行孔。

4)接下來每3-4天更換新的含藥物培養(yǎng)基。
5)按照固定的周期(如每2天)進(jìn)行活細(xì)胞計數(shù)來確定阻止未轉(zhuǎn)染細(xì)胞生長的恰當(dāng)濃度。選擇在理想的天數(shù)(通常是7-10天)內(nèi)能夠殺死絕大多數(shù)細(xì)胞的低濃度為穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞篩選用的工作濃度。

3. 穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞的篩選

1)轉(zhuǎn)染48 h后,用含有適當(dāng)濃度的潮霉素B篩選培養(yǎng)基來傳代細(xì)胞(直接傳代或者稀釋后傳代)。
】:細(xì)胞處于活躍分裂狀態(tài)時抗生素的殺傷效果*。則當(dāng)細(xì)胞過于稠密,其效率會降低。為了得到較好的篩選效果,*將細(xì)胞稀釋至豐度不超過25%

2)每隔3-4天更換含有藥物的篩選培養(yǎng)液。

3)篩選7天后觀察并評估細(xì)胞克?。洌┑男纬汕闆r。集落的形成可能還需要一周或者更多的時間,這取決于宿主細(xì)胞類型,轉(zhuǎn)染,以及篩選效果。

4)挑取并轉(zhuǎn)移5-10個抗性克隆于35 mm細(xì)胞培養(yǎng)板,繼續(xù)用含藥物的篩選培養(yǎng)液維持培養(yǎng)7天。

5)之后更換正常培養(yǎng)基培養(yǎng)即可。


相關(guān)產(chǎn)品推薦:
 

產(chǎn)品名稱          

產(chǎn)品編號

規(guī)格

價格(元)

*(元)

Hygromycin B 潮霉素B

60225ES03

1 g

719.00

419.00

Hygromycin B 潮霉素B

60225ES10

10 g

6599.00

3999.00



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