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翌圣生物科技（上海）股份有限公司
初級(jí)會(huì)員·13年
FastCut BstBI快速限制性內(nèi)切酶
| 參考價(jià): | 面議 |
具體成交價(jià)以合同協(xié)議為準(zhǔn)- 產(chǎn)品型號(hào)
- Yeasen/翌圣生物 品牌
- 生產(chǎn)商 廠商性質(zhì)
- 上海市 所在地
訪問(wèn)次數(shù)：383更新時(shí)間：2025-02-07 13:35:27
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產(chǎn)品簡(jiǎn)介
| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 150T |
|---|---|---|---|
| 貨號(hào) | 15050ES60 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 醫(yī)療衛(wèi)生,化工,生物產(chǎn)業(yè) |
產(chǎn)品介紹
產(chǎn)品信息
產(chǎn)品名稱 | 產(chǎn)品編號(hào) | 規(guī)格 | 價(jià)格（元） |
FastCut BstBI快速限制性內(nèi)切酶 | 15050ES60 | 100 T | 165.00 |
產(chǎn)品描述
FastCut BstBI快速限制性內(nèi)切酶是通過(guò)基因工程重組技術(shù)，可在5~15 min內(nèi)精確完成DNA切割的快速限制性內(nèi)切酶，適用于快速切割質(zhì)粒DNA、PCR產(chǎn)物、基因組DNA等。FastCut™系列快速內(nèi)切酶共用一種酶切緩沖液，從而簡(jiǎn)化了酶切反應(yīng)體系，另外，有良好的酶活冗余度，可輕松處理底物過(guò)量或困難模板的酶切。
產(chǎn)品組分
運(yùn)輸與保存方法
冰袋運(yùn)輸。-20°C保存，有效期2年。
識(shí)別位置
5'-TT↓CGAA-3'
3'-AAGC↑TT-5'
推薦反應(yīng)條件
1× FastCut™ 緩沖液；
37°C孵育。
失活條件
80°C孵育20 min。
注意事項(xiàng)
1）3 h孵育未表現(xiàn)星號(hào)活性，延時(shí)酶切可能出現(xiàn)星號(hào)活性；
2）受CpG甲基化影響，序列*重疊，剪切阻斷；
3）為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并佩戴一次性手套操作；
4）本產(chǎn)品僅作科研用途！
質(zhì)量控制
1. 功能活性檢測(cè)：最適反應(yīng)溫度下，在20 μL反應(yīng)體系中，1 μL酶能夠在15 min內(nèi)*消化1 μg λ DNA。
2. 超長(zhǎng)時(shí)間孵育檢測(cè)：最適反應(yīng)溫度下，將1 μL酶與1 μg λ DNA共孵育3 h，未檢測(cè)到其他核酸酶污染或星號(hào)活性引起的底物非特異性降解，但延長(zhǎng)孵育時(shí)間可能出現(xiàn)星號(hào)活性。
3. 酶切-連接-再酶切檢測(cè)：最適反應(yīng)溫度下，使用1 μL酶消化底物，回收酶切產(chǎn)物，在22°C下使用適量T4 DNA連接酶可以將酶切產(chǎn)物重新連接，將連接產(chǎn)物再次回收后，使用相同的內(nèi)切酶可以重新切開(kāi)連接產(chǎn)物。
4. 非特異性內(nèi)切酶活性檢測(cè)：最適反應(yīng)溫度下，將1 μL酶與1 μg超螺旋質(zhì)粒DNA共同孵育4 h后，使用瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)，質(zhì)粒DNA仍然處于超螺旋狀態(tài)。
5. 藍(lán)白斑檢測(cè)：將含有單一lacZα基因的載體以1 μL酶消化，重新連接后轉(zhuǎn)化入大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞，涂布在含有對(duì)應(yīng)抗生素、IPTG和X-gal的LB培養(yǎng)基平板上。連接正確的產(chǎn)物會(huì)生長(zhǎng)出藍(lán)色菌落，而連接錯(cuò)誤（即DNA末端切口不完整）的產(chǎn)物將得到白色菌落。對(duì)于FastCut™系列限制酶而言，白色菌落比例應(yīng)小于1%。
使用方法
1. DNA快速酶切流程
1）按如下建議的加樣順序配制體系反應(yīng)液（冰上操作）：
組分 | 質(zhì)粒DNA | PCR產(chǎn)物 | 基因組DNA |
ddH2O | 15 μL | 16 μL | 30 μL |
10×FastCut™ Buffer或10×FastCut™ Color Buffer | 2 μL | 3 μL* | 5 μL |
底物DNA | 2 μL（~1 μg） | 10 μL (~0.2 μg) | 10 μL (5 μg) |
FastCut™ BstBI | 1 μL | 1 μL | 5 μL |
Total | 20 μL | 30 μL | 50 μL |
*本體系指已純化后的PCR產(chǎn)物。未純化的PCR產(chǎn)物具備一定的離子強(qiáng)度，10×FastCut TM Buffer加入量可適當(dāng)減少至2 μL。若下一步進(jìn)行克隆等實(shí)驗(yàn)，酶切前需純化PCR產(chǎn)物。
2）輕柔吸打或輕彈管壁以混勻（切勿渦旋），然后瞬時(shí)離心以收集掛壁液滴。
3）37°C孵育15 min（質(zhì)粒），或15~30 min（PCR 產(chǎn)物），或30~60 min（基因組 DNA）。
4）80℃溫育 20 min 即可使酶失活，停止反應(yīng)（可選）。
2. 雙酶切或多酶切
1）每種內(nèi)切酶的用量為1 μL，并根據(jù)需要適當(dāng)擴(kuò)大反應(yīng)體系。
2）所有內(nèi)切酶的體積總和不得超過(guò)總反應(yīng)體系的1/10。
3）如果選用的幾種內(nèi)切酶的最適反應(yīng)溫度不同，應(yīng)先以最適溫度低的酶開(kāi)始酶切，再添加最適溫度較高的酶，以較高的溫度進(jìn)行孵育。
3.質(zhì)粒的擴(kuò)大反應(yīng)體系
組分 | 體積（20 μL） | 體積（20 μL） | 體積（50 μL） |
DNA | 1 μg | 2 μg | 5 μg |
FastCut™ BstBI | 1 μL | 2 μL | 5 μL |
10×FastCut™ Buffer或10×FastCut™ Color Buffer | 2 μL | 2 μL | 5 μL |
Total | 20 μL | 20 μL | 50 μL |
【注】：如果總反應(yīng)體系大于20 μL，可使用水浴、金屬浴或沙浴，并增加孵育時(shí)間。
不同DNA中的識(shí)別位點(diǎn)數(shù)
λDNA | ΦX174 | pBR322 | pUC57 | pUC18/19 | SV40 | M13mp18/19 | Adeno2 |
7 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 1 |
甲基化修飾影響
Dam | Dcm | CpG | EcoKI | EcoBI |
無(wú)影響 | 無(wú)影響 | 序列*重疊 剪切阻斷 | 無(wú)影響 | 無(wú)影響 |
不同反應(yīng)緩沖液中的活性
反應(yīng)緩沖液 | FastCut™ Buffer | Thermo Scientific FastDigest Buffer | NEB CutSmart® Buffer | Takara QuickCut™ Buffer |
活性 | 100% | 100% | 100% | 100% |
【注】：活性數(shù)據(jù)來(lái)自翌圣生物限制酶標(biāo)準(zhǔn)反應(yīng)體系下的檢測(cè)。
同裂酶
AsuII, Bpu14I, Bsp119I, BspT104I, NspV, SfuI
【注】：同裂酶對(duì)于不同的甲基化修飾也許具有不同敏感性。
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