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FastCut BstBI快速限制性內(nèi)切酶
參考價: 面議
具體成交價以合同協(xié)議為準(zhǔn)
  • 產(chǎn)品型號
  • Yeasen/翌圣生物 品牌
  • 生產(chǎn)商 廠商性質(zhì)
  • 上海市 所在地

訪問次數(shù):377更新時間:2025-02-07 13:35:27

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產(chǎn)品簡介
供貨周期 現(xiàn)貨 規(guī)格 150T
貨號 15050ES60 應(yīng)用領(lǐng)域 醫(yī)療衛(wèi)生,化工,生物產(chǎn)業(yè)
FastCut BstBI快速限制性內(nèi)切酶是通過基因工程重組技術(shù),可在5~15 min內(nèi)精確完成DNA切割的快速限制性內(nèi)切酶,適用于快速切割質(zhì)粒DNA、PCR產(chǎn)物、基因組DNA等。
產(chǎn)品介紹

產(chǎn)品信息

產(chǎn)品名稱

產(chǎn)品編號

規(guī)格

價格(元)

FastCut BstBI快速限制性內(nèi)切酶

15050ES60

100 T

165.00

產(chǎn)品描述

FastCut BstBI快速限制性內(nèi)切酶是通過基因工程重組技術(shù),可在5~15 min內(nèi)精確完成DNA切割的快速限制性內(nèi)切酶,適用于快速切割質(zhì)粒DNA、PCR產(chǎn)物、基因組DNA等。FastCut™系列快速內(nèi)切酶共用一種酶切緩沖液,從而簡化了酶切反應(yīng)體系,另外,有良好的酶活冗余度,可輕松處理底物過量或困難模板的酶切。

產(chǎn)品組分

組分編號

組分名稱

產(chǎn)品規(guī)格

15050-A

FastCut™ BstBI

100 μL

15050-B

10×FastCut™ Buffer

1 mL

15050-C

10×FastCut™ Color Buffer

1 mL

運輸與保存方法

冰袋運輸。-20°C保存,有效期2年。

識別位置

5'-TT↓CGAA-3'

3'-AAGC↑TT-5'

推薦反應(yīng)條件

1× FastCut™ 緩沖液;

37°C孵育。

失活條件

80°C孵育20 min。

注意事項

1)3 h孵育未表現(xiàn)星號活性,延時酶切可能出現(xiàn)星號活性;

2)受CpG甲基化影響,序列*重疊,剪切阻斷;

3)為了您的安全和健康,請穿實驗服并佩戴一次性手套操作;

4)本產(chǎn)品僅作科研用途!


質(zhì)量控制

1. 功能活性檢測:最適反應(yīng)溫度下,在20 μL反應(yīng)體系中,1 μL酶能夠在15 min內(nèi)*消化1 μg λ DNA。

2. 超長時間孵育檢測:最適反應(yīng)溫度下,將1 μL酶與1 μg λ DNA共孵育3 h,未檢測到其他核酸酶污染或星號活性引起的底物非特異性降解,但延長孵育時間可能出現(xiàn)星號活性。

3. 酶切-連接-再酶切檢測:最適反應(yīng)溫度下,使用1 μL酶消化底物,回收酶切產(chǎn)物,在22°C下使用適量T4 DNA連接酶可以將酶切產(chǎn)物重新連接,將連接產(chǎn)物再次回收后,使用相同的內(nèi)切酶可以重新切開連接產(chǎn)物。

4. 非特異性內(nèi)切酶活性檢測:最適反應(yīng)溫度下,將1 μL酶與1 μg超螺旋質(zhì)粒DNA共同孵育4 h后,使用瓊脂糖凝膠電泳檢測,質(zhì)粒DNA仍然處于超螺旋狀態(tài)。

5. 藍(lán)白斑檢測:將含有單一lacZα基因的載體以1 μL酶消化,重新連接后轉(zhuǎn)化入大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞,涂布在含有對應(yīng)抗生素、IPTG和X-gal的LB培養(yǎng)基平板上。連接正確的產(chǎn)物會生長出藍(lán)色菌落,而連接錯誤(即DNA末端切口不完整)的產(chǎn)物將得到白色菌落。對于FastCut™系列限制酶而言,白色菌落比例應(yīng)小于1%。

使用方法

1. DNA快速酶切流程

1)按如下建議的加樣順序配制體系反應(yīng)液(冰上操作):

組分

質(zhì)粒DNA

PCR產(chǎn)物

基因組DNA

ddH2O

15 μL

16 μL

30 μL

10×FastCut™ Buffer或10×FastCut™ Color Buffer

2 μL

3 μL*

5 μL

底物DNA

2 μL(~1 μg)

10 μL (~0.2 μg)

10 μL (5 μg)

FastCut™ BstBI

1 μL

1 μL

5 μL

Total

20 μL

30 μL

50 μL

*本體系指已純化后的PCR產(chǎn)物。未純化的PCR產(chǎn)物具備一定的離子強度,10×FastCut TM Buffer加入量可適當(dāng)減少至2 μL。若下一步進行克隆等實驗,酶切前需純化PCR產(chǎn)物。

2)輕柔吸打或輕彈管壁以混勻(切勿渦旋),然后瞬時離心以收集掛壁液滴。

3)37°C孵育15 min(質(zhì)粒),或15~30 min(PCR 產(chǎn)物),或30~60 min(基因組 DNA)。

4)80℃溫育 20 min 即可使酶失活,停止反應(yīng)(可選)。

2. 雙酶切或多酶切

1)每種內(nèi)切酶的用量為1 μL,并根據(jù)需要適當(dāng)擴大反應(yīng)體系。

2)所有內(nèi)切酶的體積總和不得超過總反應(yīng)體系的1/10。

3)如果選用的幾種內(nèi)切酶的最適反應(yīng)溫度不同,應(yīng)先以最適溫度低的酶開始酶切,再添加最適溫度較高的酶,以較高的溫度進行孵育。

3.質(zhì)粒的擴大反應(yīng)體系

組分

體積(20 μL)

體積(20 μL)

體積(50 μL)

DNA

1 μg

2 μg

5 μg

FastCut™ BstBI

1 μL

2 μL

5 μL

10×FastCut™ Buffer或10×FastCut™ Color Buffer

2 μL

2 μL

5 μL

Total

20 μL

20 μL

50 μL

【注】:如果總反應(yīng)體系大于20 μL,可使用水浴、金屬浴或沙浴,并增加孵育時間。

不同DNA中的識別位點數(shù)

λDNA

ΦX174

pBR322

pUC57

pUC18/19

SV40

M13mp18/19

Adeno2

7

0

0

0

0

0

0

1

甲基化修飾影響

Dam

Dcm

CpG

EcoKI

EcoBI

無影響

無影響

序列*重疊

剪切阻斷

無影響

無影響

不同反應(yīng)緩沖液中的活性

反應(yīng)緩沖液

FastCut™

Buffer

Thermo Scientific

FastDigest Buffer

NEB

CutSmart® Buffer

Takara

QuickCut™ Buffer

活性

100%

100%

100%

100%

【注】:活性數(shù)據(jù)來自翌圣生物限制酶標(biāo)準(zhǔn)反應(yīng)體系下的檢測。

同裂酶

AsuII, Bpu14I, Bsp119I, BspT104I, NspV, SfuI

【注】:同裂酶對于不同的甲基化修飾也許具有不同敏感性。

相關(guān)產(chǎn)品

產(chǎn)品名稱

貨號

規(guī)格

Top化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞

11801ES80

10×100 μL

DH5α化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞

11802ES80

10×100 μL

Hieff Canace® Gold 高保真DNA聚合酶

10148ES60

100 U

2×Hieff Canace® Gold 高保真酶預(yù)混液

10149ES03

1 mL

Hieff Clone® 多片段一步法快速克隆試劑盒

10912ES10

10 T

Hieff Clone® Universal One Step Cloning Kit 通用型一步法快速克隆試劑盒

10922ES20

20 T

Hieff MutTM 定點突變試劑盒

11003ES10

10 T

HB220107




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