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產品簡介
| 供貨周期 | 現貨 | 規(guī)格 | 5mL |
|---|---|---|---|
| 貨號 | 36416ES08 | 應用領域 | 醫(yī)療衛(wèi)生,生物產業(yè) |
產品介紹
產品信息
產品名稱 | 產品編號 | 規(guī)格 | 儲存 | 價格（元） |
Protein L 4FF Chromatography Column, 5 mL 蛋白L純化預裝柱，5 mL | 36416ES08 | 5 mL | 4℃ | 3528.00 |
36416ES25 | 5 mL×5 | 4℃ | 14088.00 |
蛋白L純化預裝柱，5 mL描述
天然蛋白L（Protein L）是從馬格努斯消化鏈球菌分離出來的能和免疫球蛋白特異性結合的蛋白質，分子量為36 KD。本產品使用的是基因改造后的蛋白L ，既保留了與抗體k鏈結合的特性，同時也不會影響抗體的抗原結合位點。與 protein A 和 Protein G 相比，Protein L 更能廣泛地結合各種來源及亞類的抗體，包括人、小鼠、大鼠、兔和雞，但不結合牛、山羊或綿羊來源的免疫球蛋白。
Protein L Agarose Resin 4FF是用于分離和純化單克隆抗體的通用性親和層析介質，產品以高度交聯(lián)的瓊脂糖凝膠為基質，重組Protein L為配基，具有很高的物理化學穩(wěn)定性，可以在相對較高的流速下進行抗體的純化，適用于工業(yè)客戶。利用本產品經過一步親和層析，可從腹水、血清和培養(yǎng)液等樣品中得到高純度的抗體，使用方便，應用廣泛。
本品Protein L 4FF Chromatography Column，1mL是一種裝填了Protein L Agarose Resin 4FF的中壓預裝柱，規(guī)格5mL，預裝柱具有標準接口，可以適配商品化的各類中壓色譜系統(tǒng)，如?KTA 等，方便客戶操作。
產品性質
基質（Matrix） | 高度交聯(lián)的4%瓊脂糖微球 |
配體（Ligand） | 重組蛋白L |
孔徑（Bead size） | 45-165 µm |
最大流速（Flowmax） | 0.3 MPa,3 bar |
儲存緩沖液（Buffer） | 含20%乙醇的1×PBS |
載量（Capacity） | ＞30 mg human IgG/mL基質 |
pH范圍（pH range） | 3-10 |
運輸與保存方法
冰袋運輸。4℃保存，2年有效。
需準備試劑
【注】：建議以下緩沖液在使用前用0.22 μm或0.45 μm濾膜過濾。
結合/洗雜緩沖液：0.15 M NaCl, 20 mM Na2HPO4, pH 7.0
洗脫緩沖液：0.1 M甘an酸，pH 3.0
中和液：1 M Tris-HCl，pH 8.5
使用方法
【注】上柱之前要確保樣品溶液有合適的離子強度和pH值，可以用結合/洗雜緩沖液對血清樣品、腹水或細胞培養(yǎng)液稀釋，或者樣品用結合/洗雜緩沖液透析。
1樣品純化（以Akta系統(tǒng)為例）
1）準備：將泵管道中注滿去離子水。去掉上塞子，將層析柱連接至色譜系統(tǒng)中。再折斷下口，將預裝柱接到色譜系統(tǒng)中，并旋緊。
2）清洗：3-5倍柱體積去離子水沖洗層析柱中儲存液。
3）平衡：用5倍柱體積的結合Buffer平衡層析柱，使填料處于與目的蛋白相同的緩沖體系下，起到保護蛋白的作用。
4）上樣：將樣品加到平衡好的層析柱中，推薦流速1-5 ml/min，保證目的蛋白與樹脂充分接觸，提高目的蛋白的回收率，收集流出液，待檢測?！咀ⅰ繕悠返恼扯仍黾邮沟眉词股蠘芋w積很少，也會導致層析柱很大的反壓。上樣量不要超過柱子的結合能力。大量的樣品體積也可能造成很大的反壓，使得進樣器更難使用。
5）洗雜：用10-15倍柱體積的洗雜Buffer進行清洗，直到紫外吸收達到一個穩(wěn)定的基線，去除非特異性吸附的雜蛋白，收集洗雜液，待檢測。
6）洗脫：用洗脫Buffer 采用一步法或線性梯度洗脫。一步洗脫中，通常5倍柱體積洗脫液足夠將目的蛋白洗脫下來。也可以用一個小的梯度，例如20倍柱體積或更多，來分離不同結合強度的蛋白質。
7）清洗及保存：依次使用3倍柱體積的結合Buffer和5倍柱體積的去離子水平衡填料，最后再用5倍柱體積的20%的乙醇平衡，然后保存在等體積的20%的乙醇中，置于4℃保存，防止填料被細菌污染。
2 SDS-PAGE檢測
將純化過程中得到的樣品（包括原始樣品、流出組分、洗雜及洗脫組分等）利用SDS-PAGE進行檢測，判定其純化效果。
3 樹脂清洗
隨著一些變性物質的沉淀和蛋白的聚集，往往造成流速和結合載量下降，影響柱子的性能，這時需對柱子進行清洗：
1）去除沉淀或變性物質
① 用2倍柱體積的6 M鹽酸胍溶液進行清洗；
② 用5倍柱體積的PBS，pH 7.4 清洗。
2）去除由于疏水性吸附造成的非特異吸附物質
① 用3-4倍柱體積的70%乙醇或2倍柱體積的1% Triton™ X-100清洗；
② 用5倍柱體積的PBS, pH 7.4 清洗。
注意事項
1）請勿冷凍保存本產品。
2）所有操作過程中，樣本需要在4℃或冰上操作。
3）為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
4）本產品僅作科研用途！
附錄1 常見問題與解答
問題 | 可能原因 | 推薦解決方法 |
柱子反壓過高 | 填料被堵塞 | 清洗填料 |
裂解液中含有微笑的固體顆粒，建議上柱前使用0.22 µm/0.45 µm濾膜過濾。 | ||
樣品純化過程中曲線不穩(wěn) | 樣品或 buffer 中有氣泡 | 趕出氣泡 |
樣品和buffer進行脫氣 | ||
洗脫組分中沒有目的蛋白 | 樣品中抗體濃度太低 | 使用其抗原做配體的介質 |
抗體被降解 | 適當的提高洗脫pH | |
樣品與Protein L結合力低 | 換用Protein A或Protein A/G樹脂純化 | |
回收率逐漸減低 | 上樣量太多 | 減少上樣量 |
柱子太臟，載量降低 | 清洗樹脂 |
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