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產品簡介
| 供貨周期 | 現貨 | 應用領域 | 醫(yī)療衛(wèi)生,生物產業(yè),制藥 |
|---|
產品介紹
產品簡介
Catalase Assay Kit 過氧化氫酶檢測試劑盒是一種簡單快速、可通過測試吸光度來檢測動物血清、血漿、組織以及全血、紅細胞、培養(yǎng)細胞、培養(yǎng)液中的過氧化氫酶（CAT）的活力。過氧化氫酶（CAT）催化H2O2分解為水和氧氣，當加入鉬酸銨后，反應迅速終止，剩余的H2O2與試劑盒中的鉬酸銨發(fā)生絡合反應，得到淡黃色的產物。這個黃色產物的最大吸收波長是405 nm 。所以，可以通過檢測405 nm處的吸光度，來測定樣品中的過氧化氫酶（CAT）的活力。
羥基自由基（OH-）是很活潑的活性氧，它能與細胞內的許多有機物、核酸、有機酸等等發(fā)生氧化反應，破壞性。過氧化氫酶（CAT）廣泛分布在血清、血漿、紅細胞等中，能分解活性氧，保護細胞免受破壞，因而測定過氧化氫酶（CAT）的活力至關重要。
產品信息
貨號 | 50108ES60 |
規(guī)格 | 100 T |
組分信息
組分名稱 | 50108-A（試劑一） | 50108-B（試劑二） | 50108-C（試劑三） | 50108-D（試劑四） |
規(guī)格 | 100 mL | 10 mL | 7 g | 10 mL |
儲存條件
2～8 ℃避光保存，保質期6個月。
使用說明
溶解試劑三：向試劑三（顯色粉劑）中加入100 mL的雙蒸水溶解；放入2～8℃冰箱避光保存。（如果底部有不溶的粉末沉淀，直接取上清即可，不影響實驗結果）
預熱：實驗之前，先將試劑盒中的試劑一和試劑二放在37 ℃水浴鍋中預熱10～20 min，以備后用。
加樣品，檢測吸光度：
血清、血漿樣本吸光度檢測：
血清、血漿樣本 | ||
實驗組 | 對照組 | |
試劑一（37 ℃預熱） | 1.0 mL | 1.0 mL |
試劑二（37 ℃預熱） | 0.1 mL | 0.1 mL |
血清/血漿 | 0.1 mL | |
混勻后，在37 ℃中準確加熱1 min（注意：一定要準確加熱反應1 min），然后加試劑三和試劑四； | ||
試劑三 | 1.0 mL | 1.0 mL |
試劑四 | 0.1 mL | 0.1 mL |
血清/血漿 | 0.1 mL | |
混勻，在光徑為0.5 cm，波長為405 nm處，雙蒸水調零，檢測吸光度。 | ||
全血、紅細胞樣本吸光度檢測：
1) 1：99溶血液配制：向50 μL全血或紅細胞樣本中加雙蒸水至5 mL，混勻，放置10 min，待測；
2) 檢測吸光度：
全血、紅細胞樣本 | |||
實驗組 | 空白對照組 | 自身對照組 | |
蒸餾水 | 0.05 mL | 2.1 mL | |
1：99溶血液 | 0.05 mL | 0.05 mL | |
試劑一（37 ℃預熱） | 1.0 mL | 1.0 mL | |
試劑二（37 ℃預熱） | 0.1 mL | 0.1 mL | |
混勻后，在37 ℃中準確加熱1 min（注意：一定要準確加熱反應1 min），然后加試劑三； | |||
試劑三 | 1.0 mL | 1.0 mL | |
混勻，在光徑為0.5 cm，波長為405 nm處，雙蒸水調零，檢測吸光度。 | |||
組織樣本吸光度檢測：
1) 組織勻漿液制備：按組織重量（g）：生理鹽水體積（mL）=1:9的比例，在冰水浴條件下，制備成10%的組織勻漿，2500 r/min離心10 min，取上清；再用生理鹽水稀釋到最佳取樣濃度，一般稀釋成：5%、2%、1%、0.5%、0.25%、0.1%等不同的取樣濃度，其中小鼠肝臟勻漿取樣濃度為0.25%～1%。
2) 檢測吸光度：
組織樣本 | ||
實驗組 | 對照組 | |
試劑一（37 ℃預熱） | 1.0 mL | 1.0 mL |
試劑二（37 ℃預熱） | 0.1 mL | 0.1 mL |
組織勻漿 | 0.05 mL | |
混勻后，在37 ℃中準確加熱1 min（注意：一定要準確加熱反應1 min），然后加試劑三和試劑四； | ||
試劑三 | 1.0 mL | 1.0 mL |
試劑四 | 0.1 mL | 0.1 mL |
組織勻漿 | 0.05 mL | |
混勻，在光徑為0.5 cm，波長為405 nm處，雙蒸水調零，檢測吸光度 | ||
過氧化氫酶活力計算
血清、血漿中過氧化氫酶（CAT）活力計算（每毫升血清或血漿每秒鐘分解1 μmol H2O2的量為一個活力單位）
血清中過氧化氫酶活力（U/mL）=（對照組OD值－實驗組OD值）×
×樣本測試前稀釋倍數
血紅蛋白中過氧化氫酶（CAT）活力計算（每毫克血紅蛋白每秒鐘分解1 μmol H2O2的量為一個活力單位）
溶血液中過氧化氫酶活力（U/mgHb）=（空白對照組OD值＋自身對照組OD值－實驗組OD值）×
÷血紅蛋白濃度（mgHb/mL）
組織勻漿中過氧化氫酶（CAT）活力計算（每毫克組織蛋白每秒鐘分解1 μmol H2O2的量為一個活力單位）
組織勻漿中過氧化氫酶活力（U/mgprot）=（對照組OD值—實驗組OD值）× 
÷待測樣本蛋白濃度（mgprot/mL）
注意事項
加入試劑一和試劑二之前，要進行37 ℃預熱。
試劑三溶解、保存后，使用前有沉淀，直接取上清即可，不影響實驗結果。
當天冷時試劑四會凝固，使用前37 ℃水浴加熱至透明即可。
為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
本產品僅作科研用途！
