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翌圣生物科技(上海)股份有限公司

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11300ES第五代耐熱逆轉(zhuǎn)錄酶
參考價(jià): 面議
具體成交價(jià)以合同協(xié)議為準(zhǔn)
  • 11300ES 產(chǎn)品型號(hào)
  • Yeasen/翌圣生物 品牌
  • 生產(chǎn)商 廠商性質(zhì)
  • 上海市 所在地

訪問(wèn)次數(shù):461更新時(shí)間:2025-02-07 13:52:26

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產(chǎn)品簡(jiǎn)介
供貨周期 現(xiàn)貨 應(yīng)用領(lǐng)域 醫(yī)療衛(wèi)生,生物產(chǎn)業(yè)
Hifair® V Reverse Transcriptase是在Hieff® M-MLV (H-) Reverse Transcriptase基礎(chǔ)上通過(guò)基因工程技術(shù)得到新逆轉(zhuǎn)錄酶,與Hieff® M-MLV (H-) Reverse Transcriptase相比,其熱穩(wěn)定性大幅度提高,可耐受高達(dá)60℃的反應(yīng)溫度,適合具有復(fù)雜二級(jí)結(jié)構(gòu)的RNA模板的逆轉(zhuǎn)錄。同時(shí),該酶增強(qiáng)了與模板的親和力,適合少量
產(chǎn)品介紹

產(chǎn)品簡(jiǎn)介

 

Hifair® V Reverse Transcriptase是在Hieff® M-MLV (H-) Reverse Transcriptase基礎(chǔ)上通過(guò)基因工程技術(shù)得到新逆轉(zhuǎn)錄酶,與Hieff® M-MLV (H-) Reverse Transcriptase相比,其熱穩(wěn)定性大幅度提高,可耐受高達(dá)60℃的反應(yīng)溫度,適合具有復(fù)雜二級(jí)結(jié)構(gòu)的RNA模板的逆轉(zhuǎn)錄。同時(shí),該酶增強(qiáng)了與模板的親和力,適合少量模板以及低拷貝基因的逆轉(zhuǎn)錄。Hifair® V Reverse Transcriptase合成全長(zhǎng)cDNA的能力也有了提升,可擴(kuò)增長(zhǎng)達(dá)10 kb的cDNA。

 

產(chǎn)品信息

 

貨號(hào)

11300ES92 / 11300ES93 / 11300ES98

規(guī)格

10,000 U / 5×10,000 U/ 200,000 U

單位定義

Poly(A) .Oligo(dT)為模板-引物,在37℃,10 min內(nèi),將1 nmol的dTTP摻入為酸不溶性物質(zhì)所需要的酶量定義為1個(gè)活性單位(U)。

 

組分信息

 

組分編號(hào)

組分名稱(chēng)

11300ES92

11300ES93

11300ES98

11300-A

Hifair® V Reverse Transcriptase (200 U/μL)

50 μL

5×50 μL

1 mL

11300-B

5×Hifair® V Buffer

250 μL

1.25 mL

5 mL

 

儲(chǔ)存條件

 

-25~-15℃保存,有效期2年。

 

使用說(shuō)明

 

第一鏈cDNA合成操作步驟

1. RNA變性(此步為可選步驟,RNA變性有助于打開(kāi)二級(jí)結(jié)構(gòu),可在很大程度上提高第一鏈cDNA的產(chǎn)量。)

組分

使用量

RNase free ddH2O

to 13 μL

Oligo (dT)18 (50 μM)

or Random Primers (50 μM)

or Gene Specific Primers (2 μM)

1 μL

or 1 μL

or 1 μL

模板RNA

Total RNA: 1 ng -5 μgmRNA: 1-500 ng

65℃加熱5 min,迅速置于冰上冷卻2 min。短暫離心收集反應(yīng)液后,加入下表中的逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)液,并輕輕吹打混勻。

2. 逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)體系配制(20 μL體系)

組分

使用量

上一步的反應(yīng)液

13 μL

5×Hifair® V Buffer

4 μL

dNTP Mix (10 mM)

1 μL

Hifair® V Reverse Transcriptase (200 U/μL)

1 μL

RNase inhibitor (40 U/µL)

1 μL

3. 逆轉(zhuǎn)錄程序設(shè)置

溫度

時(shí)間

25℃*

5 min

42℃**

15~30 min

85℃***

5 min

*當(dāng)使用Random Primers時(shí),需25℃,孵育5 min;若使用Oligo (dT)18Gene Specific Primers,此步可省略。

**逆轉(zhuǎn)錄溫度:推薦使用42℃。對(duì)于高GC含量模板或者復(fù)雜二級(jí)結(jié)構(gòu)的模板,可將逆轉(zhuǎn)錄溫度提高至50~55℃。

***85℃加熱5 min,目的是使逆轉(zhuǎn)錄酶失活。

逆轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物可立即用于后續(xù)PCR或qPCR反應(yīng),也可-20℃短期保存,若需長(zhǎng)期保存,建議分裝后,于-80℃保存,避免反復(fù)凍融。

該逆轉(zhuǎn)錄酶也適用于一步法RT-qPCR,推薦每25 μL反應(yīng)體系,添加10-20 U逆轉(zhuǎn)錄酶,也可根據(jù)實(shí)際情況逐步增加逆轉(zhuǎn)錄酶用量。

 

注意事項(xiàng)

 

1. 請(qǐng)保持實(shí)驗(yàn)區(qū)域潔凈;操作時(shí)需穿戴干凈的手套、口罩;實(shí)驗(yàn)所用耗材均需保證RNase free,以防止RNase污染。

2. 所有操作均應(yīng)在冰上進(jìn)行,防止RNA降解。

3. 為保證高效率逆轉(zhuǎn)錄,建議使用高質(zhì)量的RNA樣本。

4. 本產(chǎn)品僅用作科研用途。

5. 為了您的安全和健康,請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并佩戴一次性手套操作。




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