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翌圣生物科技（上海）股份有限公司
初級(jí)會(huì)員·13年
11300ES第五代耐熱逆轉(zhuǎn)錄酶
| 參考價(jià): | 面議 |
具體成交價(jià)以合同協(xié)議為準(zhǔn)- 11300ES 產(chǎn)品型號(hào)
- Yeasen/翌圣生物 品牌
- 生產(chǎn)商 廠商性質(zhì)
- 上海市 所在地
訪問(wèn)次數(shù)：461更新時(shí)間：2025-02-07 13:52:26
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產(chǎn)品簡(jiǎn)介
| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 醫(yī)療衛(wèi)生,生物產(chǎn)業(yè) |
|---|
產(chǎn)品介紹
產(chǎn)品簡(jiǎn)介
Hifair® V Reverse Transcriptase是在Hieff® M-MLV (H-) Reverse Transcriptase基礎(chǔ)上通過(guò)基因工程技術(shù)得到新逆轉(zhuǎn)錄酶，與Hieff® M-MLV (H-) Reverse Transcriptase相比，其熱穩(wěn)定性大幅度提高，可耐受高達(dá)60℃的反應(yīng)溫度，適合具有復(fù)雜二級(jí)結(jié)構(gòu)的RNA模板的逆轉(zhuǎn)錄。同時(shí)，該酶增強(qiáng)了與模板的親和力，適合少量模板以及低拷貝基因的逆轉(zhuǎn)錄。Hifair® V Reverse Transcriptase合成全長(zhǎng)cDNA的能力也有了提升，可擴(kuò)增長(zhǎng)達(dá)10 kb的cDNA。
產(chǎn)品信息
貨號(hào) | 11300ES92 / 11300ES93 / 11300ES98 |
規(guī)格 | 10,000 U / 5×10,000 U/ 200,000 U |
單位定義 | 以Poly(A) .Oligo(dT)為模板-引物，在37℃，10 min內(nèi)，將1 nmol的dTTP摻入為酸不溶性物質(zhì)所需要的酶量定義為1個(gè)活性單位（U）。 |
組分信息
組分編號(hào) | 組分名稱(chēng) | 11300ES92 | 11300ES93 | 11300ES98 |
11300-A | Hifair® V Reverse Transcriptase (200 U/μL) | 50 μL | 5×50 μL | 1 mL |
11300-B | 5×Hifair® V Buffer | 250 μL | 1.25 mL | 5 mL |
儲(chǔ)存條件
-25~-15℃保存，有效期2年。
使用說(shuō)明
第一鏈cDNA合成操作步驟
1. RNA變性（此步為可選步驟，RNA變性有助于打開(kāi)二級(jí)結(jié)構(gòu)，可在很大程度上提高第一鏈cDNA的產(chǎn)量。）
組分 | 使用量 |
RNase free ddH2O | to 13 μL |
Oligo (dT)18 (50 μM) or Random Primers (50 μM) or Gene Specific Primers (2 μM) | 1 μL or 1 μL or 1 μL |
模板RNA | Total RNA: 1 ng -5 μg或mRNA: 1-500 ng |
65℃加熱5 min，迅速置于冰上冷卻2 min。短暫離心收集反應(yīng)液后，加入下表中的逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)液，并輕輕吹打混勻。
2. 逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)體系配制（20 μL體系）
組分 | 使用量 |
上一步的反應(yīng)液 | 13 μL |
5×Hifair® V Buffer | 4 μL |
dNTP Mix (10 mM) | 1 μL |
Hifair® V Reverse Transcriptase (200 U/μL) | 1 μL |
RNase inhibitor (40 U/µL) | 1 μL |
3. 逆轉(zhuǎn)錄程序設(shè)置
溫度 | 時(shí)間 |
25℃* | 5 min |
42℃** | 15~30 min |
85℃*** | 5 min |
*當(dāng)使用Random Primers時(shí)，需25℃，孵育5 min；若使用Oligo (dT)18或Gene Specific Primers，此步可省略。
**逆轉(zhuǎn)錄溫度：推薦使用42℃。對(duì)于高GC含量模板或者復(fù)雜二級(jí)結(jié)構(gòu)的模板，可將逆轉(zhuǎn)錄溫度提高至50~55℃。
***85℃加熱5 min，目的是使逆轉(zhuǎn)錄酶失活。
逆轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物可立即用于后續(xù)PCR或qPCR反應(yīng)，也可-20℃短期保存，若需長(zhǎng)期保存，建議分裝后，于-80℃保存，避免反復(fù)凍融。
該逆轉(zhuǎn)錄酶也適用于一步法RT-qPCR，推薦每25 μL反應(yīng)體系，添加10-20 U逆轉(zhuǎn)錄酶，也可根據(jù)實(shí)際情況逐步增加逆轉(zhuǎn)錄酶用量。
注意事項(xiàng)
1. 請(qǐng)保持實(shí)驗(yàn)區(qū)域潔凈；操作時(shí)需穿戴干凈的手套、口罩；實(shí)驗(yàn)所用耗材均需保證RNase free，以防止RNase污染。
2. 所有操作均應(yīng)在冰上進(jìn)行，防止RNA降解。
3. 為保證高效率逆轉(zhuǎn)錄，建議使用高質(zhì)量的RNA樣本。
4. 本產(chǎn)品僅用作科研用途。
5. 為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并佩戴一次性手套操作。
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