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翌圣生物科技（上海）股份有限公司
初級(jí)會(huì)員·13年
15066ESFuniCut® EarI限制性內(nèi)切酶
| 參考價(jià) | 面議 |
具體成交價(jià)以合同協(xié)議為準(zhǔn)
- 15066ES 型號(hào)
- Yeasen/翌圣生物 品牌
- 生產(chǎn)商 廠商性質(zhì)
- 上海市 所在地
訪問(wèn)次數(shù)：259更新時(shí)間：2025-02-07 13:35:27
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產(chǎn)品簡(jiǎn)介
| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 醫(yī)療衛(wèi)生,生物產(chǎn)業(yè) |
|---|
產(chǎn)品介紹
產(chǎn)品簡(jiǎn)介
FuniCut® 系列內(nèi)切酶是通過(guò)基因工程重組技術(shù)，可在5~15 min內(nèi)精確完成DNA切割的快速限制性內(nèi)切酶，適用于快速切割質(zhì)粒DNA、PCR產(chǎn)物、基因組DNA等。FuniCut® 系列快速內(nèi)切酶共用一種酶切緩沖液，從而簡(jiǎn)化了酶切反應(yīng)體系，另外，有良好的酶活冗余度，可輕松處理底物過(guò)量或困難模板的酶切。
產(chǎn)品信息
貨號(hào) | 15066ES30 |
規(guī)格 | 30 T |
識(shí)別位置 | 5'-CTCTTC(N)?↓-3' 3'- GAGAAG(N)?↑-5' |
推薦反應(yīng)條件 | 1×FuniCut® 緩沖液；37°C孵育 |
酶活 | 20 U/μL |
失活條件 | 80℃溫育20 min |
同裂酶 | Eam1104I, Bst6I |
組分信息
組分編號(hào) | 組分名稱 | 15066ES30 |
15066-A | FuniCut® EarI | 30 μL |
15066-B | 10×FuniCut® Buffer | 1 mL |
15066-C | 10×FuniCut® Color Buffer* | 1 mL |
*10×FuniCut® Color Buffer包括紅色和黃色示蹤染料，可將產(chǎn)物直接用于凝膠電泳。FuniCut® Color Buffer的紅色染料與2500 bp雙鏈DNA片段在1%瓊脂糖凝膠中遷移速率接近；黃色染料與10 bp雙鏈DNA片段在1%瓊脂糖凝膠中遷移速率接近。
儲(chǔ)存條件
-25~-15℃保存，有效期2年。
注意事項(xiàng)
1. 3 h孵育未表現(xiàn)星號(hào)活性，延時(shí)酶切可能出現(xiàn)星號(hào)活性。
2. 受CpG甲基化影響，剪切可能受阻。
3. 本產(chǎn)品僅作科研用途。
5. 為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并佩戴一次性手套操作。
使用方法
1. DNA快速酶切流程
1) 按如下建議的加樣順序配制體系反應(yīng)液（冰上操作）
組分 | 質(zhì)粒DNA | PCR產(chǎn)物 | 基因組DNA |
ddH2O | 15 μL | 16 μL | 30 μL |
10×FuniCut® Buffer或10×FuniCut® Color Buffer | 2 μL | 3 μL* | 5 μL |
底物DNA | 2 μL (~1 μg) | 10 μL (~0.2 μg) | 10 μL (5 μg) |
FuniCut® EarI | 1 μL | 1 μL | 5 μL |
Total | 20 μL | 30 μL | 50 μL |
*本體系指已純化后的PCR產(chǎn)物。未純化的PCR產(chǎn)物具備一定的離子強(qiáng)度，10×FuniCut® Buffer加入量可適當(dāng)減少至2 μL。若下一步進(jìn)行克隆等實(shí)驗(yàn)，酶切前需純化PCR產(chǎn)物。
2) 輕柔吸打或輕彈管壁以混勻（切勿渦旋），然后瞬時(shí)離心以收集掛壁液滴。
3) 37°C孵育15 min（質(zhì)粒），或15~30 min（PCR產(chǎn)物），或30~60 min（基因組DNA）。
4) 80℃溫育20 min即可使酶失活，停止反應(yīng)(可選)。
5) 如果使用FuniCut® Color Buffer進(jìn)行酶切反應(yīng)，得到的產(chǎn)物可直接上樣電泳。
2. 雙酶切或多酶切
1) 每種內(nèi)切酶的用量為1 μL，并根據(jù)需要適當(dāng)擴(kuò)大反應(yīng)體系。
2) 所有內(nèi)切酶的體積總和不得超過(guò)總反應(yīng)體系的1/10。
3) 如果選用的幾種內(nèi)切酶的最適反應(yīng)溫度不同，應(yīng)先以最適溫度低的酶開始酶切，再添加最適溫度較高的酶，以較高的溫度進(jìn)行孵育。
3. 質(zhì)粒的擴(kuò)大反應(yīng)體系
組分 | 體積（20 μL） | 體積（20 μL） | 體積（50 μL）* |
DNA | 1 μg | 2 μg | 5 μg |
10×FuniCut® Buffer或10×FuniCut® Color Buffer | 2 μL | 2 μL | 5 μL |
FuniCut® EarI | 1 μL | 2 μL | 5 μL |
Total | 20 μL | 20 μL | 50 μL |
*如果總反應(yīng)體系大于20 μL，可使用水浴、金屬浴或沙浴，并增加孵育時(shí)間。
4. 不同DNA中的識(shí)別位點(diǎn)數(shù)
λDNA | ΦX174 | pBR322 | pUC57 | pUC18/19 | SV40 | M13mp18/19 | Adeno2 |
34 | 2 | 2 | 3 | 3 | 1 | 2 | 29 |
5. 甲基化修飾影響
Dam | Dcm | CpG | EcoKI | EcoBI |
無(wú)影響 | 無(wú)影響 | 剪切受影響 | 無(wú)影響 | 無(wú)影響 |
6. 不同反應(yīng)緩沖液中的活性*
反應(yīng)緩沖液 | FuniCut® Buffer | Thermo Scientific FastDigest Buffer | NEB CutSmart® Buffer | Takara QuickCut™ Buffer |
活性 | 100% | 12.5% | 100% | 25% |
*活性數(shù)據(jù)來(lái)自翌圣生物限制酶標(biāo)準(zhǔn)反應(yīng)體系下的檢測(cè)。
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